常見性病實驗室檢測方法的原理方法和臨床意義

（優(yōu)選）常見性病實驗室檢測方法的原理方法和臨床意義當(dāng)前第1頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫50-60年代經(jīng)典性病80-90年代監(jiān)測性病目前傳染法報告病例監(jiān)測性病梅毒淋病沙眼衣原體感染生殖器皰疹尖銳濕疣我國主要流行的性傳播疾?。ㄐ圆。┥逞垡略w:30%～50%生殖支原體:10%～40%其它:20%～30%梅毒淋病HIV/AIDS當(dāng)前第2頁\共有44頁\編于星期五\19點性病實驗室檢測方法規(guī)范化方法、試劑評估

技術(shù)規(guī)范臨床應(yīng)用：敏感性、特異性疾病篩查：快速、簡便、敏感血液篩查：大通量、高敏感流行病學(xué)調(diào)查：取材方便、人員培訓(xùn)管理骨干培訓(xùn)技術(shù)培訓(xùn)當(dāng)前第3頁\共有44頁\編于星期五\19點

主要常見性病實驗室檢測介紹梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染生殖器皰疹陰道滴蟲病細(xì)菌性陰道病生殖器念珠菌病當(dāng)前第4頁\共有44頁\編于星期五\19點

一、梅毒當(dāng)前第5頁\共有44頁\編于星期五\19點全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范6梅毒及其病原體樣品的采集和處理病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測核酸檢測實驗室生物安全梅毒血清學(xué)檢測實驗室質(zhì)量管理當(dāng)前第6頁\共有44頁\編于星期五\19點常用梅毒檢測方法病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測當(dāng)前第7頁\共有44頁\編于星期五\19點病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進(jìn)行檢測。方法：病原學(xué)檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法當(dāng)前第8頁\共有44頁\編于星期五\19點病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，當(dāng)前第9頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒血清學(xué)檢測分類(1)非梅毒螺旋體抗體檢測試驗（非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗體檢測試驗（特異性梅毒抗體）兩類方法。當(dāng)前第10頁\共有44頁\編于星期五\19點非梅毒螺旋體抗體試驗1、原理：

梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體，可檢測梅毒患者血中的抗類脂抗原的抗體2、方法：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)

甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）性病研究實驗室試驗(VDRL)等。當(dāng)前第11頁\共有44頁\編于星期五\19點RPR結(jié)果當(dāng)前第12頁\共有44頁\編于星期五\19點非梅毒螺旋體抗體試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。當(dāng)前第13頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒螺旋體抗體試驗1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋為抗原，檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體2、方法：梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）化學(xué)發(fā)光試驗梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(TP-RT)FTA-ABS

梅毒IgM抗體檢測（TP-IgM）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（TP-WB）等

當(dāng)前第14頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒螺旋體抗體試驗臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗試驗仍可陽性，故TPPA等試驗陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進(jìn)行診斷。當(dāng)前第15頁\共有44頁\編于星期五\19點非梅毒螺旋體抗體試驗結(jié)果解釋示意圖早期晚期一期二期早期潛伏晚期潛伏三期

治療前治療后

陽性陰性當(dāng)前第16頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒螺旋體抗體試驗結(jié)果解釋示意圖早期一期二期早期潛伏晚期晚期潛伏三期

治療前治療后陽性陰性當(dāng)前第17頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果的臨床意義總匯

USRTPPA意義

RPRTP-ELISAVDRLTP-RT__排除梅毒一期梅毒的早期

++現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生的嬰兒除外)+-生物學(xué)假陽性

-+早期梅毒經(jīng)治療后當(dāng)前第18頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒血清學(xué)檢測意義檢測目的:臨床診斷、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。以流行病學(xué)監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學(xué)感染率和發(fā)病率。當(dāng)前第19頁\共有44頁\編于星期五\19點梅毒血清學(xué)檢測檢測策略及要求檢測策略以臨床診斷為目的兩種策略以血液篩查為目的的檢測策略以流行病學(xué)監(jiān)測為目的的三種檢測策略檢測要點根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。可采用任何一類梅毒血清學(xué)檢測方法作為篩查試驗。檢測試劑要求所有應(yīng)用于臨床的檢測試劑均必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑，有批批檢合格證的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。當(dāng)前第20頁\共有44頁\編于星期五\19點二、淋病當(dāng)前第21頁\共有44頁\編于星期五\19點常用淋病檢測方法直接顯微鏡檢查分離培養(yǎng)淋球菌當(dāng)前第22頁\共有44頁\編于星期五\19點直接顯微鏡檢查原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細(xì)胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。當(dāng)前第23頁\共有44頁\編于星期五\19點直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本敏感性及特異性可高達(dá)95%～99%，具診斷價值。宮頸標(biāo)本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時敏感性僅40～70%。

不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。亦不能用于療后判愈。如果在多形核細(xì)胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進(jìn)行確證。當(dāng)前第24頁\共有44頁\編于星期五\19點淋球菌培養(yǎng)1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點：敏感性81~100%。特異性100%—當(dāng)前第25頁\共有44頁\編于星期五\19點淋球菌培養(yǎng)培養(yǎng)條件：35℃～36℃，含5%～10%CO2，濕潤（70%濕度）的環(huán)境。

CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2產(chǎn)氣袋及燭缸提供。使用燭缸時，應(yīng)使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養(yǎng)時間：24~48小時當(dāng)前第26頁\共有44頁\編于星期五\19點淋球菌的初步鑒定

初步鑒定淋球菌的依據(jù)菌落特征氧化酶試驗革蘭染色當(dāng)前第27頁\共有44頁\編于星期五\19點淋球菌培養(yǎng)的臨床意義培養(yǎng)法為診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn).用于女性感染者、亞臨床感染者、以及來自直腸和咽部的感染的確診試驗。當(dāng)前第28頁\共有44頁\編于星期五\19點

生殖道沙眼衣原體感染當(dāng)前第29頁\共有44頁\編于星期五\19點生殖道沙眼衣原體感染簡介50年代80年代梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS2007年后梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS當(dāng)前第30頁\共有44頁\編于星期五\19點常用生殖道衣原體感染檢測方法抗原檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）免疫層析快速檢測核酸檢測當(dāng)前第31頁\共有44頁\編于星期五\19點酶聯(lián)免疫吸附試驗1、原理：于衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗體復(fù)合物，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測衣原體抗原。2、方法特點敏感性：79－97％特異性:97－99％試驗結(jié)果陰性時，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標(biāo)本采集不當(dāng)?shù)木壒十?dāng)前第32頁\共有44頁\編于星期五\19點結(jié)果判讀客觀性強(qiáng)，適宜于大樣本沙眼衣原體感染的檢測。在沙眼衣原體高流行率的人群臨床和健康體檢；低流行率（小于5%）的人群中應(yīng)用時，結(jié)果解釋應(yīng)慎重。酶聯(lián)免疫吸附試驗臨床意義當(dāng)前第33頁\共有44頁\編于星期五\19點抗原快速檢測1、原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標(biāo)記的沙眼衣原體抗體濾紙條或卡，快速檢測標(biāo)本中的沙眼衣原體抗原。2、方法特點簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位標(biāo)本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結(jié)果當(dāng)前第34頁\共有44頁\編于星期五\19點抗原快速檢測臨床意義該方法主要適用于女性患者宮頸標(biāo)本的檢測，敏感性較低。該法快速、簡便，無需特殊儀器，因此，較適合基層實驗室開展。當(dāng)前第35頁\共有44頁\編于星期五\19點核酸擴(kuò)增檢測1、原理：核酸擴(kuò)增技術(shù)是通過擴(kuò)增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)粒、染色體和RNA）檢測病原體。2、方法包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、等溫鏈置換擴(kuò)增技術(shù)（SDA）、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)（TMA）等。目前國內(nèi)廣泛使用的有實時熒光PCR。當(dāng)前第36頁\共有44頁\編于星期五\19點核酸擴(kuò)增檢測臨床意義核酸擴(kuò)增檢測具有很高的敏感性和特異性，世界衛(wèi)生組織已推薦為擴(kuò)大的生殖道沙眼衣原體感染實驗室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。核酸擴(kuò)增檢測不僅可用于宮頸、尿道標(biāo)本中沙眼衣原體的檢測，也可用于男女性尿液標(biāo)本的檢測。開展核酸檢測的實驗室應(yīng)通過有關(guān)部門考核取得開展臨床核酸檢測技術(shù)資格證。當(dāng)前第37頁\共有44頁\編于星期五\19點方法評價核酸檢測

是目前為止最好的檢測方法－但存在檢測敏感性上的局限性ELISA抗原檢測

嚴(yán)格按操作說明進(jìn)行操作－是非常好的檢測方法

高通量，自動化快速抗原檢測

操作時間短，單人份操作，但敏感性極低當(dāng)前第38頁\共有44頁\編于星期五\19點生殖器皰疹當(dāng)前第39頁\共有44頁\編于星期五\19點常用生殖器皰疹檢測方法抗原檢測抗體檢測當(dāng)前第40頁\共有44頁\編于星期五\19點抗原檢測1、原理：將HSV特異性單克隆抗體包被在酶標(biāo)板微孔壁上，捕獲標(biāo)本中的HSV抗原，形成抗原抗體復(fù)合物，繼而與酶標(biāo)記的二抗結(jié)合，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測HSV。2、方法：ELISA為目前臨床上HSV抗原檢測的常用方法之一當(dāng)前第41頁\共有44頁\編于星期五\19點抗原檢測臨床意義

生殖器皰疹感染的臨床表現(xiàn)變化多樣，臨床診斷的準(zhǔn)確性不足50%～70%，通過實驗室檢測手段可確證HS