宮頸癌良惡性病變中三種激酶表達的比較

宮頸癌良惡性病變中三種激酶表達的比較

1和2個細胞周期檢測點（kinse1、2、chk1、chk2）是細胞周期檢測點（g1、s、s、m）發(fā)揮作用的主要激酶，用于修復(fù)腫瘤放療和化療引起的dna損傷。1個細胞像激酶（pgi-soa1，plk1）主要在m期發(fā)揮作用，腫瘤失去的dna在此期恢復(fù)。然而，這三個檢測點中關(guān)于腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)的激酶數(shù)量很少，也沒有對腫瘤介質(zhì)進行研究。本實驗將應(yīng)用免疫組化方法檢測Chk1、Chk2和Plk1蛋白在宮頸癌和慢性宮頸炎組織中的表達,研究3種細胞周期檢測點激酶蛋白在宮頸良惡性病變中的表達差異,探討其與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系及3種激酶在宮頸癌組織中表達之間的相互關(guān)系,為臨床治療提供依據(jù)。1對象和方法1.1手術(shù)治療患者的選擇以同濟醫(yī)院婦產(chǎn)科2000年4月—2002年6月確診的宮頸癌患者并行手術(shù)切除,術(shù)后送病理檢查證實為宮頸癌患者為樣本,剔除術(shù)前接受放化療的,剔除合并其他自身免疫性疾病、內(nèi)分泌疾病、代謝性疾病等的患者,將剩下的患者編號,由電腦隨機選取宮頸癌患者43例。其中鱗癌38例,腺癌4例,腺鱗癌1例。按FIGO1994分期:0期3例,Ⅰ期23例,Ⅱ期9例,Ⅲ期8例,Ⅳ期0例。年齡24～80歲,中位年齡48歲。同時由電腦隨機選取我院2002年經(jīng)病理確診的慢性宮頸炎患者20例,年齡20～59歲,中位年齡38歲。1.2免疫組化染色小鼠抗人Chk1單抗(稀釋度1∶200)、小鼠抗人Chk2單抗(稀釋度1∶100)及小鼠抗人Plk1單抗(稀釋度1∶100)均為美國SantaCruz公司產(chǎn)品;SP試劑盒、顯色劑DAB購自北京中山公司。免疫組化染色按SP試劑盒說明書進行,PBS代替一抗作陰性對照,已知陽性片作陽性對照。Chk1、Chk2和Plk1均主要表達于胞核,部分表達于胞質(zhì)。根據(jù)著色程度分別記0分、1分、2分、3分。陽性細胞<10%記0分,10%～24%記1分,25%～49%記2分,50%～74%記3分,≥75%記4分。綜合判定取著色強度和陽性細胞百分數(shù)分值之積:0分記為(-),1、2分記為(+),3、4分記為(++),6、8分記為(+++),9、12分記為(++++);(-)和(+)定義為陰性即低表達,(++)～(++++)定義為陽性即高表達。1.3統(tǒng)計處理采用SPSS11.5軟件進行χ2檢驗及Spearman等級相關(guān)分析,取α=0.05為顯著性校驗水平。2結(jié)果2.1%表達情況43例宮頸癌病變組織中,Chk1陽性33例,占76.7%,Chk2陽性26例,占60.5%,Plk1陽性14例,占32.6%,表達情況見圖1及表1。20例慢性宮頸炎病變組織中Chk1、Chk2和Plk1的陽性分別為6例、7例和0例,占總例數(shù)的30.0%、35.0%和0,表達情況見圖2及表1。Chk1、Chk2和Plk1在宮頸癌組織中的陽性率均高于宮頸良性病變,其中Chk1和Plk1的表達差異有顯著性(P<0.01),但Chk2的表達差異無顯著性(P>0.05,見表1)。2.2患者年齡、組織病理學類型和臨床分期關(guān)系統(tǒng)計分析顯示,Chk1、Chk2和Plk1的表達與宮頸癌患者年齡、組織病理學類型和臨床分期無關(guān)(P>0.05,見表2)。但Chk1和Plk1的表達在不同分化程度宮頸癌患者中的差異有顯著性(P<0.05,見表2)。2.3chk1、chk2表達的關(guān)分析將43例宮頸癌病變組織的Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表達水平做Spearman等級相關(guān)分析發(fā)現(xiàn):Chk1與Chk2的表達呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r=0.492,P=0.001;Chk1與Plk1及Chk2與Plk1間無相關(guān)關(guān)系(統(tǒng)計學參數(shù)分別為r=0.283,P=0.066和r=0.151,P=0.335)。說明Chk1與Chk2蛋白在表達上存在著密切的聯(lián)系。3激酶蛋白的表達與妊娠機制中的發(fā)揮作用Chk1、Chk2均為絲氨酸/蘇氨酸激酶,是ATM(ataxia-telangiectasiamutated,共濟失調(diào)毛細血管擴張癥突變基因)及ATM相關(guān)基因的下游效應(yīng)基因,位于細胞周期檢測點激活途徑的終端,當細胞DNA受到放射線或化療藥物作用而損傷時,Chk1、Chk2通過調(diào)控CDC25(A、B、C)、Weel、14-3-3蛋白,激活DNA損傷檢測點,使細胞周期阻滯于G1/S、S和G2/M期,進行受損DNA的修復(fù)。Plk1是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶,參與細胞周期中的中心體的成熟、紡錘體的形成以及染色體的分離等過程,當DNA受損時,Plk1在M期檢測點發(fā)揮作用,從而使細胞阻滯于M期。在腫瘤放療或化療后,腫瘤細胞DNA受損后將阻滯于上述各個周期檢測點,客觀上為細胞的生存提供了條件,這也是臨床上腫瘤放療抵抗和化療耐藥產(chǎn)生的重要機制。因此,將這些周期檢測點激酶作為放化療增敏的靶點,可能可以成為一條比較理想的腫瘤治療策略。通過免疫組化檢測后發(fā)現(xiàn),3個激酶蛋白在宮頸癌組織中的表達均高于宮頸良性組織,特別是Chk1和Plk1,良惡性組織的表達差異有顯著性,與先前報道相符,說明這兩個蛋白具有相對意義上的腫瘤選擇性表達,具有更好的靶向特異性,且Chk1在宮頸癌組織中有76.7%的高表達,Plk1在良性病變中無明顯表達,說明Chk1和Plk1更有可能成為較理想的宮頸癌治療靶點。將3種激酶蛋白的表達與宮頸癌患者各臨床病理特征進行統(tǒng)計分析后得出,Chk1和Plk1的表達在不同分化程度宮頸癌患者中的差異有顯著性,分化越低,表達越高,提示這2個激酶可能在宮頸腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了某些作用。Chk1、Chk2在宮頸癌組織的表達有相關(guān)性,這與兩者均為ATM/ATR下游效應(yīng)基因,發(fā)揮相似作用的事實相符。但兩者在表達水平和與宮頸癌患者各臨床病理特征的關(guān)系上卻有不同,說明兩者還存在差異,這與多位學者的報道一致。綜上所述,Chk1和Plk1在宮頸惡