關(guān)于冷沉淀制備方法及質(zhì)量影響因素

關(guān)于冷沉淀制備方法及質(zhì)量影響因素

【關(guān)鍵詞】冷沉淀;制備;質(zhì)量冷沉淀是用新鮮冰凍血漿為原料制備的一種成分血，主要用于血友病甲、血管性血友病、纖維蛋白原缺乏癥患者，也可用于手術(shù)后出血、嚴(yán)重外傷及DIC等[1]。因冷沉淀中的Ⅷ因子為不穩(wěn)定因子，受多種因素影響，所以每袋冷沉淀Ⅷ因子含量各不相同，現(xiàn)將本中心的冷沉淀制備方法及質(zhì)量因素影響分析匯報(bào)如下。1材料與方法1.1材料與儀器大容量低溫離心機(jī)(CrYOFUge6000)，日本日立公司生產(chǎn)的速凍冰箱(SanYO)，美國CYTOTHERM公司生產(chǎn)的CT-4T.6C型自動(dòng)搖擺式恒溫水浴溶化箱，日本產(chǎn)SYSMaX(CA-50)凝血因子分析儀，韓國產(chǎn)熱合機(jī)(SE250)。1.2冷沉淀原料漿制備采用費(fèi)森尤斯卡比(廣州)生產(chǎn)的密閉四聯(lián)袋，采集400ml全血6h內(nèi)離心分離制成血漿60袋(200±10ml)，將血漿迅速置-80℃速凍機(jī)內(nèi)，凍結(jié)后置-30℃冰箱備用。1.3制備冷沉淀取60袋血漿置室溫中放置3min，待連接兩袋的塑料管變軟后分兩組(A、B)放入低溫水浴箱中(4℃~6℃)，A組30袋用水浴虹吸法制備冷沉淀，B組30袋用快速溶化離心法制備冷沉淀，計(jì)時(shí)。A組新鮮冰凍血漿融化時(shí)固定于恒溫?fù)u擺式水浴箱的血袋夾中，垂直浸沒于恒溫的循環(huán)水浴中，水浴箱自動(dòng)搖擺，血漿溶化，上清液虹吸流入空袋，袋中心剩余(25±5)ml未溶化的血漿及吸附在上面的冷沉淀。B組新鮮冰凍血漿融化時(shí)去掉固定夾，融化過程中人工給力捏碎血漿冰塊，血漿溶解到尚存少許冰碴后，用大容量低溫離心機(jī)離心，溫度4℃，相對(duì)離心力3200g，離心20min，分離血漿，袋內(nèi)存留(25±5)ml血漿冷沉淀，將A、B組冷沉淀快速置于速凍冰箱中凍結(jié)。A組平均用1.2h，B組平均用2.0h。1.4質(zhì)量檢測用血凝儀對(duì)不同方法制備的冷沉淀進(jìn)行凝血因子Ⅷ、纖維蛋白原的測定，t檢驗(yàn)分析。2結(jié)果用相同的溶化設(shè)備，采用不同制備方法制備所得冷沉淀質(zhì)量有差異，見表1。結(jié)果顯示：快速溶化離心法每袋中凝血因子Ⅷ>80IU，纖維蛋白原>150mg，符合國家標(biāo)準(zhǔn)[1]，水浴虹吸法凝血因子Ⅷ≥80IU，符合國家標(biāo)準(zhǔn)，纖維蛋白原<150mg，不符合國家標(biāo)準(zhǔn)[1]。表1冷沉淀質(zhì)量檢測結(jié)果3影響冷沉淀質(zhì)量的關(guān)鍵因素冷沉淀制備經(jīng)歷了全血、新鮮冰凍血漿、冷沉淀三個(gè)階段，有些可控，有些不可控，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的誤差都會(huì)影響冷沉淀的質(zhì)量。3.1采集個(gè)體冷沉淀中凝血因子Ⅷ、纖維蛋白原的收集率與獻(xiàn)血者個(gè)體有關(guān)。正常個(gè)體中凝血因子Ⅷ水平相差在50%~200%之間;與血型有關(guān);O型含量最少，已知服用一些藥物如避孕藥可增加凝血因子Ⅷ水平，血管作用肽1-脫氨-8-D精氨酸血管加壓素(DDAVP)可增加血循環(huán)中凝血因子Ⅷ水平達(dá)300%[2]。3.2采集速度血液采集過程中應(yīng)注意采集速度，要求200ml全血采集時(shí)間<3min，400ml全血采集時(shí)間<6min，如采血不暢，出現(xiàn)凝塊及溶血均會(huì)影響全血中冷沉淀凝血因子Ⅷ的含量。3.3制備過程冷沉淀中的主要成分凝血因子Ⅷ是一種不穩(wěn)定的凝血因子，新鮮冰凍血漿的溶化溫度直接影響產(chǎn)品質(zhì)量，在4℃~6℃水浴中溶化回收率較高，在8℃以上產(chǎn)生自溶?？焖偃芑x心法制備冷沉淀的質(zhì)量優(yōu)于水浴虹吸法，分析原因，前者在于溶化新冰時(shí)人工捏碎血漿冰塊，加快溶化速度，再通過低溫重離心，使新鮮冰凍血漿中90%的冷沉淀沉淀在漿袋底部，流失少;而水浴虹吸法在虹吸過程中，一部分凝血因子及纖維蛋白原也隨血漿進(jìn)入空袋。4討論近幾年，由于成分輸血的大力推廣及凝血因子制品的缺乏，我市各醫(yī)院冷沉淀用量明顯增多，不僅用于治療血友病A，在燒傷外科手術(shù)止血、產(chǎn)后大出