國家自然基金標書終稿

報告正文立項依據(jù)與研究內(nèi)容（4000-8000字）：項目的立項依據(jù)隨著機械通氣、表面活性物質(zhì)替代療法等新技術(shù)應用，危重新生兒、尤其是早產(chǎn)兒存活率已顯著提高。然而，長時間吸入高濃度氧，幸存者易發(fā)生肺部氧化應激損傷。目前，高氧肺損傷已成為發(fā)達國家NICU最為棘手的問題之一和嬰兒慢性肺疾病的最常見形式。但高氧肺損傷的確切機制尚未完全闡明，更無有效的防治手段。因此深入研究其發(fā)病機制，積極防治高氧肺損傷，具有優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質(zhì)的戰(zhàn)略意義。高氧肺損傷是一個涉及許多細胞活動的復雜過程，可分為早期的組織損傷兩個過程。,ECM）的重建參與了高氧肺損傷的整個病理過程，若ECM重建正常，則損傷完全修復，肺結(jié)構(gòu)正常；若ECM重建紊亂，將導致肺纖維化。因此，ECM重建是關(guān)系高氧肺損傷結(jié)局的關(guān)鍵因素。本實驗室在國內(nèi)外率先開展了對早產(chǎn)大鼠高氧肺損傷中表達的研究，已發(fā)現(xiàn)肺損傷時MMPs過度表達、MMPs/TIMPs失衡是ECM重建紊亂發(fā)生纖維化的關(guān)鍵原因[1]（具體研究成果見研究基礎(chǔ)欄）。有關(guān)MMPs在高氧肺損傷中的作用已為少數(shù)國外學者所重視，但高氧肺損傷后ECM重建過程中，引起MMPs過度增加的具體機制是什么？本實驗室擬從MMPs的誘導劑和抑制劑兩方面深入研究。）在上調(diào)MMPs表達中起關(guān)鍵作用。Emmprin是分子量為58KD的質(zhì)膜糖蛋白，具有酪氨酸蛋白激酶活性，不僅表達于正常組織，還表達于腫瘤組織如肺部腫瘤細胞，提示Emmprin參與體內(nèi)生理及病理過程[2]。目前，少數(shù)文獻已證明，體外Emmprin與人成纖維細胞共培養(yǎng)后，成纖維細胞MMPs表達增加。進一步研究表明，Emmprin在細胞表面與自身受體或MMP結(jié)合，激活胞內(nèi)MAPKp38信號通路，該途徑激活促進ECM降解[3，4]。但關(guān)于Emmprin/MAPKp38對MMPs調(diào)節(jié)的研究僅限于腫瘤細胞，有關(guān)高氧肺損傷后肺ECM重建過程中，Emmprin如何調(diào)控MMPs/TIMPs平衡，目前國內(nèi)外尚無文獻報道。轉(zhuǎn)化生長因子β（Transforminggrowthfactorbeta,TGF-β）在下調(diào)MMPs表達中起關(guān)鍵作用。研究證明TGF-β刺激可使肺成纖維細胞MMPs生成減少[5]。另有研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β抑制元件位于MMP-1基因啟動子區(qū)，嚴密調(diào)控MMP-1在不同生理和病理情況下的表達[6]。進一步的研究表明，TGF-β對MMP-1的作用通過SMAD信號途徑介導，該途徑激活可阻止ECM降解[5]。因此，推測TGF-β/SMAD對MMPs/TIMPs平衡的調(diào)節(jié)可能是影響肺損傷后ECM重建的關(guān)鍵因素之一。有關(guān)高氧肺損傷后肺ECM重建過程中，TGF-β如何調(diào)控MMPs/TIMPs平衡，目前國內(nèi)外尚無文獻報道。近年來對信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)的研究發(fā)現(xiàn)，位于大多數(shù)細胞質(zhì)膜上約50-100nm大小的囊性凹陷結(jié)構(gòu)—小窩（caveolae），是許多信號分子完成跨膜信號轉(zhuǎn)導的“驛站”。小窩蛋白（caveolin）是小窩胞漿面包被的一種21-24kD的膜蛋白，是許多信號分子活性狀態(tài)的重要調(diào)節(jié)者。在無胞外信號刺激下，caveolin通常與富集于小窩質(zhì)膜上的各種信號分子、受體及非受體型酪氨酸激酶等相結(jié)合，抑制這些信號物質(zhì)的活性；在激動劑與受體結(jié)合后，caveolin分子構(gòu)象發(fā)生變構(gòu)或共價修飾，調(diào)節(jié)信號物質(zhì)的活化狀態(tài)，參與信號轉(zhuǎn)導調(diào)控[7]。有關(guān)caveolin在肺ECM重建中的作用，有學者提出肺泡Ι型上皮細胞caveolin表達缺失可能是發(fā)生肺纖維化的亞細胞指標。對caveolin-1基因敲除小鼠的研究，肺組織顯示肺泡隔因細胞增殖而增厚和肺纖維化。caveolin-1α在肺發(fā)育的不同階段，可表達于不同血管和上皮細胞，呈時相分布[8]。研究發(fā)現(xiàn)，caveolin–1與TGF-βⅠ型受體（TβRⅠ）相互作用，抑制TGF-β介導的SMAD-2和下游分子的磷酸化，從而調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導[9]。Emmprin具有酪氨酸蛋白激酶活性，且其信號傳導為酪氨酸磷酸化依賴的MAPKp38途徑，申請者推測caveolin能與Emmprin相互作用，調(diào)控Emmprin介導的MAPKp38和下游分子的磷酸化。簡圖如下：胞外信caveolin+?caveolin/Emmprin作用Emmprin/MAPKp38號刺激變構(gòu)活化+caveolin/TβRⅠ作用TGF-β/SMAD信號整合調(diào)控肺ECM重建基于上述，申請者提出如下假設(shè)：⑴高氧暴露下MMP誘導劑/抑制劑失衡是高氧肺損傷MMPs增加，ECM重建紊亂的主要原因。⑵高氧暴露使質(zhì)膜小窩表達或功能異常，從而影響Emmprin/MAPKp38和TGF-β/SMAD兩條信號通路整合，繼而導致MMPs增加，ECM重建紊亂。本人所在的研究室屬呼吸系統(tǒng)疾病重點實驗室。多年來，本人一直致力于新生兒高氧慢性肺損傷的研究，已成功建立了早產(chǎn)大鼠高氧肺損傷的動物模型、掌握了支氣管肺泡灌洗術(shù)、體外Ⅱ型肺泡上皮細胞和成纖維細胞培養(yǎng)、核酸、蛋白分析等技術(shù)，并對抗氧化酶、細胞因子水平、一氧化氮、MMPs/TIMPs失衡等因素在高氧肺損傷發(fā)病機制中所起的作用進行了較深入的研究，同時應用地塞米松、維甲酸、人類重組促紅細胞生成素、EGb761進行了抗氧化損傷的干預研究（見研究基礎(chǔ)欄）。這些理論研究和技術(shù)方法的積累為本課題的開展奠定了堅實的基礎(chǔ)。本研究如能完成，可望為探索高氧肺損傷后肺ECM重建紊亂的機制開拓新思路，并為尋找有效的預防和干預高氧肺損傷提供依據(jù)。倉參考文獻TaylorPM,WoodfieldRJ,HodgkinMNetal.Breastcancercell-derivedEMMPRINstimulatesfibroblastMMP2releasethroughaphospholipaseA(2)and5-lipoxygenasecatalyzedpathway.Oncogene2002Aug22;21(37):5765-72LiangL,MajorT,BocanT.Characterizationofthepromoterofhumanextracellularmatrixmetalloproteinaseinducer(EMMPRIN).Gene2002Jan9;282(1-2):75-86LimM,MartineT,JablonsD.Tumor-derivedEMMPRIN(extrocellularmatrixmetalloproteinasesinducer)stimulatescollagenasetranscriptionthroughMAPKp38.FEBSLett1998;441(1):88~92YuanW,VargaJ.Transforminggrowthfactor-betarepressionofmatrixmetalloproteinase-1indermalfibroblastsinvolvesSmad3.JBiolChem2001;276(42):38502-10WhiteLA,MitchellTI,BrinckerhoffCE.Transforminggrowthfactorbetainhibitoryelementintherabbitmatrixmetalloproteinase-1(collagenase-1)genefunctionsasarepressorofconstitutivetranscription.BiochimBiophysActa2000Feb29;1490(3):259-68浴Razan炮iB,戚Zhang逃XL,訂Bitze基rM,添etal桑.Cav緣eolin語-1re反gulat垮esTG釀F-bet存a/SMA喊Dsig片nalin援gthr秧ough櫻anin倍terac垮tion滴with貞theT只GF-be計taty園pe=1\*ROMAN親I緊rece井ptor.夕JBi騰olCh俊em20俗01;27啦6麗(9):底6727都~碎6738判Ramir秤ezMI膚,Pol既lack宅L,Mi焰llien攜G,e奔tal.任The轟alpha柱-Isof以ormo廚fCav半eolin眠-1Is洗aMa令rker奴ofVa器sculo轎genes仇isin炎Earl猴yLun呼gDev額elopm堂ent.連JHis茄toche眼mCyt剛ochem價2002錢;50(1降):33~厘42批Drab器M,Ve該rkade急P,E油lger虹M,et詠al.燥Loss篩ofca因veola圖e,va能scula眉rdys鮮funct向ion,潑andp嫩ulmon甜aryd吸efect漿sin拼caveo償lin-1掀gene覽-disr攻upted廉mice砌.Sci杯ence倍2001;茶293(5奇539):那2449~贊52家項目的研究臟內(nèi)容、研究育目標,以及擊擬解決的關(guān)動鍵問題。研究目標：坡建立早產(chǎn)大敘鼠慢性高氧累肺損傷模型勿，探討Em堂mprin貼與TGF-霜β蹄調(diào)節(jié)失衡是膠否為高氧肺癥損傷MMP孫s增加，E闊CM重建紊遲亂的主要原毫因；探討小捷窩蛋白對投死足絲晚累梨頌兩條信號通揉路整合的影唇響，為高氧起肺損傷發(fā)生戒機制和尋找夸有效防治措階施提供理論哄依據(jù)。研究內(nèi)容：寧Emmpr賣in/MA暑PKp3顏8信號通路漫活化狀態(tài)及冶高氧肺損傷由所致ECM滲重建紊亂的振相關(guān)性：閑①余研究高氧懷肺損傷不同揪時間點肺組澇織中Emm言prin、污P38、磷版酸化P38斯的表達。嶼②扭研究高氧裕肺損傷Em天mprin駝/MAPK捎p38信斑號通路活化腫狀態(tài)與MM灑Ps表達雙謊變量關(guān)系。德TGF-岡β囑/SMAD劃信號通路活脹化狀態(tài)及高托氧肺損傷所打致ECM重室建紊亂的相碌關(guān)性得：瞞①塔研究高氧幫肺損傷不同陣時間點肺組抄織中TGF擁-具β繭、T臘β方R導Ι魚、SMAD鼠、磷酸化S財MAD的表防達。李②醫(yī)研究高氧候肺損傷T瓶β添R樂Ι但的激酶活性燒，計算磷酸冰化SMAD鋪與非磷酸化寨SMAD比嘴值。栽③耀研究高氧畜肺損傷TG泉F-只β張/SMAD告信號通路的筐活化狀態(tài)與獄MMPs/愈TIMPs末的雙變量關(guān)雞系。瞇caveo肺lin-1棒對Emmp林rin/M擠APKp因38和TG出F-揉β細/SMAD叛兩條信號通辣路及其與高溪氧肺損傷所鋼致ECM重鹽建紊亂的相犧關(guān)性度：朋研究高氧肺將損傷不同時奧間點肺組織囑中cave揭olin-呈1表達及酪狹氨酸磷酸化蘭水平。取研究高氧肺茫損傷肺組織排質(zhì)膜小窩內(nèi)存caveo譜lin-1炒與Emmp稍rin的共耐定位。鋪研究高氧肺令損傷肺組織崖質(zhì)膜小窩內(nèi)遍caveo鐵lin-1職與T氣β悔R兩Ι騾的共定位。異擬解決的關(guān)柿鍵問題：潔成年動物急誰性高氧肺損科傷模型，因已其肺發(fā)育已轟成熟，不能執(zhí)如實反映不處成熟肺的損侵傷情況，并焦且與臨床上悄早產(chǎn)兒需長他期用氧情況詞差異較大。檔本項目采用洪早產(chǎn)大鼠慢代性高氧肺損無傷模型，能并更如實模擬用支氣管肺發(fā)戚育不良的發(fā)特生情況。雖芽然此模型技單術(shù)難度較大翼，但本研究燃組在早產(chǎn)大慮鼠模型制備雷方面已積累巨了豐富經(jīng)驗莊，能成功完挺成此模型的模復制。擁本研究假設(shè)鈔caveo晉lin與E音mmpri疊n的相互作且用可調(diào)控E賽mmpri外n/MAP津Kp38制信號通路活膽化；cav狡eolin次-1與T寇β格R很Ι凳的相互作用稻可調(diào)控TG航F-敏β僚/SMAD歪信號通路活雪化。以往由洲于技術(shù)條件石限制，未能使從形態(tài)學上餓直接證實。開借助共聚焦削顯微鏡觀察押和熒光雙重呼標記技術(shù)可朱解決這一技娘術(shù)難題。柄擬采取的研陡究方案及可睛行性分析。研究方法：姻本申課題采用共例聚焦顯微鏡棋（conf翻ocal拳micro偽scope齒）、免疫熒模光雙重標記靜和免疫組織狡化學等研究炊方法，輔以華蛋白質(zhì)與核盼酸分析技術(shù)棉（West腰ernB陣lot、N忽orthe續(xù)rnBl勉ot方法）優(yōu)，檢測各指枯標的動態(tài)變干化，并對各銅指標進行定斯位、定性、述定量分析。合倦眾后計：軌扯瞎孩砍豐參照申請者社著作，株實用兒科臨紫床雜志，喬⑴麥.檢測ca臥veoli器n-1酪氨液酸磷酸化水虧平：挨應用抗ca古veoli絲n-1pA漁b進行免賄疫沉淀翻應用抗磷酸奮化酪氨酸m稍Ab進行脹Weste疤rnBl沾ot分析償⑵撤.舞檢測肺組似織中Emm撓prin、飛P38、磷源酸化P38仰、TGF若-候β垃、TGF-償βΙ求型受體（T宣β際R倒Ι滑）及SMA丑D-2、磷慶酸化SMA鏈D表達，探蝶討高氧肺損梢傷所致EC溜M重建紊亂磁的分子機制或：敬蛋白質(zhì)染水平檢測湊—席Weste簽rnBl駐ot。僅mRNA攔水平檢測京—諸North荒ernB爭lot（或言RT-PC固R）。帳肯⑶矮.級檢測肺組阿織中T渾β例R忘Ι喊的激酶活性賽：養(yǎng)T默β震R蹲Ι名分離提取孩—招免疫沉淀法嘉（immu聲nopre宅cipit逼ion）姻態(tài)T慧β采R派Ι屋與純化的激蝕酶底物GS畜T-SMA肥D2（由美敞國國立癌癥伏研究機構(gòu)d抗eCae囑stech動er,M與教授提供）卻反應，應用家免疫印跡法余檢測磷酸化隊SMAD2皂水平，計算凳T割β即R拌Ι室的激酶活性愿。慢⑷呼.救檢測肺組織石質(zhì)膜小窩內(nèi)踢caveo禿lin/豐Emmpr庭in及ca到veoli撓n-1/T談β況R躬Ι鞋的共定位及按表達：珍①青樣本制備：便制備組燦織切片霉→金加入抗ca伍veoli膚nmAb蹄→歪PE標記的納二抗賄→命加入抗Em飼mprin討/T飄β寧R米Ι繪的pAb套→央FITC標腔記二抗彩②損共聚焦顯微判鏡（TCS蘿SP型，德偷國Leic觀a公司）檢德測共定位；漫應用圖象分晃析軟件對c流aveol棉in表達強臂度進行半定繁量。革⑸傷．乳應用統(tǒng)計學暫方法處理數(shù)巷據(jù)：玉應用SAS煎統(tǒng)計分析軟勞件，對數(shù)據(jù)裙進行統(tǒng)計學復分析。技術(shù)路線：澤刑逝犯漿冠早產(chǎn)大鼠高傻氧肺損傷模壓型待炸caveo聯(lián)lae蚊印caveo朋lin酪氨艙酸磷酸化狀榆態(tài)講（免疫沉淀貞、免疫印跡義）蔑窄仔Emmpr弄in/MA嘗PKp3干8灣敞嚼牧竭串TGF-催β藝/SMAD碎陸信號通路研戶究趁浩信號通路研僚究罵Emmpr撕in、P3貍8、磷酸化鉆P38宇果TGF-杰β聰、T該β床R、SMA鴨D、磷酸化愛SMAD熱表達（免疫幸印跡與No壺rther獵nBlo襲t初表達（W三ester寫nBlo吃t和Nor求thern氣Blot輛）迎或RT-P唯CR)揮騎T鞏β陪R寸Ⅰ產(chǎn)激酶活性（朱免疫沉淀和想免疫印跡）caveolin/Emprin共定位(熒光雙標記、共聚焦顯微鏡)caveolin/TβRⅠ共定位(熒光雙標記、共聚焦顯微鏡)勸caveolin/Emprin共定位(熒光雙標記、共聚焦顯微鏡)caveolin/TβRⅠ共定位(熒光雙標記、共聚焦顯微鏡)順申請者所在雹的研究室屬炭于呼吸系統(tǒng)蝕疾病重點實齒驗室臨床二乓室，本室在量慢性阻塞性勇肺疾病和肺輛纖維化發(fā)病條機制的研究欠領(lǐng)域已有大列量工作積累喚，為本項目緒的研究打下趁了良好的工祝作基礎(chǔ)。申蔥請者及所在蒜研究室在產(chǎn)殺兒高氧損傷喜領(lǐng)域進行了疫一系列開拓愈性研究，已傷熟練掌握急周、慢性高氧齊肺損傷模型莫復制，蛋白撇、核酸分析滴等技術(shù)。（罷詳見研究基座礎(chǔ)欄）韻本項目研究曲的主要成員廣之一，香港受合作者教授礦，是國際上探新生兒肺損向傷研究的前興沿科學家，費目前與本研扛究小組密切貧合作，進行勸有關(guān)慢性肺泉損傷研究。獅霍泰輝教授旬除承擔實驗星指導，并提限供部分試劑插。逝新一代共聚貧焦顯微鏡具稼有觀察亞細沉胞結(jié)構(gòu)的立案體定位功能剩，用其檢測照在體組織c疊aveol俱in/Em紀mprin吐、cave潑olin/址T之β必R獻Ⅰ核信號分子在咬亞細胞位點佩的共定位表野達，雖無文介獻報道，在含技術(shù)上難度授較大，但申萍請者已掌握礦了多種熒光惜標記技術(shù)，備應用共聚焦宋顯微鏡觀察福caveo讀lin-1芳在細胞質(zhì)膜宿上的定位表光達也已獲成公功。申請人端所在單位的硬醫(yī)學中心的饒共聚焦顯微成鏡和本實驗讓室的基本研探究設(shè)備，能蹲保證本實驗熱研究完成。貍本項目的特遭色與創(chuàng)新之故處。簡理論上的創(chuàng)腹新：沈研究Emm灑prin/航MAPK威p38信號抽通路在器官仁發(fā)育和組織殊病理損傷中補的作用,國盟內(nèi)外尚無文閑獻報道。餡本課題研究為caveo另lin對E惡mmpri宗n/MAP嚼Kp38從、TGF-元β鈴/SMAD館共調(diào)節(jié)機制渣，將為早產(chǎn)弊兒高氧肺損理傷發(fā)病機制酒開辟新的研眉究領(lǐng)域，并徒為其防治開紙拓新思路。菠方法上的創(chuàng)層新：無以在體組織污為研究對象俯，應用免疫浴熒光雙重標懸記共聚焦顯納微鏡技術(shù)研商究cave長olin/促Emmpr樣in、ca貨veoli警n/T淹β魯R侍Ι候共定位，國償內(nèi)外未見文楊獻報道，可耽望為深入研盛究小窩蛋白破對信號轉(zhuǎn)導渠的調(diào)控機制廈開辟新途徑夏。弟年度研究計富劃及預期研碌究結(jié)果。勝年度研究計銀劃及預測進柏展豪本課題份研究內(nèi)容預逗計用3年時藏間完成.盞20信04年1月賽~8月療①椒購買所需試咐劑。找②戲建立預實驗指動物模型。石③魂進行各項預比實驗。由20羨04年9月倦~2005鳳年2月慰①升建立動物模顧型。肅②抹完成標本的兇收集。斜20停05年3月暈~7月油荒作兩完成MM簽Ps、TI山MPs、T裹GF-另β奏、T予β真R兩Ι肢、SMAD奶2及其mR上NA表達的聯(lián)研究，并進災行階段性總幕結(jié)。朗20確05年8月逗~2005來年12月饞冤朝鞭完成雞caveo疏lin-1源表達和ca劈veoli解n-1/T匪β全R調(diào)Ι威共定位研究胳，并進行階脆段性總結(jié)。誘20餐06年1月主~2006異年6月莖州完成c組aveol氣in-1的則酪氨酸磷酸淋化狀態(tài)研究汗，并進行階臂段性總結(jié)。救罵20斯06年7月絕~12月根佩研究數(shù)據(jù)資吊料分析、總脆結(jié)、論文撰可寫及成果鑒匠定。敏預期研究濤成果努本項目所建秀立的早產(chǎn)新夏生大鼠慢性標高氧肺損傷痰模型，不僅聾為本課題提叼供了研究對江象，而且為面研究高氧肺合損傷后肺E之CM重建提世供了模型。條本研究可望呆為闡明早產(chǎn)殖兒高氧肺損蜻傷機制提供利新的線索：苦⑴清高氧暴露下豬MMP誘導濃劑/抑制劑枕失衡是高氧正肺損傷MM盈Ps增加，偏ECM重建釋紊亂的主要堆原因。蝦⑵禿高氧暴露使薦質(zhì)膜小窩表懲達或功能異音常，從而影剛響Emmp需rin/M危APKp販38和TG擴F-泊β妨/SMAD李兩條信號通燃路整合，繼醫(yī)而導致MM隸Ps增加，蝦ECM重建籌紊亂。本研虹究內(nèi)容也可景能為預防和腥干預高氧肺菜損傷提供理摸論依據(jù)。塑（二）研究你基礎(chǔ)與工作回條件工作基礎(chǔ)戶1.與本禁項目有關(guān)的朝研究工作積生累和已取得品的研究工作蒼成績吐本課題組多峽年來一直進瘦行高氧肺損變傷的發(fā)病機君制及防治的見研究，做了換許多基礎(chǔ)和拌臨床研究工盲作。已成功痰建立早產(chǎn)新陵生大鼠高濃孤度氧（85耗%～95%稅）急性肺損壟傷和慢性肺科纖維化的模扇型；已完成稻肺組織中各粱種抗氧化酶兔活力、羥脯欺氨酸含量與坊肺纖維化的蠟相關(guān)性研究但；內(nèi)源性一干氧化氮在高料氧肺損傷中魄雙重作用的撿研究；體外媽高氧對肺泡網(wǎng)巨噬細胞分默泌IL-8怎的影響研究吼；TGF-聾β由在早產(chǎn)大鼠潑高氧肺損傷撥肺組織中表屠達的研究；器基質(zhì)金屬蛋形白酶及其抑批制劑在高氧致肺損傷中的塘作用機制的幫研究；及促古紅細胞生成陳素、地塞米醒松、維甲酸迷對新生鼠高您氧肺損傷的書干預研究。獲獎課題懷目前正承擔渡的相關(guān)科研葵項目：1.2.蒙相關(guān)研究工譽作發(fā)表的文簡章：怨附：鵝基質(zhì)金屬蛋陸白酶及其抑招制劑在高氧黨肺損傷中的吐作用霸1.照高氧組病理窯學改變電集饞夸腸打濕2.白尸高氧組附MMPs禽表達御衰轉(zhuǎn)騰綠圖所1想肺發(fā)育不良托，示肺泡醫(yī)批戲餓圖續(xù)2平細胞增生、秧間質(zhì)纖維姻蹲北圖型3MMP拉-2錢強陽性表達誕數(shù)目減少、包結(jié)構(gòu)簡單忌悶湊寄須化改變軋3.峽酶譜法測梳BALF雕中明膠酶活晚性嚇4藏.回高氧暴露后賠MMPs是、個TIMPs拳表達增加暖煌尺榆婦MMP-2苦M慢MP-9菌TIM妥P-1然TIMP壘-2襖3dO輪2觀0.46刃±報0.36阻0.90示±延0.64足2.00和±糟0.47輛0.30題±晨0.23薄碼什air炭0.0理7約±妙0.10欣0.07陜±體0.16逃0.87認±烤0.5