黃褐斑患者的皮膚組織學(xué)改變及角蛋白10的表達(dá)

黃褐斑患者的皮膚組織學(xué)改變及角蛋白10的表達(dá)

黃褐斑是臨床上常見的免疫性色素增加性疾病。亞洲人主要生活在臉、臉頰、下眼瞼、鼻根等部位。對(duì)黃褐斑組織病理變化的研究很少。角蛋白屬于細(xì)胞骨架中中間絲蛋白家族,它是在細(xì)胞的增殖、分化和成熟過程中形成的,細(xì)胞角蛋白的表達(dá)情況也間接反映了細(xì)胞的增殖和分化情況。我們利用常規(guī)HE染色、Fontana-Masson染色和免疫組化染色觀察了黃褐斑皮損的組織結(jié)構(gòu)變化和角蛋白10的分布情況。1材料和方法1.1兩組患者術(shù)后皮膚主動(dòng)對(duì)照檢測(cè)取16例黃褐斑患者的瞼袋整形術(shù)后外眥處多余皮膚組織做病理檢測(cè),取5例無明顯色斑的瞼袋患者術(shù)后皮膚作對(duì)照檢測(cè)。所有黃褐斑患者均符合中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)皮膚性病專業(yè)委員會(huì)色素病學(xué)組《關(guān)于黃褐斑的臨床診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)》(2003年修訂稿)。1.2試劑抗體:CK10McAb(克隆號(hào):DE-K10)為福建邁新公司產(chǎn)品,SP試劑盒為武漢博士德公司產(chǎn)品。1.3免疫組化結(jié)果1.3.1皮膚組織用福爾馬林固定,作石蠟切片,按照常規(guī)方法行HE染色和Fontana-Masson染色(膠原纖維采用VanGieson氏液作對(duì)比染色)。1.3.2免疫組織化學(xué)染色(SP法):(1)石蠟切片用二甲苯脫蠟水化;(2)阻斷內(nèi)源性過氧化物酶、3%H2O2甲醇水溶液室溫下10min;(3)抗原修復(fù):采用熱修復(fù)法;(4)正常羊血清封閉,室溫10min;(5)滴加角蛋白10抗體在濕盒中,室溫或37℃,1~2h,PBS洗片;(6)滴加生物素化二抗,室溫10min,PBS洗片;(7)滴加適量鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶,室溫10min,PBS洗片;(8)DAB顯色約3~5min,顯微鏡下觀察至特異性染色清晰,終止顯色自來水沖洗;(9)蘇木素復(fù)染;(10)梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹脂封片觀察。棕黃色為陽性反應(yīng)。1.3.3免疫組化結(jié)果判斷:選取5例黃褐斑患者和5例無色斑皮膚的CK10免疫組化染色切片,每張切片在40×10光鏡下隨機(jī)觀察3個(gè)表皮層的視野,共觀察30個(gè)視野。表皮層細(xì)胞胞漿上呈現(xiàn)棕色或者棕黃色顆粒為陽性,并對(duì)陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。半定量判定:(1)染色強(qiáng)度:無染色為0分,淡染色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分;(2)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù):細(xì)胞陽性數(shù)≤5%為0分(陰性),5%~25%為1分,25%~50%為2分,細(xì)胞陽性數(shù)≥50%為3分。取兩項(xiàng)總分,0分為陰性-,1~2分為+,3~4分為++,5~6分為+++。1.3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件,采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn),分析病損皮膚和正常皮膚CK10表達(dá)的差異。2結(jié)果2.1黑素—組織學(xué)特征:黃褐斑皮損處表皮變薄,角質(zhì)層增厚?；讓雍图瑢蛹?xì)胞周圍可見明顯色素顆粒,HE染色中黑素顆粒呈紅褐色,Fontana-Masson染色中黑素顆粒呈黑色,膠原纖維呈紅色。色素大多數(shù)位于表皮基底層和釘狀突,少數(shù)位于毛囊上段、基底上層及真皮層,并呈傘狀或者帽樣包繞在細(xì)胞核周圍。真皮膠原紊亂、斷裂,皮膚附屬器數(shù)量較少。非病損皮膚真皮層膠原密度高,排列有序,汗腺、毛囊數(shù)量較多,基底上層和真皮層少見色素顆粒(見圖1~4)。2.2黃斑病損基底紅外纖維膜的表達(dá)CK10在正常皮膚和病損皮膚的基底上層、外根鞘內(nèi)層和皮脂腺腺泡的外層均有一定程度表達(dá),但在黃褐斑病損基底上層中表達(dá)更為明顯(見圖5~6)。2.3統(tǒng)計(jì)評(píng)估病損皮膚和正常皮膚CK10表達(dá)具有一定差異(P<0.05),CK10表達(dá)增強(qiáng),見表1。3黃斑的變化情況黃褐斑在亞洲人種中發(fā)病率很高,目前黃褐斑的治療仍存在一定困難,主要由于黃褐斑的病因尚不清楚,關(guān)于黃褐斑的病理改變也存在很多爭議,具體有:(1)一般認(rèn)為黃褐斑的表皮層黑素含量增加,但黑素細(xì)胞數(shù)目是否有增加存在爭議;(2)一般認(rèn)為黃褐斑位于表皮層,是以表皮為主的皮膚內(nèi)黑色素增多,但是否存在真皮型黃褐斑也有爭議。最新的黃褐斑診斷分類標(biāo)準(zhǔn)也只有按照部位和病因分類,無病理分類。國內(nèi)對(duì)黃褐斑的研究文獻(xiàn)大多以治療效果評(píng)價(jià)為主,少數(shù)學(xué)者研究了諸如干細(xì)胞因子及其配體c-kit受體的表達(dá)情況。因此進(jìn)一步研究黃褐斑的病理改變是有意義的。黃褐斑的形成既有內(nèi)在因素,又有外界因素。根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn),黃褐斑的發(fā)生部位多為顴頰部,此處暴露突出,皮膚薄,皮下脂肪少,易受到外界環(huán)境的侵害,容易發(fā)生皮膚老化和形成色斑。我們的病理切片結(jié)果表明,黃褐斑皮損表皮薄,皮膚附件和皮下脂肪少,所以較易干燥,皮膚老化較快,角質(zhì)層明顯增厚。色素顆粒由黑素細(xì)胞合成,黃褐斑患者基底層黑素顆粒增多,黑素顆粒通過黑素細(xì)胞樹突進(jìn)入角質(zhì)細(xì)胞后像傘樣或者帽樣覆蓋于細(xì)胞核頂上方,保護(hù)細(xì)胞核免受紫外線輻射損傷。因此,黃褐斑的生成除了內(nèi)分泌因素之外,也可能是身體抵抗外界侵害的一種自我保護(hù)機(jī)制。角蛋白是上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)蛋白和主要蛋白,直徑約為10nm左右,它在細(xì)胞內(nèi)形成廣泛的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。角蛋白的分子量為40~68KD,隨著細(xì)胞的分化程度增高,細(xì)胞表達(dá)的角蛋白的分子量也隨著增加。研究表明,細(xì)胞角蛋白與很多遺傳性皮膚病密切相關(guān),如銀屑病、魚鱗病、表皮松解癥和毛囊角化癥等。一般認(rèn)為CK1和CK10等分子量較大的為分化相關(guān)角蛋白,主要表達(dá)于有絲分裂后期的基層上細(xì)胞,在細(xì)胞增殖活躍的情況下如腫瘤、創(chuàng)傷下CK10表達(dá)下降。實(shí)驗(yàn)研究表明CK10抑制腫瘤形成和細(xì)胞增殖的能力源于它具有獨(dú)特的N末端和C末端,因此CK10不僅是作為細(xì)胞骨架的中間絲結(jié)構(gòu),而且還影響表皮細(xì)胞的腫瘤易感性。黃褐斑的發(fā)生也具有某些遺傳因