勞倦加飲食不節(jié)造模方法治療脾胃虛證代謝綜合征的研究

勞倦加飲食不節(jié)造模方法治療脾胃虛證代謝綜合征的研究

成功建立代謝綜合征（ms）動物模型是研究ms的基礎(chǔ)和必要的。目前MS的基礎(chǔ)研究多選用大鼠MS模型,按照造模方法一般將MS鼠類模型分為三類,即遺傳型模型、喂養(yǎng)型模型和藥物型模型。喂養(yǎng)型模型主要是使用無特殊遺傳背景的大鼠為造模對象,并給予長期高熱量、高脂肪、高鹽等攝入誘導(dǎo)其表現(xiàn)出MS的相關(guān)臨床癥狀。因其比較穩(wěn)定可靠,且方法簡單易行、成本低、成模率高,廣泛應(yīng)用于MS實驗研究。本實驗以期建立一種經(jīng)濟(jì)、可靠、易于操作、成模周期短、更適合用于研究MS機(jī)制的動物模型,同時考慮到多吃少動的現(xiàn)代生活方式所導(dǎo)致的肥胖是MS重要的致病因素,通過喂飼大鼠高糖高脂飼料成功誘導(dǎo)大鼠MS的模型,為MS的發(fā)病機(jī)制研究提供了可靠的研究平臺。1材料表面1.1動物驅(qū)動scxk健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠50只,體質(zhì)量180±20g,由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教學(xué)實驗中心提供(動物合格證號SCXK(遼)2004-0018)。實驗前大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1d,自由飲水,無不良反應(yīng)及進(jìn)食、飲水和活動正常者納入實驗。1.2實驗飼料高脂飼料配方:2%膽固醇,丙硫氧嘧啶,20%砂糖,10%玉米油,8%蛋黃粉和60%基礎(chǔ)飼料混合而成。1.3實驗室管理方案遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教學(xué)實驗中心動物實驗室,室內(nèi)自然采光,通風(fēng)良好,實驗室全程保持室溫20±3.0℃,濕度40%,明暗周期12h。1.4化學(xué)試劑及試劑人胰島素(INS,ELISA試劑盒:美國ADL公司,批號RT110371)、膽固醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,編號69008214,批號F20061011)。1.5儀器、儀器和檢測方法電子天平(大連星海電子衡器有限公司MODELDS-671),全自動生化分析儀(日本日立7600型),TG16-WS臺式高速離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司),全自動血糖儀(強(qiáng)生穩(wěn)豪倍優(yōu)型),數(shù)字體溫計(歐姆龍MC-612)。2方法2.1實驗組按體質(zhì)量隨機(jī)分成空白對照組(n=10)和模型組(n=30)2組。2.2模型方法單日喂食甘藍(lán)15~20g/只,自由飲水,游泳至耐力極限。雙日高糖高脂膳食持續(xù)喂養(yǎng),共計12周。2.3脾虛證和代謝綜合征的評估標(biāo)準(zhǔn)2.3.1評估性情虛弱的標(biāo)準(zhǔn)(1)體毛光亮度減退;(2)倦怠,懶動;(3)糞便時軟、時溏;(4)游泳耐力下降。2.3.2血脂異常及胰島素抵抗(1)體質(zhì)量增加;(2)空腹血糖增高;(3)血脂異常:空腹血TG增高及(或)HDL-C降低;(4)胰島素抵抗。具備以上4項組成成分中的3項或全部者即可診斷為MS成功模型。2.4樣品采集標(biāo)本采集前禁食12h,空腹眶后靜脈取血,以3000r/min,4℃離心10min分離血清,分別送檢。2.5測試項目和方法2.5.1一般觀察2.5.2腹部血糖2.5.3三脂和高密度脂肪采用全自動生化分析儀測定。2.5.4空腹血清胰島素菲尼克斯2.5.5胰島素敏感指數(shù)isi采用李光偉計算方法,以空腹血糖與空腹胰島素乘積倒數(shù)的自然對數(shù)來表示,即ISI=Ln1/(FPG·FINS)。2.6統(tǒng)計分析方法采用IBMSPSSStatistics19軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。各組實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±s)表示,各組數(shù)據(jù)平均數(shù)之間的差異采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3結(jié)果3.1基站結(jié)果顯示,造模組與正常對照組在實驗初始時在體質(zhì)量、血糖和血脂方面組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),基線水平齊。3.2體毛亮度下降模型組從第2周后表現(xiàn)為食少懶動,體質(zhì)量增加,大便溏薄,異味重,精神萎靡不振,體毛光亮度減退,游泳耐力逐日下降。正常對照組體質(zhì)量逐日遞增,食欲好,活動正常,大便正常,背毛光澤,反應(yīng)靈活。3.3組患者第4周開始2組之間比較表2顯示,模型組大鼠體質(zhì)量與正常對照組比較逐漸增加,從第4周開始2組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。模型組大鼠空腹血糖與正常對照組比較明顯增加,從第6周開始2組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.4組患者比較表3顯示,模型組大鼠甘油三酯與正常對照組比較明顯增加,2組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。模型組大鼠高密度脂蛋白與正常對照組比較明顯降低,2組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.5組患者胰島素敏感指數(shù)、胰島素敏感指數(shù)比較表4顯示,模型組大鼠血清胰島素與正常對照組比較顯著升高,2組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),胰島素敏感指數(shù)顯著下降,2組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.6大鼠或大鼠死亡根據(jù)模型評估標(biāo)準(zhǔn),因模型評估不達(dá)標(biāo)而剔除4只,并先后有2只大鼠死亡,尸體解剖沒有發(fā)現(xiàn)異常,推測可能與游泳后未及時將大鼠擦干,導(dǎo)致大鼠著涼、體質(zhì)減弱等有關(guān)。其余大鼠均符合成模標(biāo)準(zhǔn),成模大鼠總共24只,成模率為80%。4高糖高脂飲食對ms的影響實驗根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論,以勞倦加飲食不節(jié)的復(fù)合因素,造成脾氣虛證MS模型。模型組出現(xiàn)了游泳耐力逐日下降,食少懶動,大便溏薄,精神萎靡不振,體毛光亮度減退,從第4周后體質(zhì)量開始顯著增加,第6周后空腹血糖增高,甘油三酯和高密度脂蛋白分別從第2周后表現(xiàn)出異常,造模結(jié)束后模型組出現(xiàn)高胰島素血癥、胰島素抵抗,符合本研究擬建立的脾氣虛證、代謝綜合證的評估標(biāo)準(zhǔn)。實驗成功地復(fù)制與人類相似的脾氣虛證MS大鼠模型。目前,有關(guān)高糖高脂飲食誘導(dǎo)MS模型的機(jī)制還不是很清楚。PagliassottiMJ等認(rèn)為,高糖可能造成體內(nèi)的氧化損傷,其促氧化效應(yīng)可引起血糖或葡萄糖耐量異常。同時高碳水化合物飲食可刺激肝臟脂肪的生成,提高血清中甘油三酯的水平,從而引起酯酰輔酶A的升高,升高的酯酰輔酶A增加了脂肪組織中飽和脂肪酸的含量,而脂肪組織中飽和脂肪酸與降低骨骼肌中胰島素的活動有關(guān)?？梢?脂代謝的紊亂可影響糖代謝中胰島素的分泌,引起糖代謝紊亂。高糖飲食還可引起高胰島素血癥,并導(dǎo)致脂蛋脂酶活性的增高,對脂肪在體內(nèi)積累具有重要的作用,可引起皮下脂肪和腹腔內(nèi)脂肪積累。Wilkes等認(rèn)為,高脂飲食直接降低胰島素作用下骨骼肌和脂肪組織對葡萄糖的吸收作用,同時提高肝臟葡萄糖的生成。因此,攝入高脂飲食會改變對胰島素敏感組織葡萄糖的轉(zhuǎn)變規(guī)律,從而導(dǎo)致整個機(jī)體糖代謝的紊亂。曹廷兵等認(rèn)為,長期高脂飲食攝入可通過影響糖脂代謝和核受體基因參與血脂、胰島素抵抗的發(fā)生,通過影響炎癥相關(guān)基因、能量調(diào)節(jié)基因參與肥胖和高血壓的發(fā)生。上述基因改變可能是飲食介導(dǎo)MS發(fā)生的原因。游離脂肪酸(F