上海市高等學(xué)校青年科學(xué)基金項(xiàng)目

PAGEPAGE10上海市高等學(xué)校青年科學(xué)基金項(xiàng)目申請(qǐng)書項(xiàng)目編號(hào)：

腎癌微轉(zhuǎn)移診斷及其臨床意義研究20015月上海市教育委員會(huì)名稱研起止年月

簡(jiǎn) 表腎癌微轉(zhuǎn)移診斷及其臨床意義研究○基礎(chǔ)研究●應(yīng)用研究○實(shí)驗(yàn)發(fā)展○軟科學(xué)2001年10月至2004年10月究申請(qǐng)金額（萬元）5.5 批準(zhǔn)金額（萬元）項(xiàng)密級(jí)項(xiàng)目編號(hào)

●機(jī)密○秘密○內(nèi)部○一般目學(xué)科領(lǐng)域

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泌尿外科 學(xué)科代碼1 C03030305學(xué)科代碼2出生年 1967年8申姓名 性別●男○女 月 月申請(qǐng)職稱人單位聯(lián)系地址

學(xué)位 ●博士○碩士○學(xué)士○其它郵編 電話總?cè)藬?shù) 高級(jí)中級(jí)初級(jí)輔助人員博士生碩士生8 3 1 1 3主RT-PCR方法診斷腎癌患者外周血、骨髓及腎周淋巴要結(jié)中的微轉(zhuǎn)移病灶，探討腎癌微轉(zhuǎn)移在圍手術(shù)期及免疫治研究療后的變化及與預(yù)后的關(guān)系。腎癌微轉(zhuǎn)移確診，為手術(shù)術(shù)內(nèi)式選擇、觀察治療效果提供客觀依據(jù)，并可能是腎癌預(yù)后容的一個(gè)重要指標(biāo)。及意 （限100字）義注：學(xué)科領(lǐng)域請(qǐng)參照《國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T13745 92學(xué)科分類代碼表》填寫一、立論依據(jù)（項(xiàng)目的研究意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，附主要參考文獻(xiàn)）腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，也是腫瘤患者死亡的主要原因。許多惡性腫瘤患者雖然切除了原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移灶，甚至常規(guī)病理學(xué)檢查為轉(zhuǎn)移陰性的患者，最終仍死于腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移?？梢?，常規(guī)方法尚不能檢出已轉(zhuǎn)移的少量腫瘤細(xì)胞。近年來，隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，使判斷腫瘤的微小轉(zhuǎn)移成為可能。腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)為手術(shù)方式的選擇及清掃范圍提供了一個(gè)更客觀、更直接的依據(jù)，還可作為療效和早期復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)的指標(biāo)，有助于建立在治療強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間上不同的、個(gè)體化的治療方案[1]。細(xì)胞角蛋白（CytokeratinCK）是細(xì)胞骨架蛋白之一，泌尿道、生殖道及CK，CK18、CK19是診斷腫瘤微轉(zhuǎn)移的常用生物學(xué)指標(biāo)[2]CK20是最近發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞角蛋白，在上皮源性的腫瘤中存在表達(dá)，而外周血和淋巴組織中無表達(dá)。CK20宮內(nèi)膜癌[3]、膀胱癌等腫瘤微轉(zhuǎn)移的診斷。腎癌是來源于腎小管上皮的常見惡性腫瘤，易發(fā)生血行及淋巴轉(zhuǎn)移，目前，對(duì)腎癌微轉(zhuǎn)移的研究甚少，腎周CK20診斷腎癌微轉(zhuǎn)移國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。目前，腎癌的治療仍以手術(shù)治療為主，術(shù)后輔以免疫治療。手術(shù)方法及免疫治療對(duì)血行微轉(zhuǎn)移的影響國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。而這些問題的闡明對(duì)手術(shù)方法的改進(jìn)、腎癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的進(jìn)一步了解及判斷免疫治療的確切效果均具有十分重要的意義。RT-PCR方法檢測(cè)腎癌患者外周血、骨髓及腎周淋巴結(jié)CK18、CK19、CK20mRNA的表達(dá)，SouthernCK18、CK19、CK20在腎癌微轉(zhuǎn)移診斷中的價(jià)值；闡明腎癌微轉(zhuǎn)移在圍手術(shù)期及免疫治療后的變化及與預(yù)后的關(guān)系，為腎癌患者制訂個(gè)體化的治療方案提供客觀依據(jù)。參考文獻(xiàn)Matsumoto-M,Natsugoe-S,etal.ClinicalsignificanceoflymphnodemicrometastasisofpNOesophagealsquamouscellcarcinoma.Cancer-Lett.May29;153(1-2):189-97Slade-MJ,Smith-BM,Sinnet-HD,etal.Quantitativepolymerasechainforthedetectionofmicrometatasesinpatientswithbreastcancer.JClinOncol.1999;17(3):870-9Fishman-A,Klein-a,Zemer-R,etal.Detectionofmicrometatasisby20(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)inlymphnodesofpatientswithendometrialcancer.Gynecol-Oncol.2000,77(3):399-404Gudemann-CJ,Weitz-J,Kilenle-P,etal.Detectionofhematogenousmicrometatasisinpatientswithtransitionalcellcarcinoma.J-Urol.2000164(2):532-6二、研究方案研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題研究目標(biāo)：尋找診斷腎癌微轉(zhuǎn)移的良好生物學(xué)指標(biāo)；闡明腎癌治療方法對(duì)微轉(zhuǎn)移的影響及微轉(zhuǎn)移與預(yù)后的關(guān)系。研究?jī)?nèi)容：1、采用RT-PCR方法檢測(cè)30例腎癌患者外周血、骨髓及手術(shù)清掃腎周淋巴結(jié)CK18、CK19、CK20mRNA的表達(dá)，10例健康志愿者的外周血、骨髓及10例非癌患者腎周淋巴結(jié)作為對(duì)照，Southern判定結(jié)果，如陽性，即表示存在血行或淋巴微轉(zhuǎn)移，探討CK18、CK19、CK20在腎癌微轉(zhuǎn)移診斷中的價(jià)值。213CK18CK19、CK20mRNA的表達(dá)變化，探討手術(shù)對(duì)血行微轉(zhuǎn)移的影響。3、檢測(cè)腎癌血行微轉(zhuǎn)移陽性患者免疫治療結(jié)束后外周血、骨髓CK18、CK19、CK20mRNA響。4、對(duì)患者進(jìn)行隨訪，探討微轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后之間的關(guān)系。擬解決的關(guān)鍵問題：1、闡明CK18、CK19、CK20在腎癌微轉(zhuǎn)移診斷中的價(jià)值。2、明確腎癌手術(shù)對(duì)血行微轉(zhuǎn)移的影響。3、明確免疫治療對(duì)血行微轉(zhuǎn)移的影響，以確切判斷免疫治療的效果。4、明確腎癌微轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后之間的關(guān)系。擬采取的研究方法、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案及可行性分析外周血、骨髓及手術(shù)清掃腎周淋巴結(jié)↓總RNA抽提↓反轉(zhuǎn)錄成cDNA↓PCR擴(kuò)增↓Southernblot判定結(jié)果↓圍手術(shù)期及免疫治療后微轉(zhuǎn)移變化及與預(yù)后的關(guān)系可行性分析：外周血取自周圍靜脈、骨髓取自髂骨穿刺、淋巴結(jié)取自腎周清掃組織，因此，標(biāo)本容易獲得；CK18、CK19診斷腎癌血行微轉(zhuǎn)移各有一篇文獻(xiàn)報(bào)道，CK20在診斷其他腫瘤微轉(zhuǎn)移的研究中有大量文獻(xiàn)報(bào)道；本研究所用實(shí)驗(yàn)方法成熟，因此具有很好的可行性。本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處CK20診斷腎癌微轉(zhuǎn)移的研究國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。腎癌患者淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的研究國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。圍手術(shù)期腎癌患者血行微轉(zhuǎn)移的變化研究國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。免疫治療對(duì)腎癌患者血行微轉(zhuǎn)移的影響研究國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。腎癌患者微轉(zhuǎn)移與預(yù)后的關(guān)系研究國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。計(jì)劃進(jìn)度2001.10-2004.6標(biāo)本收集、RNA抽提、RT-PCR、Southernblot。2004.7-2004.10隨訪、資料分析、論文撰寫。三、研究基礎(chǔ)與本項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累和已取得的工作成績(jī)已具備的實(shí)驗(yàn)條件、尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑合（協(xié)）作形式和合（協(xié)）作單位意見合（協(xié)）作形式合（協(xié)）作單位意見對(duì)合作、協(xié)作內(nèi)容、形式、參加人員素質(zhì)及保證工作條件具體意見年月日四、申請(qǐng)者簡(jiǎn)介申請(qǐng)者學(xué)歷和研名稱應(yīng)注明出處)：五、預(yù)期研究成果預(yù)期的研究成果、考核指標(biāo)及提供成果的形式CK18、CK19、CK20是診斷腎癌微轉(zhuǎn)移的較好指標(biāo)。法具有一定的指導(dǎo)意義。標(biāo)。腎癌微轉(zhuǎn)移與預(yù)后密切相關(guān)。項(xiàng)目完成的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益和理論意義5-8篇2-4名指導(dǎo)腎癌患者的治療六、經(jīng)費(fèi)預(yù)算申請(qǐng)資助總金額(萬元)

萬元其它經(jīng)費(fèi)來源及金額預(yù)算科目小型設(shè)備費(fèi)費(fèi)費(fèi)管理費(fèi)其它費(fèi)用

金額(萬元) 計(jì)算根據(jù)及理由1 購買電泳儀、雙蒸器、震蕩器等0.5 RNA抽提試劑盒、雜交試3 劑、PCR氮、硝酸膜、PCR管、凍存管等0.50.5 論文撰寫及發(fā)表費(fèi)用等七、項(xiàng)目組成員情況表八、申請(qǐng)者正在承擔(dān)的其它研究項(xiàng)目(包括國家級(jí)、各部委、省市的任務(wù)等的名稱、任務(wù)來源、起止年月、負(fù)責(zé)或參加等情況)九、申請(qǐng)者承擔(dān)（負(fù)責(zé)或參加）市教委基金資助項(xiàng)目的情況項(xiàng)目編號(hào)項(xiàng)目編號(hào)項(xiàng)目名稱1．對(duì)立題、經(jīng)費(fèi)預(yù)算及能否保證計(jì)劃實(shí)施所需人力物力等簽署1．對(duì)立題、經(jīng)費(fèi)預(yù)算及能否保證計(jì)劃實(shí)施所需人力物力等簽署具體意見已按填表說明對(duì)申請(qǐng)人進(jìn)行了資格審查，對(duì)審請(qǐng)書內(nèi)容進(jìn)行了審核，保證在項(xiàng)目獲得資助后做到以下幾點(diǎn)：保證對(duì)研究計(jì)劃實(shí)施所需的人力、物力和工作時(shí)間等條件給予支持。嚴(yán)格遵守有關(guān)資助項(xiàng)目管理、財(cái)務(wù)等各項(xiàng)規(guī)定。表和材料。行政領(lǐng)導(dǎo)簽章 公章年月日2．對(duì)申請(qǐng)者在研究期間時(shí)間上的保證和工作崗位的穩(wěn)定簽署意見2．對(duì)申請(qǐng)者在研究期間時(shí)間上的保證和工作崗位的穩(wěn)定簽署意見人事部門負(fù)責(zé)人簽章年月公章日蓋章年蓋章年月日項(xiàng)目合同經(jīng)上海市教育委員會(huì)（甲方）與同濟(jì)大學(xué)（乙方）共同協(xié)商，現(xiàn)就下列條款取得一致意見并承擔(dān)各自的義務(wù)：一、簽署雙方一致同意《上海高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)發(fā)展基金管理辦法》中所列的各項(xiàng)條款，并按照?qǐng)?zhí)行。二、為研究本項(xiàng)目，甲方同意資助承擔(dān)方萬元，撥款時(shí)間為：