試劑、試液、培養(yǎng)基和檢定菌管理規(guī)程(完整版)實(shí)用資料

試劑、試液、培養(yǎng)基和檢定菌管理規(guī)程（完整版）實(shí)用資料(可以直接使用，可編輯完整版實(shí)用資料，歡迎下載）

試劑、試液、培養(yǎng)基和檢定菌管理規(guī)程（完整版）實(shí)用資料(可以直接使用，可編輯完整版實(shí)用資料，歡迎下載）分發(fā)部門(mén)及份數(shù):質(zhì)量管理部1份、采購(gòu)部1份目的:為使購(gòu)進(jìn)的試劑、試藥、培養(yǎng)基、檢定菌能妥善保存,有計(jì)劃合理地使用,制訂本規(guī)程。范圍:檢驗(yàn)使用的標(biāo)準(zhǔn)品、菌種、試劑與試液。職責(zé):1.采購(gòu)部:采購(gòu)員負(fù)責(zé)試劑、試藥、培養(yǎng)基和檢定菌的采購(gòu)。2.檢驗(yàn)人員對(duì)本制度實(shí)施負(fù)責(zé),檢驗(yàn)室主任對(duì)本制度有效執(zhí)行承擔(dān)監(jiān)督檢查責(zé)任。內(nèi)容:1.試劑、試藥(含基準(zhǔn)物質(zhì)、培養(yǎng)基和檢定菌的購(gòu)進(jìn)1.1有計(jì)劃購(gòu)進(jìn)試劑、試藥(含基準(zhǔn)物質(zhì)、培養(yǎng)基和檢定菌。由QC填寫(xiě)需求計(jì)劃單,由供應(yīng)部統(tǒng)一從可靠的供應(yīng)商購(gòu)進(jìn),并對(duì)供應(yīng)商進(jìn)行評(píng)估。1.2藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來(lái)至認(rèn)可的國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株,或是用于標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株,例如美國(guó)菌種收集中心(ATCC和中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心(CMCC。1.3微生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)菌種,規(guī)定用中國(guó)藥品生物制品檢定所或當(dāng)?shù)厮帣z所提供的冷凍干燥品。2.試劑、試藥(含基準(zhǔn)物質(zhì)、培養(yǎng)基和檢定菌的接收2.1試劑、試藥(含基準(zhǔn)物質(zhì)、培養(yǎng)基領(lǐng)取后,需有專人記錄,接收應(yīng)有接收記錄,必要時(shí)應(yīng)在每個(gè)試劑瓶或包裝箱上貼上標(biāo)簽,標(biāo)簽上應(yīng)注明接收日期和有效期;試劑的首次開(kāi)啟者應(yīng)將試劑的開(kāi)啟日期同時(shí)標(biāo)注于試劑標(biāo)簽上并簽名。2.2檢定菌應(yīng)設(shè)專人接收保管,此人應(yīng)受過(guò)專業(yè)培訓(xùn),有足夠的菌種保存經(jīng)驗(yàn)。接收菌種時(shí),應(yīng)核實(shí)菌種的名稱、編號(hào)、形態(tài)特征等,并調(diào)查清楚菌種的保存條件和注意事項(xiàng)。2.3填寫(xiě)菌種接收登記表。內(nèi)容有:菌種名稱、菌種編號(hào)、菌種批號(hào)、購(gòu)買(mǎi)日期、菌種來(lái)源等。3.試劑、試藥(含基準(zhǔn)物質(zhì)、培養(yǎng)基的有效期3.1用于分析測(cè)試和試驗(yàn)的化學(xué)、生物試劑和培養(yǎng)基其效期以其生產(chǎn)廠家標(biāo)簽上規(guī)定的有效期為準(zhǔn)。3.2對(duì)沒(méi)有規(guī)定有效期的普通固體、液體化學(xué)試劑,如未出現(xiàn)結(jié)塊、變色、潮解等現(xiàn)象,可繼續(xù)使用,對(duì)于化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的試藥自開(kāi)瓶之日起最長(zhǎng)有效期不應(yīng)超過(guò)5年。3.3對(duì)性質(zhì)不穩(wěn)定的化學(xué)和生物試劑,若未提供有效期的其有效期要依據(jù)其相關(guān)的資料和文獻(xiàn)來(lái)確定。3.4對(duì)過(guò)有效期的試劑及變質(zhì)的試劑,要及時(shí)報(bào)廢并銷毀。4.試劑、試藥,培養(yǎng)基的存放4.1試劑、試藥及培養(yǎng)基按其儲(chǔ)存條件分開(kāi)定位放置。在試劑存放的柜子內(nèi)貼上標(biāo)簽,便于查找。必要時(shí)應(yīng)在容器上標(biāo)注接收日期,特別情況下(如:包裝破損,標(biāo)簽不清時(shí)在接收或使用前,還應(yīng)對(duì)試劑進(jìn)行鑒別或其它檢驗(yàn)。4.2各種試劑,應(yīng)按試劑瓶上標(biāo)注的貯存條件貯存。試液要避免陽(yáng)光直射,需避光的試劑和試液要用黑色紙包或棕色瓶盛裝。4.3基準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)有專人保管,列表備查?；鶞?zhǔn)物質(zhì)按其標(biāo)簽上的要求進(jìn)行存放。4.4基準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)有專用干燥器。干燥器中干燥劑應(yīng)經(jīng)常檢查,及時(shí)更換。5.試劑和試液的配制5.1試液配制必須按現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行配制。所用試劑的純度無(wú)特殊規(guī)定的情況下,一般使用分析純。色譜分析應(yīng)用色譜純?cè)噭?。在無(wú)特殊規(guī)定時(shí),溶劑一般用純化水,色譜分析時(shí)所用水必須為超純化水或重蒸餾水。5.2試液瓶的標(biāo)簽須標(biāo)明品名、濃度、批號(hào)、配制時(shí)間、配制人和有效期。5.3試液的有效期:試液有效期一般不超過(guò)半年,緩沖溶液有效期為3個(gè)月,配制好的流動(dòng)相(不含鹽的有效期為一周。含鹽的流動(dòng)相及含水量≥80%的流動(dòng)相應(yīng)臨用新配。過(guò)濾好的純有機(jī)溶劑有效期為1個(gè)月。純化水有效期為一周,超純水臨用新制。5.4有毒試劑、試液在標(biāo)簽上要注明。6.試劑、試藥(基準(zhǔn)物質(zhì)的取用6.1取用時(shí),應(yīng)核對(duì)品名,避免拿錯(cuò)。6.2取用存放在冰箱中基準(zhǔn)物質(zhì)時(shí),使用前拿出放置干燥器中至室溫后再打開(kāi)瓶蓋稱量,以免水份進(jìn)入,影響基準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量。6.3用過(guò)后,應(yīng)盡快將原包裝整理好,并及時(shí)放回原處,以免混淆或影響他人使用。7.試劑、試藥(基準(zhǔn)物質(zhì)的管理7.1未經(jīng)管理人員同意,外部人員不得擅自拿走試劑。7.2劇毒試劑、試藥管理見(jiàn)PO-QC013《檢驗(yàn)用劇毒化學(xué)試劑管理規(guī)程》。8.培養(yǎng)基的管理與保存8.1培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)的需要,將各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按一定比例加以調(diào)配而成。培養(yǎng)基必須在陰涼處存放,專人保管。8.2實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基可于121℃濕熱滅菌20分鐘或按各種培養(yǎng)基使用說(shuō)明上的滅菌條件,滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)保存2-8℃,防止被污染。8.3使用過(guò)的培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓滅活后方可倒入廢液缸,以免污染環(huán)境,堵塞下水道;使用過(guò)的培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅活處理后,應(yīng)有相應(yīng)的滅活記錄;8.4培養(yǎng)基開(kāi)瓶后,在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)結(jié)塊,變色,吸潮等時(shí),則應(yīng)停止使用。9.檢定菌的管理與保存9.1菌種的保管應(yīng)設(shè)專人負(fù)責(zé),應(yīng)專門(mén)冰箱保管,保證安全,防止意外。9.2菌種由微生物室置于2℃~8℃冰箱保存,并應(yīng)備有2套,一套作接種專用,另一套供日常工作使用。接種后填寫(xiě)“接種記錄”。9.3檢驗(yàn)所用的各種檢定菌,必須有專用記錄卡,其內(nèi)容包括:菌種名稱,編號(hào),來(lái)源,傳代日期、有效期、操作人、復(fù)核人等,每個(gè)菌種應(yīng)逐項(xiàng)填寫(xiě)清楚。保管人如有變更,須做好交接。9.4對(duì)于購(gòu)買(mǎi)的標(biāo)準(zhǔn)菌株凍干管,直接存于2℃~8℃冰箱保存,可以傳代后選用斜面保存或液體石蠟斜面保存,液體石蠟斜面保存可以保存更長(zhǎng)時(shí)間。9.5菌種保存時(shí)應(yīng)將菌種分別保存于兩個(gè)冰箱中,以防因保管條件不適而導(dǎo)致菌種全部死亡。9.6每天檢查一次保存菌種的冰箱溫度,并作記錄,每周檢查菌種管的棉塞或橡膠塞是否松動(dòng),菌種外觀及干燥狀態(tài),如有異常應(yīng)及時(shí)處理,并填寫(xiě)菌種檢查記錄。9.7所保存的菌種應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行傳代,一般每1-3個(gè)月傳代一次,菌種傳代次數(shù)不得超過(guò)5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為0代,在菌種傳代中如發(fā)現(xiàn)粗糙型,污染或其它異變,應(yīng)及時(shí)處理。菌種轉(zhuǎn)種,應(yīng)作記錄。9.8使用完后的菌種,需經(jīng)高溫滅菌滅活后,方可倒棄。9.9無(wú)證明,未經(jīng)批準(zhǔn),不得向外提供菌種。卸酸安全操作規(guī)程1.每天班前崗位人員必須參加班前會(huì),講解安全注意事項(xiàng),對(duì)操作人員進(jìn)行安全教育培訓(xùn)。2.操作人員必須遵守公司各項(xiàng)安全管理制度,嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,服從安排,嚴(yán)格管理。3.每天準(zhǔn)確登記硫酸的出入量,準(zhǔn)確記錄上報(bào)車間及相關(guān)管理部門(mén)。4.工作中存在SO2、SO1濃硫酸等有毒有害,強(qiáng)腐蝕性物質(zhì),應(yīng)預(yù)防跑、冒、滴、漏造成對(duì)人體的傷害。5.卸酸前必須穿戴好勞動(dòng)安全防護(hù)用品;即:防護(hù)面罩、耐酸手套,防滑鞋等。6.裝卸時(shí)應(yīng)準(zhǔn)備好妥善應(yīng)急用水,做好安全防范措施,保障安全工作。7.對(duì)裝運(yùn)過(guò)其它物質(zhì)而沒(méi)有清潔干凈或罐內(nèi)有余水的,嚴(yán)禁用于罐裝硫酸。8.檢查酸罐各閥門(mén)是否安全、正常、有效,閥門(mén)是否關(guān)嚴(yán),方可罐裝。9.放酸場(chǎng)所內(nèi)周圍5米嚴(yán)禁站人,卸酸人員隨時(shí)觀察是否有閑雜人員,杜絕其他人員靠近。10.卸酸時(shí)要慢開(kāi)閥門(mén),各相關(guān)閥門(mén)開(kāi)度不應(yīng)過(guò)大,防止管道涌酸。11.卸酸過(guò)程中卸酸人員不得離開(kāi)放酸現(xiàn)場(chǎng),密切注意酸罐硫酸容量情況,卸完酸后關(guān)閉好相關(guān)閥門(mén),嚴(yán)格杜絕出現(xiàn)降槽現(xiàn)場(chǎng)的發(fā)生。12.各操作人員應(yīng)嚴(yán)格遵守以上各操作規(guī)程,安全管理制度,嚴(yán)格遵守危險(xiǎn)化學(xué)品有關(guān)法律、法規(guī)。保障生產(chǎn)安全、人生安全、設(shè)備安全,保障生產(chǎn)正常進(jìn)行。濃硫酸使用注意事項(xiàng)濃硫酸是一種無(wú)色無(wú)味粘稠液體。具有強(qiáng)腐蝕性和強(qiáng)氧化性,在儲(chǔ)存和使用過(guò)程中一定要嚴(yán)格按照規(guī)范操作,注意安全。一、濃硫酸的危害1、健康危害:對(duì)皮膚、粘膜等組織有強(qiáng)烈的刺激和腐蝕作用。蒸氣或霧可引起結(jié)膜炎、結(jié)膜水腫、角膜混濁,以致失明;引起呼吸道刺激,重者發(fā)生呼吸困難和肺水腫;高濃度引起喉痙攣或聲門(mén)水腫而窒息死亡。口服后引起消化道燒傷以致潰瘍;嚴(yán)重者可能有胃穿孔、腹膜炎、腎損害、休克等,口服濃硫酸致死量約為5毫升。皮膚灼傷輕者出現(xiàn)紅斑、重者形成潰瘍,愈后癍痕收縮影響功能。濺入眼內(nèi)可造成灼傷,甚至角膜穿孔、全眼炎以至失明。慢性影響:長(zhǎng)期接觸硫酸霧者,可有鼻粘膜萎縮伴有嗅覺(jué)減退或消失、慢性支氣管炎、肺氣腫、肺硬化和牙齒酸蝕等癥狀。。2、環(huán)境危害:溶液對(duì)水體和土壤可造成污染,硫酸霧也是一種大氣污染。3、燃爆危險(xiǎn):硫酸雖不燃,但很多反應(yīng)卻會(huì)起火或爆炸,如與金屬粉反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生可燃性氣體,與水混合會(huì)大量放熱。著火時(shí)應(yīng)立刻用砂土、干粉滅火器或二氧化碳滅火器滅火。不可用水滅火。二、防護(hù)措施呼吸系統(tǒng)防護(hù):可能接觸硫酸蒸氣或煙霧時(shí),必須佩戴防毒面具或供氣式頭盔。緊急事態(tài)搶救或逃生時(shí),建議佩帶自給式呼吸器或用濕布捂住口鼻。眼睛防護(hù):戴化學(xué)安全防護(hù)眼鏡。防護(hù)服:穿工作服(防腐材料制作和膠鞋。手防護(hù):戴橡膠手套。其它:工作場(chǎng)所應(yīng)通風(fēng)、有水源和消防器材,應(yīng)設(shè)安全淋浴和眼睛沖洗器具。工作后,淋浴更衣。單獨(dú)存放被污染的衣服,洗后再用。保持良好的衛(wèi)生習(xí)慣。三、泄漏應(yīng)急處理若有少量濃硫酸泄漏,可用大量自來(lái)水沖洗,清洗液用廢液桶收集,處理后排放。若有大量濃硫酸泄漏,疏散泄漏污染區(qū)人員至安全區(qū),禁止無(wú)關(guān)人員進(jìn)入污染區(qū),建議應(yīng)急處理人員戴好面罩,穿化學(xué)防護(hù)服。合理通風(fēng),不要直接接觸泄漏物,勿使泄漏物與可燃物質(zhì)(木材、紙、油等接觸,在確保安全情況下堵漏。噴水霧減慢揮發(fā)(或擴(kuò)散,但不要對(duì)泄漏物或泄漏點(diǎn)直接噴水。用沙土、干燥石灰或蘇打灰混合,然后收集運(yùn)至廢物處理場(chǎng)所處置。也可以用大量水沖洗,經(jīng)稀釋的洗水收集處理后排放。四、中毒急救措施皮膚接觸:脫去被污染衣著,用大量2%碳酸氫鈉溶液或清水沖洗20分鐘以上(用布擦?xí)U(kuò)大燒傷面積,就醫(yī)眼睛接觸:提起眼瞼,用流動(dòng)清水或生理鹽水沖洗15min,就醫(yī)吸入:迅速離開(kāi)現(xiàn)場(chǎng)到空氣新鮮處,呼吸困難時(shí)輸氧。給予2-4%碳酸氫鈉溶液霧化吸入。就醫(yī)。食入:誤服者給牛奶、蛋清、植物油等口服,不可催吐。立即就醫(yī)。五、濃硫酸的使用及注意事項(xiàng)注意對(duì)硫酸霧的控制,加強(qiáng)通風(fēng)排氣。車間硫酸霧最高容許濃度:2mg/m3,車間內(nèi)要有方便的沖洗器具。禁止煙火、進(jìn)水進(jìn)食,嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,搬運(yùn)時(shí)輕裝輕放。濃硫酸溶于水后能放出大量的熱,因此濃硫酸稀釋時(shí),常將濃硫酸沿器壁慢慢注入水中(燒瓶用玻璃棒引流,并不斷攪拌,使稀釋產(chǎn)生的熱量及時(shí)散出。切記“酸入水,沿器壁,慢慢倒,不斷攪”。不能將水加入酸中,否則會(huì)產(chǎn)生飛濺,導(dǎo)致灼傷。稀釋好的硫酸應(yīng)冷卻至室溫后存放入試劑瓶中。若不小心將濃硫酸倒在實(shí)驗(yàn)桌上,可先用抹布擦除,再用水沖洗。清洗液收集處理后再排放。六、濃硫酸的儲(chǔ)存應(yīng)儲(chǔ)存于陰涼、干燥、通風(fēng)良好的倉(cāng)庫(kù),應(yīng)與易燃物、還原性物質(zhì)、堿類、金屬粉末等分開(kāi)存放。檸檬酸發(fā)酵菌黑曲霉的誘變育種研究圖61200Gy輻照后,平板培養(yǎng)基中的菌落生長(zhǎng)情況圖7960Gy輻照后,平板培養(yǎng)基中的菌落生長(zhǎng)情況圖8720Gy輻照后,平板培養(yǎng)基中的菌落生長(zhǎng)情況從圖6-8中可以看出,用不同劑量誘變之后菌株出現(xiàn)了明顯的變化。用1200Gy處理的平扳中只長(zhǎng)出了很少的菌落,菌落中央呈碳黑色,菌落周圍的黃斑較大,部分菌落長(zhǎng)出了孢子。用960Gy處理的平板中同樣只長(zhǎng)出了相對(duì)較少的菌落,其中只有個(gè)別菌落的黃斑較大,有部分菌落長(zhǎng)出了白色的菌絲并且沒(méi)有變色圈產(chǎn)生或變色圈較小。用720Gy處理的平板中幾乎長(zhǎng)浦菌落,大部分菌落呈白色,沒(méi)有孢子長(zhǎng)出,菌落相對(duì)較小。由于在720Gy處理的平板中長(zhǎng)出的菌落較多,已經(jīng)無(wú)法看出變色圈的直徑,所以在挑選過(guò)程中沒(méi)有從中調(diào)取菌落。在1200Gy和960Gy處理的平板中長(zhǎng)出的菌落相對(duì)較少,因而用變色圈法調(diào)取了形態(tài)較好的菌落。從理論上講如果單個(gè)平皿長(zhǎng)的菌落較多,應(yīng)該對(duì)菌懸液稀釋相應(yīng)的倍數(shù),這里沒(méi)有從720Gy處理的平板中調(diào)選菌落就有可能忽略部分優(yōu)良菌檸檬酸發(fā)酵菌黑曲霉的誘變育種研究耱5.2%。搖床間溫度為34‘C~36"C,前8小時(shí)270r/rain,之后300r/min,共72h。從表4~5中可以看出經(jīng)過(guò)誘變后有4株產(chǎn)酸率有了明顯的提高,其中b5產(chǎn)酸是12.52%,與對(duì)照相比提高了8.77%,c3產(chǎn)酸是12.11%,與對(duì)照相比提高了5.21%,這兩株產(chǎn)酸水平相對(duì)較高。在本研究中,將突變菌株的產(chǎn)酸高于出發(fā)菌株10%的定為正突變菌株,低于10%的定為負(fù)突變菌株,產(chǎn)酸變化在10%以內(nèi)定為沒(méi)有發(fā)生變化。經(jīng)960GyY一射線輻照+LiCL誘變后,沒(méi)有發(fā)生正變的菌株,出現(xiàn)了較多的負(fù)變株,負(fù)變率高達(dá)38.24%。經(jīng)1200Gyv.射線輻照+LiCL誘變后,大部分菌株沒(méi)有發(fā)生變化,沒(méi)有發(fā)生正變的菌株,只有1株負(fù)變株。用”Co-7輻照單一誘變因子,在600Gy的劑量下突變率在22.7%左右,正突變率在7,7%左右,在1200Gy的劑量下突變率為10.8%左右,正突變率在2.7%左右。很明顯,與單一誘變相比,經(jīng)過(guò)”co叫與LiCl復(fù)合誘變后,菌株的突變率明顯提高,正變率也明顯提高,菌株產(chǎn)酸提高的幅度也明顯提高。為了能更為直觀的分析誘變結(jié)果,我們對(duì)不同劑量的60Coff處理后的搖瓶發(fā)酵72h的菌球形態(tài)逐一進(jìn)行了分析f圖9—11。圖9960Gy的”Co-7處理后,搖瓶發(fā)酵72h的菌球形態(tài)圖101200Gy的“co叫處理后,搖瓶發(fā)酵72h的菌球形態(tài)檸檬酸發(fā)酵菌黑曲霉的誘變育種研究圖11CK菌株搖瓶發(fā)酵72h的菌球形態(tài)菌球形態(tài)是誘變育種過(guò)程中判斷菌株好壞的重要依據(jù)。產(chǎn)酸高的菌株,菌球呈顯規(guī)則的球形,分布均勻,菌球直徑較大,菌絲著生密集。從照片上可以看出經(jīng)過(guò)復(fù)合誘變后不同劑量下的菌求形態(tài)都不是很好。經(jīng)960Gy處理后的菌球呈不規(guī)則球形,氣生菌絲雜亂,部分菌絲頂端長(zhǎng)有頂囊。經(jīng)1200Gy處理后的苗球較為稀少,分布不均,菌球直徑較小,菌絲躍著生稀疏。2.3分析與總結(jié)(1從選育優(yōu)良品種的角度出發(fā),經(jīng)過(guò)LiCI與”Co.q復(fù)合誘變后選育出4株產(chǎn)酸相對(duì)較高的菌株,在原有的基礎(chǔ)之上產(chǎn)酸率有了較為明顯的提高。f2從測(cè)酸結(jié)果和菌球形態(tài)上來(lái)看,經(jīng)過(guò)復(fù)合誘變后大部分菌株沒(méi)有發(fā)生變化,同時(shí)出現(xiàn)了相對(duì)較多的負(fù)變株,對(duì)于這個(gè)結(jié)果的出現(xiàn)有以下推測(cè):由于本實(shí)驗(yàn)選用的菌株是經(jīng)過(guò)”co叫多次輻照后選育出的優(yōu)良菌種,這種突變株對(duì)”Co-;t輻照有一定的抗性,因而大部分菌株的產(chǎn)酸率沒(méi)有發(fā)生變化。LiCl本身的誘變效果不好,可以說(shuō)是一種弱誘變劑,因而大多都采用生長(zhǎng)誘變。就是把Ⅱa添加在培養(yǎng)基中,讓菌株在生長(zhǎng)過(guò)程中逐漸誘變。本實(shí)驗(yàn)在用”Co-'/輻照之前,用LiCl處理單孢子菌懸液改變了細(xì)胞外部的周圍環(huán)境,增強(qiáng)了Y射線對(duì)細(xì)胞的破壞性,U離子對(duì)基因修復(fù)系統(tǒng)中的一些酶產(chǎn)生了阻遏作用。f3從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們也看到了一些不足之處。從表4和表5中我我們看到?jīng)]有發(fā)生正變的菌株,分析原因在實(shí)驗(yàn)方法上我們做的不夠完善。通常劑量的選擇有多種方法,較常用的有高正變率,半致死率,高致死率,若致死率出現(xiàn)馬鞍曲線則選取曲線的馬鞍點(diǎn)等,這是根據(jù)不同的物種和不同的目的而確定的。本實(shí)驗(yàn)的菌株是在前面的基礎(chǔ)之上作的工作,對(duì)”Co-'/誘變的劑量選擇是根據(jù)以前的數(shù)據(jù)確定的,這種劑量的確定是否合理值得懷疑。由于樣品是經(jīng)過(guò)同種劑量多次復(fù)合誘變選育出的優(yōu)庭菌株,在復(fù)合誘變中再次使用同種劑量,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看效果不大。LiCI誘變劑量的選擇是參考相關(guān)文獻(xiàn)【Il,僅采用了一種劑量,在復(fù)合誘變中用這樣的方法選擇劑量理論上不夠完善。針對(duì)這些不足之處,應(yīng)從以下幾個(gè)方面改正:第~在做誘變育種前要對(duì)樣品做以全面的分析,盡管已經(jīng)獲得樣品的相關(guān)數(shù)據(jù),但這些數(shù)據(jù)只能作為參考數(shù)據(jù),應(yīng)在本實(shí)驗(yàn)室的條件下和實(shí)驗(yàn)環(huán)境中重新對(duì)樣品圖12照射6rain,搖瓶發(fā)酵72h的菌球形態(tài)圖13照射8rain,搖瓶發(fā)酵72h的菌球形態(tài)圖14對(duì)照菌株搖瓶發(fā)酵72h的菌球形態(tài)從圖12~14可以看出經(jīng)過(guò)復(fù)合誘變后照射6min和照射8min的菌球都比對(duì)照要多,菌球的大小也比較均勻,但菌球形態(tài)并沒(méi)有呈規(guī)則的球形。照射6min的菌球氣生菌絲相對(duì)較長(zhǎng),菌絲不多。照射6min的菌球菌絲短而密,菌球形態(tài)較為規(guī)則。4.3分析與總結(jié)(1從這一組實(shí)驗(yàn)結(jié)中我們采LiCl和激光復(fù)合誘變的方法選育出74株產(chǎn)酸相對(duì)較高的優(yōu)良菌株,作為本實(shí)驗(yàn)室的初次嘗試采用激光復(fù)合誘變,證實(shí)了這種低能激光在復(fù)合誘變育種過(guò)程中的有效性和可行性。檸檬酸發(fā)酵菌黑曲霉的誘變育種研究致謝本研究經(jīng)過(guò)兩年的努力在沈異凡、毛培宏、金湘老師的指導(dǎo)下最終得以完成，首先要感謝物理科學(xué)與技術(shù)學(xué)院的領(lǐng)導(dǎo)和沈異凡導(dǎo)師能夠給我這次學(xué)習(xí)的機(jī)會(huì)，同時(shí)為我們提供了良好的學(xué)習(xí)和試驗(yàn)環(huán)境，對(duì)我們的試驗(yàn)研究給予了熱心的幫助和支持。本研究是在物理科學(xué)與技術(shù)學(xué)院離子束生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，在這里要特別感謝毛培宏和金湘老師，對(duì)我的實(shí)驗(yàn)給予的支持和幫助，使我們樹(shù)立了嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲袘B(tài)度，讓我們從中能夠?qū)W到很多有用的知識(shí)，必將使我們?cè)谝院蟮膶W(xué)習(xí)工作中受益非淺。在試驗(yàn)過(guò)程中戴康老師、吉建強(qiáng)老師，對(duì)我們的實(shí)驗(yàn)給予熱心的幫助，使我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝽樌瓿?，在這里表示衷心的感謝！最后要感謝對(duì)我們?cè)囼?yàn)給予幫助過(guò)的老師和同學(xué)，在大家的共同努力下我們的試驗(yàn)才最終得以完成，謝謝大家！厭氧好氧工藝治理檸檬酸廢水檸檬酸的生產(chǎn)是通過(guò)發(fā)酵工藝進(jìn)行的，其排放的廢水含有高濃度的可生物降解有機(jī)物，這些有機(jī)物多以碳水化合物及其降解產(chǎn)物為主。世界各國(guó)對(duì)于檸檬酸廢水的處理大都采用厭氧—好氧聯(lián)合處理工藝，而這一工藝的核心——厭氧處理單元，除了采用厭氧接觸工藝和厭氧濾器外，應(yīng)用最多的還是70年代末開(kāi)始用于食品發(fā)酵工業(yè)廢水處理的UASB厭氧反應(yīng)器工藝。

1999年10月，某檸檬酸廠（現(xiàn)改名為某生化）檸檬酸廢水治理工程通過(guò)了山東省環(huán)保局主持的工程驗(yàn)收，工程驗(yàn)收期間厭氧工段CODCr容積負(fù)荷Nv≥8.0kgCODCr/(m3·d)，去除率達(dá)93.2%，工程CODCr總?cè)コ蔬_(dá)98.0%。目前運(yùn)行穩(wěn)定，效果良好?，F(xiàn)將該工程情況做簡(jiǎn)要介紹。1水質(zhì)、水量的確定根據(jù)企業(yè)現(xiàn)有排水管路，所排放的廢水主要包括濃廢水和淡廢水兩部分，濃廢水主要包括廢糖水原液和洗糖水。排放廢水處理后要求達(dá)到《污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)》GB8978—1996味精工業(yè)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，廢水水質(zhì)、水量及排放標(biāo)準(zhǔn)詳見(jiàn)表1。表1廢水水質(zhì)、水量及排放標(biāo)準(zhǔn)排放廢水水量

（m3/d)PH值CODcr

(mg/L)BOD5

(mg/L)SS

(mg/L)氨氮

(mg/L)濃廢水7005-5.516000650045060淡廢水700150065040010合計(jì)14008750（均值）3750（均值）425（均值）35（均值）標(biāo)準(zhǔn)值6-9300150200252工程設(shè)計(jì)2.1工藝流程

由車間排放的濃廢水自流至濃水調(diào)節(jié)池，調(diào)節(jié)pH后由污水泵提升至UASB反應(yīng)器，出水一部分回流至濃水調(diào)節(jié)池，它與UASB反應(yīng)器形成集調(diào)節(jié)、厭氧降解為一體的處理系統(tǒng)；一部分自流至曝氣調(diào)節(jié)池與淡廢水混合，經(jīng)曝氣后由污水泵提升至沉淀池形成一級(jí)好氧系統(tǒng)；此時(shí)沉淀池出水已近達(dá)標(biāo)，再自流至接觸氧化池、氣浮池進(jìn)行好氧生化和物化處理(見(jiàn)圖1)。2.2設(shè)計(jì)參數(shù)的確定

工程設(shè)計(jì)中著重強(qiáng)化厭氧處理單元，同時(shí)好氧工段采用較低的負(fù)荷，以穩(wěn)定剩余污泥，減少污泥排放量，改善污泥脫水性能，具體設(shè)計(jì)參數(shù)見(jiàn)表2。3處理效果和處理成本3.1處理效果

工程屬省控污染治理項(xiàng)目，山東省環(huán)保局委托泰安市環(huán)保監(jiān)測(cè)站于1999年10月8日—9日進(jìn)行了為期兩天的現(xiàn)場(chǎng)采樣、監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)項(xiàng)目為pH、CODCr、BOD5、SS、NH3-N、流量共6項(xiàng)，監(jiān)測(cè)頻率每天采樣4次，均測(cè)單樣，監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。表２處理設(shè)施設(shè)計(jì)參數(shù)設(shè)施名稱參數(shù)附屬設(shè)備備注濃水調(diào)節(jié)池HRT＝８h簡(jiǎn)易石灰中和篩現(xiàn)石灰投加量200kg/d污水泵N=7.5kw，一用一備UASB反應(yīng)器NV=8.0kgCOD/(m3.d)

q=2.25-0.5m3/(m2.h)三相分離器均勻布水器設(shè)備自制曝氣調(diào)節(jié)池HRT=.5h

NV=3.2kgCOD/(m3.d)微孔曝氣器共300只污水泵N=7.5kw,二用一備豎流式沉淀池HRT=3.5h

q=1.0m3/(m2污泥回流比R=30%-35%接觸氧化池HRT=20hNV=1.0kgCOD/(m3.d)微孔曝氣器共500只組合填料共800m氣浮池處理量Q=60m3溶氣系統(tǒng)、加藥系統(tǒng)等機(jī)房建筑面積=200m風(fēng)機(jī)N=55kw,利用原有建筑物污泥濃縮池有效容積=200m污泥濃縮機(jī)因資金所限未上均質(zhì)池有效容積=25m泥漿泵污泥干化池干化面積=200m表3污水處理工程監(jiān)測(cè)結(jié)果監(jiān)測(cè)點(diǎn)位監(jiān)測(cè)指標(biāo)PHCODcr

(mg/L)BOD5

(mg/L)SS

(mg/L)氨氮

（mg/L)流量

（m3/d）濃廢水入口最高值5.8920400816447269.0890最低值4.6611000439539149.2430平均值5.4316388655542161.0675淡廢水入口最高值5.47638526233926.0871最低值4.3418266893.9644平均值5.2114815191535.2750總排口最高值7.5422020.91040.6971656最低值6.8012611.2560.3381124平均值7.1217015.6770.4651425標(biāo)準(zhǔn)值6-930015020025監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，治理工程設(shè)計(jì)合理，處理效果明顯，排污口廢水中的污染物達(dá)到國(guó)家規(guī)定的相應(yīng)排放標(biāo)準(zhǔn)。

3.2處理成本

工程總投資307萬(wàn)元，處理成本主要包括動(dòng)力費(fèi)，人員工資、福利，藥劑費(fèi)，工程折舊和設(shè)施維修費(fèi)等，其經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)見(jiàn)表4。表４工程經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)工程規(guī)模

（m3/d)工程投資

（萬(wàn)元）工程占地

（m2)總處理成本

（元／m3)直接費(fèi)用

（元／m３）定員

（人）COD削減總量

（t/d）電耗

（kw.h/m3)140030732001.200.591910.20.934工程特點(diǎn)工程設(shè)計(jì)中結(jié)合水力澄清池和IC厭氧反應(yīng)器的特點(diǎn)對(duì)進(jìn)液布水系統(tǒng)進(jìn)行了精心的研究，采用8套均勻布水系統(tǒng)（每套服務(wù)面積36m2，可獨(dú)立操作運(yùn)行，通過(guò)人工控制可靈活調(diào)節(jié)各布水系統(tǒng)水力負(fù)荷，也可使整個(gè)系統(tǒng)形成脈沖進(jìn)水）；為提高局部進(jìn)水點(diǎn)的流速，增強(qiáng)系統(tǒng)布水均勻性，設(shè)計(jì)采用較小的開(kāi)孔比（15%）以形成污泥與進(jìn)液間充分的接觸、最大限度地利用反應(yīng)器內(nèi)的污泥和有效容積，防止反應(yīng)器內(nèi)形成溝流和死角；對(duì)于三相分離器，設(shè)計(jì)成雙層分離隔板，采用適宜的表面負(fù)荷q=0.25～0.5m3/(m2·h)和較低的出水堰負(fù)荷qL=0.08～0.16L/(m·s)，使三相分離器能保留盡可能多的污泥和排放沼氣，提高出水凈化效果。

由于工程在設(shè)計(jì)中較好地解決了均勻布水、三相分離等問(wèn)題，UASB反應(yīng)器的出水水質(zhì)澄清、呈青灰色（感官與城市生活污水相似），COD去除率高（平均去除率達(dá)94.9%）,啟動(dòng)周期短、調(diào)試迅速（三個(gè)月），污泥床內(nèi)形成了顆粒污泥（質(zhì)軟、有韌性，粒徑在0.5～1.5mm之間），污泥沉降性能好。整個(gè)工程具備以下特點(diǎn)：

①生化處理（厭氧、好氧單元）始終處于較高的處理水平，固液分離效果明顯，總排口CODCr去除率達(dá)98.5%，BOD5去除率達(dá)99.6%，SS去除率達(dá)97.3%，氨氮去除率達(dá)99.0%。

②工程厭氧處理系統(tǒng)對(duì)溫度變化適應(yīng)性強(qiáng)。整個(gè)調(diào)試期間水溫在25～55℃間變化，厭氧處理單元都能達(dá)到滿意的處理效果。由于生產(chǎn)過(guò)程中排放的廢水水溫較高（80℃），根據(jù)氣溫變化，可通過(guò)調(diào)節(jié)淡廢水水量將厭氧反應(yīng)池內(nèi)的水溫控制在適宜的范圍內(nèi)，設(shè)計(jì)中不需另考慮熱交換設(shè)施。

③工程厭氧處理系統(tǒng)抗沖擊負(fù)荷能力強(qiáng)。生產(chǎn)過(guò)程中排放的廢水量大、呈周期性變化，濃廢水CODCr濃度從40000mg/L到5000mg/L不等，每班（8h）為一變化周期，瞬時(shí)COD容積負(fù)荷從3kgCOD/(m3·d)到35kgCOD/(m3·d)變化，但只要日平均容積負(fù)荷約為8kgCODCr/(m3·d)，厭氧出水水質(zhì)就能穩(wěn)定在1000mg/L左右，因此，總排口出水水質(zhì)波動(dòng)不大。

④接觸氧化池出水中有機(jī)污染物多以溶解狀態(tài)存在，經(jīng)氣浮處理COD去除率不高（≤15%），故企業(yè)實(shí)際運(yùn)行中氣浮設(shè)施基本不開(kāi)，只有當(dāng)接觸氧化池出水COD≥200mg/L時(shí)才啟動(dòng)氣浮設(shè)施，實(shí)際運(yùn)行費(fèi)用較表4所列數(shù)據(jù)低。

⑤由于進(jìn)水COD以溶解狀態(tài)存在，且絕大多數(shù)COD是通過(guò)厭氧反應(yīng)去除的，而好氧工段采用較低的負(fù)荷，雖然調(diào)節(jié)曝氣池容積負(fù)荷較高［3.2kgCOD/（m3·d）］,但因活性污泥濃度較高M(jìn)LSS=6500mg/L），其污泥負(fù)荷并不高［0.49kgCOD/（kgMLSS·d）］，故剩余污泥排放量較低，沉淀池每天排放污泥20m5經(jīng)驗(yàn)與總結(jié)①檸檬酸廢水濃度高，厭氧反應(yīng)池處理效果的好壞是整個(gè)工程造價(jià)和運(yùn)行成本高低的關(guān)鍵，為此本工程采用并強(qiáng)化了運(yùn)行穩(wěn)定、效果優(yōu)良的UASB厭氧處理技術(shù)，以最大程度地提高厭氧處理元的CODCr去除率。

②以瓜干為原料的發(fā)酵廢水通過(guò)生化處理可以達(dá)到較高的COD去除率，但廢水中的色度很難解決，最終出水經(jīng)混凝氣浮也難以達(dá)到滿意的效果，物化工段色度去除率≤30%，氯氧化或臭氧氧化因成本過(guò)高未采用，因此工程最終出水澄清但呈黃色，與淡茶水相似。

③檸檬酸廢水pH較低、呈酸性，在進(jìn)入U(xiǎn)ASB前（特別是調(diào)試初期）應(yīng)對(duì)其進(jìn)行調(diào)節(jié)，使廢水呈中性。原設(shè)計(jì)采用變速中和濾塔調(diào)節(jié)來(lái)水pH，由于企業(yè)資金緊張，故嘗試在濃水調(diào)節(jié)池上改用簡(jiǎn)易石灰篩網(wǎng)。實(shí)踐表明，該設(shè)施運(yùn)行簡(jiǎn)單、效果穩(wěn)定、成本較低，宜于在中、小型廢水治理工程中使用。要范圍,同時(shí)停加甘油。3.4.5正交設(shè)計(jì)接種量、轉(zhuǎn)速、生長(zhǎng)pH值、D0四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。表2因素和水平表Table2Thechartoffactorsandlevels接種量轉(zhuǎn)速生長(zhǎng)pHDO(%(rpm(%水平254005.030-40水平3105005.540—503.5植霞爵贏麗而靳盯—————————————~發(fā)酵結(jié)束后放罐,得到發(fā)酵液即含植酸酶的粗酶液。由于本實(shí)驗(yàn)僅僅是傲一嘗試,所以只取少量發(fā)酵液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將發(fā)酵液過(guò)濾除菌,去掉酵母細(xì)胞。取上清液并將其放于平皿中,在40℃下真空濃縮,去除粗酶液中部分水,達(dá)到濃縮植酸酶的目的。以1:1的比例將濃縮液與滅菌的麥麩混合(v/w,mYg,放予40℃烘箱中處理5h,使含水量達(dá)到25%,即得到了植酸酶成品。測(cè)成品中的植酸酶酶活。4.試驗(yàn)結(jié)果4.1培養(yǎng)基4.1.1輔料(x1酶活力(KU/mL輔料名稱圖1.不周輔料對(duì)產(chǎn)酶的影響Fig.1TheeffectofcomplementSOilphytaseactivity圖1結(jié)果表明,畢赤酵母基因工程菌在麥芽汁.麥麩培養(yǎng)基、麥芽汁.米糠培養(yǎng)基、麥芽汁一玉米粉培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基中的酶活力。均高于對(duì)照,其中以麥芽汁.麥麩培養(yǎng)基的酶活力最高,麥芽汁一玉米粉培養(yǎng)基的酶活力最低,麥芽汁.米糠培養(yǎng)基的酶活力介于兩者之間。因此選用麥麩作為培養(yǎng)基輔料,有利于酶活力的提高,即輔料x(chóng)1為麥麩。4.1.2輔料添加量(X2酶