藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理

藥品微生物試驗(yàn)室------質(zhì)量管理.06藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第1頁微生物類別類別細(xì)菌真菌霉菌及酵母菌病毒原生動(dòng)物藻類藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第2頁

特點(diǎn)：體積小、結(jié)構(gòu)簡單、分布廣、種類(10~20萬種)、繁殖快、易變異。特點(diǎn)體積小結(jié)構(gòu)簡單分布廣種類多繁殖快易變異△微生物概述藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第3頁芽孢：微生物所需營養(yǎng)物質(zhì)水分PH值溫度空氣碳源氮源微量元素營養(yǎng)物質(zhì)蛋白質(zhì)受熱不易變性

（耐熱）含水量少細(xì)菌休眠體芽孢（孢子）藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第4頁△藥品中微生物主要污染路徑1.水系統(tǒng)（飲用水、純化水、注射用水、純蒸汽）：過濾凈化后檢測微生物、細(xì)菌內(nèi)毒素。2.原輔料：植物性、動(dòng)物性（風(fēng)險(xiǎn)最大）；版藥典中藥飲片增加耐熱菌、沙門菌。3.包裝材料：安瓿、PVC、PTP、塑料瓶。檢測微生物4.藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第5頁△藥品中微生物主要污染路徑4.生產(chǎn)人員（最不可控原因）：咳嗽、噴嚏、動(dòng)作幅度大、皮膚掉屑；測手指、潔凈服。5.氣體：壓縮空氣、惰性氣體；控制微生物或無菌。6.生產(chǎn)環(huán)境：潔凈區(qū)密封、空氣過濾、定時(shí)消毒；測沉降菌、浮游菌、懸浮粒子（A、B、C、D級(jí)）。驗(yàn)證和日常監(jiān)測7.設(shè)備及配件：清潔、消毒、滅菌；清潔驗(yàn)證藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第6頁△影響藥品微生物檢驗(yàn)結(jié)果原因1.樣品中微生物可能分布不均勻。2.微生物檢驗(yàn)方法誤差大。3.檢驗(yàn)方法未經(jīng)過驗(yàn)證。4.

實(shí)驗(yàn)室原因：人員、培養(yǎng)基、試劑、菌種、環(huán)境、設(shè)備、樣品。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第7頁△人員要求1.操作人員具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識(shí)教育背景。2.培訓(xùn)：職責(zé)培訓(xùn)、崗位操作規(guī)程培訓(xùn)、設(shè)備操作培訓(xùn)、檢驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)（包含無菌操作、培養(yǎng)基制備、消毒、滅菌、注平板、菌落計(jì)數(shù)、菌種傳代、菌種保藏、微生物檢驗(yàn)方法、微生物判定基本技術(shù)）。3.試驗(yàn)室安全方面培訓(xùn)（確保本身安全、預(yù)防試驗(yàn)室被污染）。4.對(duì)微生物管理人員培訓(xùn)：試驗(yàn)室安全、試驗(yàn)室結(jié)果評(píng)定、數(shù)據(jù)偏差調(diào)查。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第8頁△培養(yǎng)基管理※培養(yǎng)基影響微生物試驗(yàn)結(jié)果原因1.供給商：穩(wěn)定、資質(zhì)合格、業(yè)內(nèi)口碑好、供貨能力強(qiáng)。2.培養(yǎng)基接收2.1查看培養(yǎng)基名稱、批號(hào)、廠家、生產(chǎn)日期、使用期、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)是否符合要求。2.2在每瓶培養(yǎng)基瓶上貼標(biāo)簽、編號(hào)（唯一標(biāo)識(shí)）、批號(hào)、接收日期、接收人、開瓶日期、開瓶后使用期。2.3培養(yǎng)基接收統(tǒng)計(jì)。3.培養(yǎng)基儲(chǔ)存

按照供給商提供方法保留，多數(shù)是避光，個(gè)別廠家要求陰涼干燥（低于20℃）。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第9頁△培養(yǎng)基管理4.培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)（藥典要求）4.1假如培養(yǎng)基配制和滅菌程序經(jīng)過驗(yàn)證，那么同一批脫水培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)可只做1次。4.2假如培養(yǎng)基配制和滅菌程序未經(jīng)過驗(yàn)證，那么每一批滅菌培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢驗(yàn)。

※培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證（存放期）包含：滅菌前后PH值、外觀性狀；滅菌后無菌性檢驗(yàn)、靈敏度檢驗(yàn)；保留幾周后無菌、靈敏度檢驗(yàn)。

藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第10頁△培養(yǎng)基管理4.3適用性檢驗(yàn)※購置對(duì)照培養(yǎng)基※購置菌種枯草、白念、黑曲霉接種于計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基金葡、銅綠、枯草、生孢、白念、黑曲霉接種于無菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基※依據(jù)藥典附錄1105試驗(yàn)操作后判斷是否合格。以下是三種培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)要求（計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基、無菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基）藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第11頁計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)要求計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基非選擇性固體培養(yǎng)基非選擇性液體培養(yǎng)基a被檢培養(yǎng)基菌落數(shù)，對(duì)照培養(yǎng)基菌落數(shù)，在0.5~2之間b菌落形態(tài)大小與對(duì)照培養(yǎng)基上菌落一致c倒5塊平板，培養(yǎng)溫度與實(shí)際操作一致培養(yǎng)最長時(shí)間應(yīng)無菌生長a被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好b取最小包裝2瓶放在實(shí)際利用中溫度培養(yǎng)最長時(shí)間藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第12頁無菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)要求無菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基無菌性檢驗(yàn)靈敏度檢驗(yàn)每批取不少于5瓶培養(yǎng)，應(yīng)無菌生長空白對(duì)照管無菌生長加菌培養(yǎng)基管生長良好藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第13頁選擇性培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)要求選擇性培養(yǎng)基（控制菌檢驗(yàn)用）促生長能力測試抑制生長能力測試指示特征固體：被檢培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基上生長菌落大小、形態(tài)一致接種試驗(yàn)菌不得生長被檢培養(yǎng)基上試驗(yàn)菌生長菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致液體：要求溫度、最短培養(yǎng)時(shí)間、與對(duì)照培養(yǎng)基管比較、被檢管試驗(yàn)菌生長良好藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第14頁用于環(huán)境監(jiān)控培養(yǎng)基管理①市售：雙層包裝和終端滅菌②假如不能采取終端滅菌培養(yǎng)基，在使用前進(jìn)行100﹪預(yù)培養(yǎng)，預(yù)防出現(xiàn)假陽性。

沉降菌碟暴露時(shí)間驗(yàn)證

△選擇在換氣次數(shù)大需要監(jiān)控操作間，培養(yǎng)基加菌暴露若干小時(shí),培養(yǎng)后計(jì)算菌回收率大于70﹪。

△暴露多長時(shí)間不干裂、促生長能力良好）。①包裝形式：試管、三角瓶（密封）②貯存房間條件③取樣計(jì)劃：取樣時(shí)間點(diǎn)、測試項(xiàng)目（PH值、無菌、適用性）※加菌液0.1ml，不能加1ml。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第15頁△菌種管理

菌種起源CMCC中國復(fù)活標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株（0代）解凍轉(zhuǎn)種工作菌株

（低溫冷凍干燥）（不得重新冷凍）TACC美國1代：是指將活培養(yǎng)物接種到微生物生長新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)?！ぷ骶瓴豢商鎿Q標(biāo)準(zhǔn)菌株藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第16頁△菌種管理包括菌種管理統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)菌種申購統(tǒng)計(jì)。從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作SOP及統(tǒng)計(jì)。菌種傳代統(tǒng)計(jì)。菌種檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)（確認(rèn)統(tǒng)計(jì)）。菌種滅活、銷毀統(tǒng)計(jì)。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第17頁△菌種管理菌種接收1.檢驗(yàn)外觀是否完好。2.查對(duì)菌種名稱、編號(hào)。3.查對(duì)接收時(shí)是否在適當(dāng)環(huán)境中。4.查對(duì)菌種是否在使用期范圍內(nèi)。5.給每株菌一個(gè)獨(dú)立編號(hào)，不能重復(fù)。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第18頁△菌種管理菌種保留1.標(biāo)準(zhǔn)菌株：超低溫冷凍（低于-30℃）使用期一年；（-70℃以下冷凍保藏）使用期三年。2.斜面菌種：2~8℃冷藏，使用期3~6個(gè)月。3.菌液：室溫下，2小時(shí)內(nèi)使用。2~8℃，24小時(shí)內(nèi)使用（黑曲霉孢子懸液2~8℃，貯存期要驗(yàn)證）藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第19頁△菌種管理菌種使用------斜面菌種只允許一次使用菌種傳代1.將微生物轉(zhuǎn)接到新培養(yǎng)基，進(jìn)行培養(yǎng)取得新鮮菌種過程。2.購置標(biāo)準(zhǔn)菌株必須經(jīng)過傳代后使用（在5代以內(nèi)）。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第20頁環(huán)境管理硬件：陽性菌試驗(yàn)室、培養(yǎng)室、貯藏室（區(qū)）、試驗(yàn)結(jié)果觀察區(qū)、培養(yǎng)基及試驗(yàn)用具準(zhǔn)備區(qū)、滅菌區(qū)、樣品接收區(qū)、標(biāo)準(zhǔn)菌株貯藏室（區(qū)）、污染物處理區(qū)?！陨蠀^(qū)域要有標(biāo)識(shí)（降低交叉污染）?！?/p>

無菌檢驗(yàn)：B級(jí)背景下A級(jí)單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)。

※

微生物程度檢驗(yàn)：不低于D級(jí)背景下B級(jí)單向流空氣區(qū)域。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第21頁△環(huán)境監(jiān)測1.空調(diào)驗(yàn)證：高效過濾器完整性、氣流組織、空氣流速（平均風(fēng)速）、換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對(duì)濕度（測試應(yīng)在模擬正常檢測條件下進(jìn)行）

※

依據(jù)藥典附錄9205藥品潔凈試驗(yàn)室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)2.日常監(jiān)測：※異常情況要進(jìn)行分析，不但僅是數(shù)數(shù)而已。區(qū)域周期粒子沉降菌浮游菌表面微生物（含手套）無菌隔離系統(tǒng)每次試驗(yàn)三月每次三月每次A級(jí)每次試驗(yàn)三月每次每個(gè)月每次（潔凈服）B級(jí)每七天一次六個(gè)月每七天三月每七天（潔凈服）C級(jí)每季一次六個(gè)月三月六個(gè)月三月D級(jí)每六個(gè)月一次六個(gè)月六個(gè)月六個(gè)月六個(gè)月監(jiān)測項(xiàng)目藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第22頁△潔凈區(qū)滅菌和消毒※A/B級(jí)潔凈區(qū)使用無菌或經(jīng)無菌處理消毒劑或清潔劑。※化學(xué)消毒劑應(yīng)驗(yàn)證消毒效果（不止一個(gè)）?！鍧崉⑾緞┰谝笮趦?nèi)使用?！鶓T用滅菌法干熱滅菌法：火焰法（酒精燈）、烘箱250℃1h。

濕熱滅菌法：121℃30min。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第23頁△設(shè)備設(shè)施管理1.設(shè)備確實(shí)認(rèn)、檢定（校準(zhǔn)）每年一次，注意連續(xù)性。2.設(shè)備使用日志（使用即填）3.設(shè)備定時(shí)清潔和消毒（水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱、生物安全柜）。4.無菌器具要有明確標(biāo)識(shí)（已滅菌、未滅菌）。5.溫度計(jì)校準(zhǔn)。（注意量程、精度）6.天平、標(biāo)準(zhǔn)砝碼校準(zhǔn)；移液管校準(zhǔn)。7.懸浮粒子計(jì)數(shù)器、浮游菌采集器校準(zhǔn)。8.紫外燈消毒效果定時(shí)檢測。藥品微生物實(shí)驗(yàn)室管理第24頁△操作方法注意1.操作SOP中明確檢驗(yàn)方法要經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，而且和驗(yàn)證方案匯報(bào)、省藥檢所方法學(xué)復(fù)核意見中描述一致2.操作方法應(yīng)防止損傷供試品中污染微生物。3.對(duì)抑菌性較強(qiáng)供試品，盡可能選取薄