動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備(共38張)

知識(shí)回顧？？？？再分化？植物細(xì)胞雜交技術(shù)利用什么原理？用什么方法可以誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合？一、原理：細(xì)胞膜具有流動(dòng)性細(xì)胞的全能性二、誘導(dǎo)方法：電刺激、聚乙二醇植物細(xì)胞雜交技術(shù)有什么用途？三、用途：獲得雜種植株脫分化當(dāng)前第1頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體當(dāng)前第2頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)一、動(dòng)物細(xì)胞融合有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動(dòng)。如精子與卵細(xì)胞的結(jié)合。

兩個(gè)細(xì)胞正在融合

受精作用當(dāng)前第3頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)(一)動(dòng)物細(xì)胞融合的概念

動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。（二）動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程與植物原生質(zhì)體融合原理相同，方法類似。雜交細(xì)胞:融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。當(dāng)前第4頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)⑴.原理：1、動(dòng)物細(xì)胞融合的基本原理是什么？2、動(dòng)物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)方式是什么？與植物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)方式有什么不同？

與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細(xì)胞膜的流動(dòng)性。⑵.誘導(dǎo)方式：物理法：電激、振動(dòng)、離心化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）生物法：滅活的病毒例如：仙臺(tái)病毒當(dāng)前第5頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)仙臺(tái)病毒紫外線喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）當(dāng)前第6頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)細(xì)胞A細(xì)胞B雜交細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法當(dāng)前第7頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）當(dāng)前第8頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)(三)動(dòng)物細(xì)胞融合的應(yīng)用1.突破有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。2.成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。鼠—雞、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—雞、人—蛙、酵母菌—雞、人—胡蘿卜等3、重要用途：制備單克隆抗體。當(dāng)前第9頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)植物體細(xì)胞雜交、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較探究點(diǎn)一.細(xì)胞工程比較主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株意義物理、化學(xué)法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜流動(dòng)性細(xì)胞增殖細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性的障礙當(dāng)前第10頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)思考與探究1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。誘導(dǎo)融合方法不同：動(dòng)物細(xì)胞誘導(dǎo)融合所用的方法比植物體細(xì)胞雜交多一類滅活的病毒誘導(dǎo)；結(jié)果不同：植物體細(xì)胞雜交培養(yǎng)成了雜種植株，而動(dòng)物細(xì)胞融合只培養(yǎng)出了雜交細(xì)胞。當(dāng)前第11頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)探究點(diǎn)二、單克隆抗體的制備

什么是抗體？

抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。

當(dāng)前第12頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)1、獲得抗體的傳統(tǒng)方法把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需的抗體。缺點(diǎn)：產(chǎn)量低，純度低，特異性差。當(dāng)前第13頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)三、單克隆抗體2、抗體是如何產(chǎn)生的？B淋巴細(xì)胞抗原增殖分化成漿細(xì)胞3、B淋巴細(xì)胞有何特點(diǎn)？一種B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生一種抗體。當(dāng)前第14頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)思考：1、在體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞有沒(méi)有可能無(wú)限增殖？不可能2、我們學(xué)過(guò)的什么細(xì)胞具有這樣的能力？癌細(xì)胞3、有什么辦法讓B淋巴細(xì)胞也具有這樣的能力？細(xì)胞融合當(dāng)前第15頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每一個(gè)B細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。1、請(qǐng)從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念用單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行（無(wú)性繁殖）克隆，得到的基因型相同的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。當(dāng)前第16頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)２、實(shí)驗(yàn)原理：動(dòng)物細(xì)胞融合創(chuàng)始人：米爾斯坦單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖柯勒當(dāng)前第17頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能。利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性。利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有B淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞。利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。當(dāng)前第18頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)探究三：?jiǎn)慰寺】贵w的制備過(guò)程過(guò)程①免疫動(dòng)物注射抗原的目的是什么？獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）誘導(dǎo)細(xì)胞融合常用方法是什么？滅活的仙臺(tái)病毒如何進(jìn)行篩選？具有篩選作用的培養(yǎng)基（HAT培養(yǎng)基）？種BB、B瘤、瘤瘤、雜交細(xì)胞如何獲得大量的單克隆抗體？②免疫B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備③細(xì)胞融合④雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)⑤雜交瘤細(xì)胞的篩選⑥分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立⑦單克隆抗體的大量制備當(dāng)前第19頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)

？

？

抗原效應(yīng)B細(xì)胞篩選篩選（AA型、BB型）AB型雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞當(dāng)前第20頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)過(guò)程：抗原小鼠效應(yīng)B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選多孔培養(yǎng)板單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，篩選能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)提取出單克隆抗體當(dāng)前第21頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)考考你！1.在制備單克隆抗體的過(guò)程中，選用哪兩種細(xì)胞進(jìn)行融合？為什么選擇這兩種細(xì)胞？漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞漿細(xì)胞能產(chǎn)生單一抗體，但不能無(wú)限增殖；骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生單一抗體。當(dāng)前第22頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)考考你！2、在這過(guò)程中進(jìn)行了幾次篩選？分別在哪個(gè)步驟進(jìn)行篩選？?jī)纱魏Y選。第一次在B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合以后篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。當(dāng)前第23頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)知識(shí)拓展如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)及克隆化培養(yǎng)？融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行3～4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。當(dāng)前第24頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)探究四、單克隆抗體的應(yīng)用

請(qǐng)同學(xué)們根據(jù)自己所收集的資料，談?wù)剢慰寺】贵w的應(yīng)用。１可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)２可用于疾病治療３可用于運(yùn)載藥物（作為運(yùn)載對(duì)應(yīng)疾病的藥物的“生物導(dǎo)彈“。）“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物當(dāng)前第25頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)小結(jié)當(dāng)前第26頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)

細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合

漿篩選

瘤細(xì)胞

雜交細(xì)胞培養(yǎng)選出能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群繼續(xù)培養(yǎng)體外培養(yǎng)

體內(nèi)培養(yǎng)從培養(yǎng)液或小鼠腹水中取出

單克隆抗體當(dāng)前第27頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)練習(xí)：1、動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動(dòng)物細(xì)胞融合中有特殊性的是（）A、融合的原理B、融合的優(yōu)點(diǎn)C、融合的誘導(dǎo)手段D、融合的過(guò)程當(dāng)前第28頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)練習(xí)：2、動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是（）A、克服遠(yuǎn)緣雜交不親和B、制備單克隆抗體C、培育新物種D、生產(chǎn)雜種細(xì)胞當(dāng)前第29頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)練習(xí)：3、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）

A、經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞

B、不經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞

C、經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞

D、不經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞當(dāng)前第30頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)練習(xí)：4.單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞

A．②④B．①③⑤

C．①②③④D．②③當(dāng)前第31頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)練習(xí)：5、研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（）A．利用單克隆抗體特異性地對(duì)抗癌細(xì)胞B．以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞C．抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成D．單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞結(jié)合當(dāng)前第32頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)練習(xí)：6．只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法（）

A．PEG

B．滅活的病毒

C．電刺激D．離心7、“生物導(dǎo)彈”是指（）

A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞

C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞

D.在單抗上連接抗癌藥物當(dāng)前第33頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)練習(xí)：8、下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，不正確的是（）A．B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般不

需要滅活的仙臺(tái)病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B．融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又

能產(chǎn)生單克隆抗體C．體外培養(yǎng)時(shí)，一個(gè)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生

抗體，但不能無(wú)限增殖D．單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈

敏度高，優(yōu)越性明顯A當(dāng)前第34頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下，培養(yǎng)得到的細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來(lái)的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過(guò)克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。當(dāng)前第35頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)2.制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過(guò)程中，每一種B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細(xì)胞大量增殖。B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性──在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。當(dāng)前第36頁(yè)\共有38頁(yè)\編于星期五\18點(diǎn)知識(shí)拓展3.為什么不只用兩個(gè)而要用多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞間的融合？就目前常用的細(xì)胞融合方法來(lái)看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的