長期喂養(yǎng)守宮木干粉對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺疾病大鼠主要臟器的影響

長期喂養(yǎng)守宮木干粉對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺疾病大鼠主要臟器的影響

又名天綠香、木犀、木珍、越南菜和泰國枸杞。這是一種多年生植物，具有獨(dú)特的味道和良好的口感。廣泛種植于東南亞和中國南方其他地區(qū)。1994年以來臺(tái)灣婦女將其作為減肥蔬菜而有規(guī)律地食用,卻發(fā)現(xiàn)有人因此患慢性呼吸困難、嚴(yán)重的肺功能障礙。但有關(guān)守宮木的毒性研究并不多見,本研究用守宮木干粉喂飼雄性SD大鼠90d,觀察長期喂養(yǎng)守宮木干粉對(duì)雄性大鼠主要臟器的病理影響。1材料和方法1.1材料表面1.1.1干苜蓿粉的制備海南產(chǎn)守宮木嫩芽,每1000g去除老化的端部約300g,余下的700g在干燥箱內(nèi)烘干、粉碎,去除無法粉碎的粗纖維,可得干粉約100g,出粉率約為14.3%。實(shí)際加工的市購品約200千克,以此計(jì)算,折合成鮮樣應(yīng)*7倍。按大鼠每100g體重每日攝入10g飼料的量折算制成含2%、4%和8%守宮木干粉的飼料。1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)室南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的SPF級(jí)SD種健康大白鼠,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(粵)2006-0015,質(zhì)量合格證編號(hào):No0027577,體重60~90g,顆粒飼料亦由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室為SPF級(jí),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(粵)2003-0011。室溫(22±2)℃,濕度60%~80%。1.2大鼠的飼養(yǎng)管理80只雄性大鼠在實(shí)驗(yàn)室條件下適應(yīng)3d后,隨機(jī)分成受試物低、中、高3個(gè)劑量組和陰性對(duì)照組,劑量分別為2.0、4.0和8.0g/kg,每組20只,分籠飼養(yǎng),樣品按大鼠每100g體重每日攝入10g飼料的量折算制成含2.0%、4.0%和8.0%的守宮木干粉飼料,分別給低、中、高劑量組攝食,陰性對(duì)照組給予普通顆粒飼料,連續(xù)90d。每鼠保證有充足飲水和飼料供應(yīng),自由飲食。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,對(duì)各組大鼠進(jìn)行大體病理學(xué)檢查,取主要臟器肝、脾、腎和睪丸等器官分別稱重,同時(shí)取肺、肝、腎、脾、胃、小腸和睪丸經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為10%的甲醛固定后進(jìn)行常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色的病理組織學(xué)檢查。1.3統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件包進(jìn)行方差分析與卡方檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1兩組大鼠體重的比較由圖1可見,整個(gè)試驗(yàn)期間各組動(dòng)物體重均保持增長,但給予守宮木干粉各劑量組的體重明顯低于對(duì)照組,從第1周開始中、高劑量組體重與對(duì)照組比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明每日給予4g/kg以上的守宮木干粉可減輕雄性大鼠的體重。2.2連續(xù)給藥對(duì)大鼠睪丸發(fā)育的影響連續(xù)給予守宮木干粉90d,低、中劑量組大鼠大體檢查未見明顯病理改變;雄性高劑量組4例(4/9)動(dòng)物雙側(cè)睪丸發(fā)育不良、體積較小,約為正常睪丸的1/2,發(fā)育不良率為44.44%,重量明顯減輕,與對(duì)照組比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),連續(xù)給予含8%守宮木粉90d可影響雄性大鼠的睪丸發(fā)育。2.3兩組睪丸的重量比給予守宮木干粉90d,高劑量組睪丸的重量比對(duì)照組減輕,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表1),但臟體比卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.4高劑量動(dòng)物睪丸曲細(xì)精管內(nèi)生精細(xì)胞的變化d喂養(yǎng)大鼠睪丸組織病理學(xué)檢查結(jié)果經(jīng)病理組織學(xué)檢查,雄性低、中劑量組的大鼠睪丸亦未見明顯異常,雄性高劑量組有3只動(dòng)物睪丸曲細(xì)精管中生精上皮發(fā)育不良、另有3只動(dòng)物的睪丸約80%曲細(xì)精管的生精上皮發(fā)育不良,生精小管腔內(nèi)各級(jí)生精細(xì)胞減少,未見各級(jí)生精細(xì)胞有序排列,有的曲細(xì)精管內(nèi)的生精上皮完全消失,有的管腔中可見異常的多核細(xì)胞,個(gè)別動(dòng)物睪丸間質(zhì)充滿淡粉色均染物,似膠狀物,其周邊見有空泡,見圖2~4。3織學(xué)檢查結(jié)果守宮木是原產(chǎn)于東南亞的灌木植物,一般是將葉子加熱后食用,未見肺損害的報(bào)道。1994年臺(tái)灣將其作為減肥食品引進(jìn),榨汁后服用出現(xiàn)了肺損害的病例,經(jīng)病理診斷為閉塞性細(xì)支氣管炎;1996年日本將其作成粉末狀或片劑保健食品銷售,共報(bào)道了8例與守宮木相關(guān)的閉塞性細(xì)支氣管炎。有關(guān)守宮木試驗(yàn)動(dòng)物毒性研究的報(bào)道極少見,2005年郭巨先等報(bào)道了守宮木的毒理學(xué)研究情況,其劑量設(shè)計(jì)為2.5、5.0和10.0g/kg,摻入飼料中喂養(yǎng)SD大鼠30d,病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示,從低劑量組開始引起睪丸病變,曲細(xì)精管明顯水腫,曲細(xì)精管上皮細(xì)胞異常分裂,管腔中出現(xiàn)大量異常的多倍體細(xì)胞,報(bào)道結(jié)果基本與本文的睪丸損害是一致的。Yu等從守宮木中提取GGK、EtOAc和n-BuOH3種物質(zhì),分別給予雄性Wistar大鼠28d,GGK明顯降低大鼠的體重,但未見肺、肝和腎臟器的病理損害;n-BuOH組觀察到阻塞性細(xì)支氣管炎和組織性肺炎的改變,但各組均未報(bào)道對(duì)睪丸的病理影響。本研究結(jié)果顯示,曲細(xì)精管中各級(jí)生精細(xì)胞減少,甚至消失,有的管腔中出現(xiàn)多核巨細(xì)胞,睪丸間質(zhì)變寬,充滿了淡粉色均染似膠狀物,在均染物的周邊還見有小的空泡。大鼠生后55d左右為性成熟期,之前為青春期,6周齡時(shí)大鼠的精子開始發(fā)育形成。青春前期與青春期時(shí)哺乳動(dòng)物生殖發(fā)育的重要時(shí)期,對(duì)外源性物質(zhì)的作用非常敏感。本試驗(yàn)選擇離乳大鼠,約4周齡,此時(shí)大鼠處于青春前期,連續(xù)喂飼守宮木干粉90d至大鼠成年。在摻入8.0g/kg守宮木干粉的喂飼組,有4例(4/9)動(dòng)物大體觀察雙側(cè)睪丸體積較小,約為正常睪丸的1/2,重量明顯減輕,病理組織學(xué)檢查除了見到各級(jí)生精細(xì)胞減少,甚至有序排列消失,還發(fā)現(xiàn)曲細(xì)精管管腔中見異常的多核細(xì)胞,它們形成原因有待進(jìn)一步研究證實(shí)。以上