心肌肌鈣蛋白I(cTnI)定量檢測試劑(免疫熒光層析法)產(chǎn)品技術(shù)要求萬孚

醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編號：產(chǎn)品名稱心肌肌鈣蛋白I（cTnI）定量檢測試劑（免疫熒光層析法）型號、規(guī)格通用包裝規(guī)格為5人份/盒、25人份/盒、40人份/盒和100人份/盒。結(jié)構(gòu)及組成試劑由測試卡、緩沖液、ID芯片和使用說明書組成。其中：（1）測試卡由試紙條、塑料盒組成。試紙條上的主要成分有：硝酸纖維素膜、吸水紙、PVC板及其他試紙條支持物；硝酸纖維素膜包被有cTnI單克隆抗體和兔IgG。（2）緩沖液含有熒光標記cTnI單克隆抗體和熒光標記抗兔IgG。產(chǎn)品適用范圍/預期用途適用于體外定量檢測人全血、血清或血漿中的心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的濃度。產(chǎn)品型號/規(guī)格通用包裝規(guī)格為5人份/盒、25人份/盒、40人份/盒和100人份/盒。2.性能指標2.1外觀檢查外觀應平整，材料附著應牢固，各組份應齊全，卡固定緊密。2.2物理檢查膜條寬應不小于2.0mm；液體移行速度應不低于10mm/min。2.3線性范圍取同一批號的試劑分別對五個濃度的心肌肌鈣蛋白I參考品進行檢測，其檢測范圍為0ng/mL～40ng/ml，每份參考品重復檢測3次，計算相關(guān)系數(shù)r，其中r值應≥0.99。2.4精密度2.4.1批內(nèi)精密度隨機抽取同一批號的試劑10份，分別對同一濃度的心肌肌鈣蛋白I參考品進行檢測，其變異系數(shù)CV（%）值應≤15%。2.4.2批間精密度隨機抽取連續(xù)三個批號的試劑，每個批號取3份分別對同一濃度的心肌肌鈣蛋白I參考品進行檢測，其變異系數(shù)CV（%）值應≤15%。2.5準確度 用同一批號試劑分別測定三個水平濃度的心肌肌鈣蛋白I參考品，計算樣本測定結(jié)果均值和相對偏差，其中相對偏差（Bias%）應在±15%內(nèi)。2.6最低檢出限取同一批號的試劑10份，對配制參考品基質(zhì)進行檢測，計算樣本測定結(jié)果均值和標準偏差SD，其中（+2SD）≤0.1ng/mL。2.7分析特異性選擇同一濃度的心肌肌鈣蛋白I參考品分別加入膽固醇、甘油三酯、膽紅素，使干擾物最終濃度膽固醇60mg/mL、甘油三酯40mg/mL、膽紅素2mg/mL，各干擾樣本重復檢測3次，計算樣本檢測結(jié)果的均值和相對偏差，其中相對偏差（Bias%）應在±15%內(nèi)。3.檢驗方法3.1外觀檢查取出試劑，用目測方式觀察，結(jié)果應符合2.1的規(guī)定。3.2物理檢查用游標卡尺檢查測試條寬度或觀察窗口寬度，以緩沖液作為待測樣品，水平放置，用秒表記錄液體移行至測試條吸水紙前端或通過觀察窗口所需的時間，結(jié)果應符合2.2的規(guī)定。3.3線性范圍取同一批號的試劑分別對心肌肌鈣蛋白I濃度為0ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、10.0ng/mL、40.0ng/mL的參考品進行檢測，每份參考品重復檢測3次并計算每個濃度的平均值，按公式（1）、（2）、（3），計算直線方程y=a+bx，以及相關(guān)系數(shù)r，結(jié)果應符合2.3的要求。式中：b—回歸線的斜率；|a|—回歸線截距的絕對值；r—相關(guān)系數(shù)；—參考品的實際值；—參考品的3次重復測量均值；i—1，2，3，…..，n；n—測定樣本數(shù)3.4精密度3.4.1批內(nèi)精密度試驗隨機抽取同一批號的試劑10份，分別對濃度為0.5ng/mL的心肌肌鈣蛋白I參考品進行測定，按公式（4）、（5）、（6）計算平均值、標準差S及變異系數(shù)CV（%）值，結(jié)果應符合2.4.1的要求?！?6)式中：Xi—單次測量值；n—測量次數(shù)。3.4.2批間精密度試驗隨機抽取連續(xù)三個批號的試劑，每個批號取3份分別對濃度為0.5ng/mL的心肌肌鈣蛋白I參考品進行檢測，計算9份測試卡測定總均值和每個批號測定均值（），其變異系數(shù)CV（%）值按公式（7）進行計算，結(jié)果應符合2.4.2的規(guī)定。式中：—中的最大值；—中的最小值；—總均值。3.5準確度用同一批號試劑分別測定濃度0.5ng/mL、2.0ng/mL、10.0ng/mL的心肌肌鈣蛋白I參考品，每個參考品重復測定3次，計算樣本測定結(jié)果均值，按公式（8）計算相對偏差（Bias%），結(jié)果應符合2.5的規(guī)定。式中：—相對偏差；—樣本測定結(jié)果均值；X—測定樣本理論值。3.6最低檢出限取同一批號的試劑10份，對配制參考品基質(zhì)進行檢測，計算樣本測定結(jié)果均值和標準偏差SD，其中（+2SD）應符合2.6的要求。3.7分析特異性選擇濃度為10.0ng/mL的心肌肌鈣蛋白I參考品分別加入膽固醇、甘油三酯、膽紅素，使干擾物最終濃度膽固醇60mg/mL、甘油三酯40mg/mL、膽紅素2mg/mL，各干擾樣本重復檢測3次，計算樣本檢測結(jié)果的均值和相對偏差，按照公式（8）計算相對偏差，結(jié)果應符合2.7的規(guī)定。附錄A主要原材料主要原材料及基本要求如下：主要原材料廠家基本要求cTnI單克隆抗體MeridianLifeScience,Inc.純度＞90％兔IgGMeridianLifeScience,Inc.純度＞90％抗兔IgGMeridianLifeScience,Inc.純度＞90％硝酸纖維素膜德國賽多利斯公司孔徑5.0μm～12.0μm注：其它化學試劑均要求分析純以上級別。

附錄B內(nèi)控品溯源性資料國內(nèi)外研究表明，目前市場上檢測cTnI的方法學很多，由于抗原決定簇與抗體結(jié)合的位點各有差異，不同檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果之間有一定的差異性，但在整個行業(yè)內(nèi)，化學發(fā)光法或化學發(fā)光微粒子免疫檢測法是目前較為準確可靠的測定方法，其方法特異性較好，具有輔助診斷價值且適用于動態(tài)檢測及預后判斷。我司免疫熒光層析法這一方法學，在行業(yè)內(nèi)沒有一個統(tǒng)一的標準，所以內(nèi)控品的定值需選取一個公認的檢測方法，將其靶值轉(zhuǎn)移到本公司的內(nèi)控品，完成其計量學溯源，從而使常規(guī)測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準確性基礎(chǔ)上來。B.1我司內(nèi)控品的制備a)內(nèi)控品的來源①cTnI抗原：取HyTest公司的HumancardiactroponinI(cTnI)（來源人體心臟組織）干粉。②陰性樣本：由廣東省江門市五邑中醫(yī)院提供的乙型肝炎病毒表面抗體（HbsAg）、丙型肝炎病毒（HCV）和人類免疫缺陷病毒（HIV）1/2型抗體檢測均為陰性且丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測值在正常參考值范圍內(nèi)的血清，同時cTnI呈陰性。b)前處理陰性樣本滅活處理：60℃水浴30min，然后12000r/min離心15min。c)對采集到的陰性樣本進行確認采用貝克曼cTnI系統(tǒng)進行測定，顯示cTnI陰性。用本公司生產(chǎn)的心肌肌鈣蛋白I（cTnI）定量檢測試劑（免疫熒光層析法），用PC軟件掃描，均無明顯峰值。d)量取需要量的陰性血清，以兩份陰性血清添加1份5%BSA-PBS溶液的比例，配制好稀釋液，作為最終標化用的陰性血清。e)cTnI干粉采用經(jīng)確認的陰性血清復融。f)配制共5個濃度內(nèi)控品。B.2內(nèi)控品定值及驗證程序我司配制的內(nèi)控品應參照《GB/T21415-2008體外診斷試劑醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性》5.6（具有制造商選定測量程序，但既無國際約定參考測量程序，也無國際約定校準品，不能在計量上溯源到SI的情況）的要求建立我司內(nèi)控品的校準傳遞方案。B.2.1cTnI校準等級和向非一級制造商選定測量程序的計量學溯源校準校準賦值程序?qū)嵤┪镔|(zhì)f）貝克曼ACCESS免疫測定系統(tǒng)MLMLMLML制造商和終端用戶g）萬孚工作內(nèi)控品h）萬孚免疫熒光測量程序i）萬孚產(chǎn)品內(nèi)控品j）萬孚免疫熒光測量程序圖B.1cTnI校準等級和向非一級制造商選定測量程序的計量學溯源cTnI校準傳遞方案：（1）貝克曼ACCESS免疫測定系統(tǒng)賦值萬孚工作內(nèi)控品(f→g)儀器：貝克曼ACCESS免疫測定系統(tǒng)試劑：肌鈣蛋白I測定試劑盒（化學發(fā)光法）檢驗室工作環(huán)境：溫度為（25±5）℃，濕度為45%～75%（2）萬孚工作內(nèi)控品校準萬孚免疫熒光測量程序(g→h)儀器：萬孚免疫熒光檢測儀試劑：心肌肌鈣蛋白I（cTnI）定量檢測試劑（免疫熒光層析法）萬孚實驗室工作環(huán)境：溫度為（25±5）℃，濕度為45%～75%（3）萬孚免疫熒光測量程序賦值萬孚產(chǎn)品內(nèi)控品(h→i)儀器：萬孚免疫熒光檢測儀試劑：心肌肌鈣蛋白I（cTnI）定量檢測試劑（免疫熒光層析法）萬孚實驗室工作環(huán)境：溫度為（25±5）℃，濕度為45%～75%（4）萬孚產(chǎn)品內(nèi)控品校準萬孚免疫熒光測量程序(i→j)儀器：萬孚免疫熒光檢測儀試劑：心肌肌鈣蛋白I（cTnI）定量檢測試劑（免疫熒光層析法）工作環(huán)境：溫度為（25±5）℃，濕度為45%～75%B.3標識把上述樣本組成一整套內(nèi)控品，制定批號。B.4內(nèi)控品儲存把各內(nèi)控品分裝為100微升/管，貼標簽（標注產(chǎn)品名稱、批號、有效期、儲存條件），放置在-20℃長期保存，有效期一年。B.5內(nèi)控品的使用說明a)長期保存應在-20℃冷凍保存，避免反復凍融；b)使用前從冷凍取出，室溫復溫至少15分