DNA粗提取與鑒定51917

DNA的粗提取與鑒定1目的要求1、了解從細(xì)胞中提取DNA的基本原理2、初步掌握DNA的粗提取和鑒定的方法3、觀察提取出來的DNA2實(shí)驗(yàn)思路1、DNA從哪提取？2、怎樣將DNA與細(xì)胞中的其他物質(zhì)分離？3、怎樣鑒定我們提取的DNA？3實(shí)驗(yàn)原理一、DNA的溶解性1.DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L時(shí),DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。（圖5-1）2.DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。4實(shí)驗(yàn)原理二、DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性蛋白酶只能水解蛋白質(zhì)大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60-80℃的高溫，但DNA在80℃以上才會(huì)變性洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜5實(shí)驗(yàn)原理三、DNA的鑒定DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。思考：還有哪些鑒定DNA的方法？甲基綠（藍(lán)綠色）6二、DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取材料：新鮮的雞血注意：

本實(shí)驗(yàn)中，要往雞血中加入抗凝劑（檸檬酸鈉溶液）原則上只要含DNA的生物材料都可以，但是選取DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功率更大。7(1)先將新鮮的雞血離心，獲得雞血細(xì)胞(2)在雞血細(xì)胞中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、破碎細(xì)胞討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？利用了什么原理？2、過濾，獲取含DNA的濾液8討論：為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)三、去除濾液中的雜質(zhì)高鹽濃度→溶解DNA→除去在高鹽溶液中不能溶解的雜質(zhì)低鹽濃度→析出DNA→除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)9討論：方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離

方案二利用了酶的專一性；方案三利用了DNA的穩(wěn)定性。10（四）DNA的析出與鑒定DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95％），靜置2-3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水1、DNA的析出112、DNA的鑒定鑒定DNA時(shí)在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml于兩只試管中，其中一只加入DNA絲狀物，各加入二苯胺4ml試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否有藍(lán)色（結(jié)合P56圖5-5）121、在制備雞血細(xì)胞液的過程中，加入檸檬酸鈉的目的是（）A.防止凝血B.加快DNA析出C.加快DNA溶解D.加速凝血練一練A132、DNA的溶解度最低時(shí)，NaCl的物質(zhì)的量濃度為（）A2mol/lB0.1mol/lC0.14mol/lD0.015mol/l3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是（）A加快DNA溶解的速度B加快溶解雜質(zhì)的速度C減小DNA的溶解度，加快DNA析出D減小雜質(zhì)的溶解度，加快雜質(zhì)的析出CC144、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不斷加入蒸餾水,在這個(gè)過程中DNA的溶解度變化情況分別是A減小;減小B增大;增大C先減小后增大D增大;減小5、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的辦法是A加蒸餾水B加礦泉水C加清水D加生理鹽水156、與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是A操作時(shí)緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B操作時(shí)用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整C加蒸餾水可以同時(shí)降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度D當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時(shí)，NaCl溶液的濃度可以認(rèn)為是