沉淀法去除雜質（等電點法）

藥物分離與純化技術課程

項目2藥物分離純化前的預處理技術

——沉淀法去除雜質（等電點法）大綱1.等電點沉淀法2.等電點沉淀法的操作3.等電點沉淀法操作注意事項1.等電點沉淀法

利用蛋白質在等電點時溶解度最低的特性，向含有目的藥物成分的混合液中加入酸或堿，調整其pH值，使蛋白質沉淀析出的方法。一、等電點沉淀法蛋白質在溶液中存在如上平衡沉淀法去除雜質（等電點法）

等電點沉淀一般在低離子強度和pH值約為等電點的條件下進行，一般蛋白質的等電點都在偏酸性范圍內，可通過加入無機酸（如鹽酸、磷酸和硫酸等）調節(jié)pH值完成等電點沉淀。

等電點沉淀法一般多用于疏水性較大的蛋白質。

與鹽析法相比，等電點沉淀法省去了后續(xù)的脫鹽操作，當沉淀操作的pH值較低時，雜蛋白更容易變性，所以該方法仍是蛋白質初級分離的有效手段。沉淀法去除雜質（等電點法）2.等電點沉淀法原理在等電點時，蛋白質分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零，此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉淀，所以蛋白質在等電點時，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

等電點時的許多物理性質如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小，從而有利于懸浮液的過濾。沉淀法去除雜質（等電點法）二、等電點沉淀法的操作

操作條件：低離子濃度pH=pI（等電點）。等電點沉淀操作需要低離子濃度下調整溶液的pH至等電點，或在等電點的pH下利用透析等方法降低離子強度，使蛋白質沉淀。等電點沉淀操作中，多通過加入無機酸（如鹽酸、磷酸和硫酸等）調節(jié)pH。沉淀法去除雜質（等電點法）三、等電點沉淀法操作注意事項1．不同的蛋白質，具有不同的等電點。在生產過程中應根據分離要求，除去目的產物之外的雜蛋白；若目的產物也是蛋白質，且等電點較高時，可先除去低于等電點的雜蛋白。

如:細胞色素C的等電點為10.7，在細胞色素C的提取純化過程中，調pH＝6.0除去酸性蛋白，調pH＝7.5～8.0，除去堿性蛋白。沉淀法去除雜質（等電點法）2．同一種蛋白質在不同條件下，等電點不同。

在鹽溶液中，蛋白質若結合較多的陽離子，則等電點的pH值升高。如:胰島素在水溶液中的等電點為5.3，在含一定濃鋅鹽的水—丙酮溶液中的等電點為6；如果改變鋅鹽的濃度，等電點也會改變。

蛋白質若結合較多的陰離子(如C1-、SO42-等)，則等電點移向較低的pH值，因為負電荷相對增多了，只有降低pH值才能達到等電點狀態(tài)。沉淀法去除雜質（等電點法）3．目的藥物成分對pH值的要求。

生產中應盡可能避免直接用強酸或強堿調節(jié)pH值，以免局部過酸或過堿，而引起目的藥物成分蛋白或酶的變性。

另外，調節(jié)pH值所用的酸或堿應與原溶液中的鹽或即將加入的鹽相適應，如:溶液中含硫酸銨時，可用硫酸或氨水調pH值;原溶液中含有氯化鈉時，可用鹽酸或氫氧化鈉調pH值。

應以盡量不增加新物質為原則。沉淀法去除雜質（等電點法）4．各種蛋白質在等電點時，仍存在一定的溶解度，使沉淀不完全，而多數蛋白質的等電點都十分接近。當單獨使用等點電沉淀法效果不理想時，可以考慮采用幾種方法結合來實現沉淀分離。沉淀法去除雜質（等電點法）討論：1.查找資料，