微生物檢驗(yàn)的基本操作技術(shù)匯總-無菌操作

12/12微生物檢驗(yàn)的基本操作技術(shù)匯總--無菌操作一、無菌操作技術(shù)1、定義是指在執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過程中，防止一切微生物侵入機(jī)體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法；無菌操作技術(shù)是微生物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)，是保證微生物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確和順利完成的重要環(huán)節(jié)。2、內(nèi)容無菌操作技術(shù)主要包括兩方面：1）創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境。包括提供密閉的培養(yǎng)容器、培養(yǎng)容器的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌等；2）在操作和培養(yǎng)過程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。3、無菌操作原則1）在執(zhí)行無菌操作時(shí)，必須明確物品的無菌區(qū)和非無菌區(qū)，接種時(shí)必須穿工作服、戴工作帽應(yīng)在進(jìn)無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簦?）在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，進(jìn)行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼3次后使用。嚴(yán)禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的鉗、鑷子等；3）從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不能觸及試管或平皿邊；4）接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒；5）接種環(huán)或接種針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必須時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處；6）吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。傾倒平板應(yīng)在超凈臺內(nèi)操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時(shí)需反復(fù)用酒精燈燒。二、無菌操作的環(huán)境要求1、無菌室（1）無菌室的結(jié)構(gòu)：更衣間、緩沖間、操作間；（2）無菌室的消毒和防污染?每日（使用前）紫外線照射（0.5~1小時(shí)）；?每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒；?每季度用甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時(shí)），特殊情況下可增加熏蒸頻次。（3）無菌室使用要求①無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作臺面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品；②無菌室使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外線，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響；③處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無菌室操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。在無菌室內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有過濾裝置。2、超凈工作臺超凈臺的使用與保養(yǎng)：（1）風(fēng)速穩(wěn)定，且符合要求；（2）使用前開啟紫外燈照射30分鐘以上；（3）讓超凈臺預(yù)工作10－15分鐘；（4）使用完畢后，用70%酒精將臺面和臺內(nèi)四周擦拭干凈。3、無菌器材（1）滅菌器材：玻璃器皿、培養(yǎng)基、無菌衣等；（2）消毒器材：無菌室內(nèi)的凳子、試管架、天平、工作臺、手等。（3）無菌間一般只允許放置無菌操作臺、轉(zhuǎn)椅等物品；無菌操作臺上一般只允許擺放以下物品：酒精燈、打火機(jī)、接種針、消毒棉球、洗耳球、鑷子、油性筆、滅菌平皿、試管架、滅菌吸管、電子天平、250ml滅菌三角瓶、培養(yǎng)基、均質(zhì)器等。三、無菌操作的基本技術(shù)1、無菌接種操作培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個(gè)過程叫做無菌接種操作。在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無菌操作。2、微生物檢驗(yàn)過程中的無菌操作要求（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動作；（2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放；（3）在正火焰上方操作；（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；（5）在接種培養(yǎng)物時(shí)，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)；（6）不