西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程編制說(shuō)明

農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》（征求意見(jiàn)稿）編制說(shuō)明《西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》起草組2024年08月一、工作簡(jiǎn)況任務(wù)來(lái)源主要闡述本項(xiàng)目的重要性和必要性，即回答為什么要制定本標(biāo)準(zhǔn)的問(wèn)題。簡(jiǎn)要說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃下達(dá)部門(mén)、年度和計(jì)劃編號(hào)。如已發(fā)布有與本標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)，可說(shuō)明本標(biāo)準(zhǔn)與其他標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)比關(guān)系，對(duì)實(shí)際應(yīng)用的影響情況。根據(jù)近年來(lái)西番蓮（百香果）產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，因病毒病、土傳病害日趨嚴(yán)重引起帶病種苗傳播迅速，造成產(chǎn)量、品質(zhì)下降，果農(nóng)經(jīng)濟(jì)遭受損失，產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展受到嚴(yán)重影響等產(chǎn)業(yè)問(wèn)題，以及應(yīng)種植戶對(duì)脫毒種苗的迫切需求。目前缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的西番蓮種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程，種植戶從全國(guó)各地采購(gòu)的種苗大多數(shù)是沒(méi)有建立專(zhuān)門(mén)嚴(yán)格的種苗生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致種苗遺傳了母本的帶毒性狀，種植成活率低，抗病性較差，造成產(chǎn)量低、果實(shí)品質(zhì)差與商品價(jià)值低等問(wèn)題，造成損害果農(nóng)的經(jīng)濟(jì)收益，嚴(yán)重影響了產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，制定《西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》。2024年4月30日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管司發(fā)布的《關(guān)于下達(dá)2024年農(nóng)業(yè)國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（農(nóng)質(zhì)標(biāo)函〔2024〕71號(hào)）文件要求，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所牽頭承擔(dān)2024年農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目《西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》的編寫(xiě)工作，項(xiàng)目計(jì)劃編號(hào)為NYB-24082；本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶作物及制品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口，標(biāo)準(zhǔn)起草首席專(zhuān)家為宋順副研究員。（二）制定背景西番蓮（百香果）為西番蓮科西番蓮屬的多年生草質(zhì)藤本植物，生長(zhǎng)周期短，通常4-6個(gè)月開(kāi)花結(jié)果；屬于“短、平、快”的經(jīng)濟(jì)果樹(shù)，具有獨(dú)特而強(qiáng)烈的芳香風(fēng)味和豐富的營(yíng)養(yǎng)，集番石榴、菠蘿、香蕉、草莓、檸檬、芒果等10余種水果的濃郁香味，是著名的果汁用熱帶水果，有“果汁之王”的美譽(yù)。截止目前，西番蓮屬約有520種，大多數(shù)以觀花及庭院栽培，僅有60多種可以供鮮食，世界上用于水果商業(yè)的栽培種群主要有6種：紫色百香果、黃色百香果、甜西番蓮、樟葉西番蓮、大西番蓮及香蕉西番蓮，我國(guó)商業(yè)化百香果主要是黃果西番蓮（Passifloraedulisf.flavicarpa）和紫果西番蓮（PassifloraedulisSims）兩個(gè)主要栽培種群。據(jù)農(nóng)業(yè)部數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，截止至2021年，我國(guó)西番蓮（百香果）種植面積達(dá)到110萬(wàn)畝，種植面積年均增長(zhǎng)比例達(dá)20%以上。近幾年，在國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者對(duì)西番蓮（百香果）購(gòu)買(mǎi)力快速增長(zhǎng)的背景下，對(duì)西番蓮（百香果）的產(chǎn)量和品質(zhì)需求與日俱增。然而，病毒病成為了影響西番蓮（百香果）種苗質(zhì)量、抗逆性、適應(yīng)性以及產(chǎn)量和品質(zhì)的日漸突出主要病害。目前，西番蓮（百香果）種苗生產(chǎn)缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的技術(shù)規(guī)程，西番蓮種苗生產(chǎn)企業(yè)沒(méi)有建立專(zhuān)門(mén)嚴(yán)格、標(biāo)準(zhǔn)的采穗圃、砧木園等種苗繁育基地，種植企業(yè)或果農(nóng)購(gòu)買(mǎi)的種苗大多數(shù)遺傳了母本的帶毒性狀，植株成活率低，抗逆性差。危害西番蓮的病毒潛伏期長(zhǎng)，擴(kuò)散迅速，嚴(yán)重影響種苗生長(zhǎng)發(fā)育，造成植株生長(zhǎng)衰竭而死亡。帶病毒種苗還易兼有根腐、莖基腐土傳病害，造成種苗根系不夠發(fā)達(dá)，生命期短、產(chǎn)量低、果實(shí)品質(zhì)差與商品價(jià)值低等問(wèn)題，損害果農(nóng)的經(jīng)濟(jì)收益，嚴(yán)重影響產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。種業(yè)是農(nóng)業(yè)的“芯片”，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的核心。自2016年起，我國(guó)進(jìn)入保護(hù)種業(yè)安全的全新階段；2021年中央一號(hào)文件要求打贏種業(yè)翻身仗，并出臺(tái)《種業(yè)振興行動(dòng)方案》《國(guó)務(wù)院辦公廳關(guān)于加強(qiáng)農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用的意見(jiàn)》（國(guó)辦發(fā)〔2019〕56號(hào)），加大對(duì)種業(yè)的支持與保護(hù)力度，把種業(yè)安全提升到國(guó)家安全的戰(zhàn)略高度。2022中央一號(hào)文件“開(kāi)展農(nóng)業(yè)品種培優(yōu)、品質(zhì)提升和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)提升行動(dòng)”，發(fā)布《農(nóng)業(yè)農(nóng)村部辦公廳關(guān)于扶持國(guó)家種業(yè)陣型企業(yè)發(fā)展的通知》農(nóng)辦種〔2022〕5號(hào)，《農(nóng)業(yè)農(nóng)村部辦公廳關(guān)于加快推進(jìn)種業(yè)基地現(xiàn)代化建設(shè)的指導(dǎo)意見(jiàn)》農(nóng)辦種〔2022〕11號(hào)等政策，提出完善農(nóng)作物種業(yè)基地布局和現(xiàn)代化制種基地建設(shè)，為我國(guó)種業(yè)的健康發(fā)展提供了堅(jiān)實(shí)的保障。2023年中央一號(hào)文件進(jìn)一步深入實(shí)施種業(yè)振興行動(dòng)，推動(dòng)重點(diǎn)領(lǐng)域農(nóng)業(yè)關(guān)鍵核心技術(shù)攻關(guān)取得新突破。針對(duì)西番蓮（百香果）種苗帶毒傳播，嚴(yán)重影響產(chǎn)業(yè)發(fā)展的棘手問(wèn)題，團(tuán)隊(duì)前期通過(guò)西番蓮（百香果）種苗莖尖組培脫毒技術(shù)研發(fā)與脫毒種苗進(jìn)行田間種植、性狀觀察。結(jié)果顯示，經(jīng)脫毒復(fù)壯的種苗不僅保持母本的優(yōu)良性狀、變異率低，且田間植株長(zhǎng)勢(shì)旺盛、果實(shí)性狀穩(wěn)定、商品率高、抗旱等抗逆性強(qiáng)；常規(guī)種苗生長(zhǎng)勢(shì)弱，植株帶病、葉片卷須，果皮表面暗沉粗糙，果實(shí)畸形、商品率低，產(chǎn)量降低。因此，亟需建立西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程，指導(dǎo)和規(guī)范西番蓮（百香果）苗木標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，保證種苗質(zhì)量。目前，國(guó)內(nèi)尚未有涉及西番蓮（百香果）種苗繁育技術(shù)規(guī)程的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)行的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)僅有NY/T3972-2021（西番蓮種苗）、NY/T491-2021（西番蓮）、NYT2517-2013（植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南西番蓮）、NY/T4240-2022（西番蓮良好農(nóng)業(yè)規(guī)范）和NY/T292-1995（綠色食品西番蓮果汁飲料），前二者分別規(guī)范了西番蓮扦插苗、嫁接苗及西番蓮鮮果的質(zhì)量等級(jí)。缺乏關(guān)于西番蓮（百香果）種苗脫毒技術(shù)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，不利于治理百香果苗木市場(chǎng)種苗品種不純、種源不明的亂象，不利于西番蓮（百香果）產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。因此，制定一套科學(xué)、符合實(shí)際生產(chǎn)需求的“西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程”標(biāo)準(zhǔn)尤為重要，為指導(dǎo)和規(guī)范我國(guó)西番蓮（百香果）種苗脫毒生產(chǎn)，保證苗木質(zhì)量，提高健康種苗的生產(chǎn)效率，確保種源清晰、品種純正等提供技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而提高產(chǎn)量和品質(zhì)，實(shí)現(xiàn)果農(nóng)經(jīng)濟(jì)效益增收，對(duì)西番蓮（百香果）苗木市場(chǎng)規(guī)范、有序的健康發(fā)展具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。（三）起草單位除說(shuō)明全部起草單位外，還應(yīng)列明參與人員姓名、單位、分工。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位為5家從事西番蓮研究的科研機(jī)構(gòu)和種苗生產(chǎn)、種植企業(yè)，中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所為牽頭起草單位，福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所、廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院、海南金琪智能科技有限公司、貴州正嶸農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司為起草參加單位。起草人分別是由從事西番蓮種質(zhì)資源收集、品種培育及種植技術(shù)研究的14人組成，具體組成和任務(wù)分工見(jiàn)下表1。表1項(xiàng)目成員與任務(wù)分工姓名性別工作單位職務(wù)/職稱項(xiàng)目分工宋順男中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所副研究員首席專(zhuān)家、項(xiàng)目負(fù)責(zé)人邢文婷女中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所助理研究員負(fù)責(zé)編寫(xiě)西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程魏秀清女福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所副研究員報(bào)告主要內(nèi)容與格式馬伏寧女中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所助理研究員病毒檢測(cè)與鑒定許奕女中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所副研究員脫毒種苗遺傳穩(wěn)定性鑒定韋曉霞女福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所副研究員負(fù)責(zé)福建區(qū)域的種苗遺傳穩(wěn)定性分析黃東梅女中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所副研究員海南區(qū)域種苗遺傳穩(wěn)定性分析吳斌男中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所助理研究員資料收集楊柳男廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究員組建專(zhuān)家團(tuán)隊(duì)、協(xié)同產(chǎn)業(yè)調(diào)研李亮男福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所助理研究員種苗培育蔣萍女廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院助理研究員負(fù)責(zé)廣西區(qū)域種苗遺傳穩(wěn)定性分析唐雅君女福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所助理研究員負(fù)責(zé)福建區(qū)域的種苗遺傳穩(wěn)定性分析張宗科男貴州正嶸農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司技術(shù)骨干負(fù)責(zé)貴州區(qū)域種苗遺傳穩(wěn)定性分析葛峰男海南金琪智能科技有限公司技術(shù)骨干種苗應(yīng)用與推廣（四）主要工作過(guò)程要按標(biāo)準(zhǔn)各階段為單位分別編寫(xiě)。列出各階段的關(guān)鍵內(nèi)容。征求意見(jiàn)、審查階段的主要內(nèi)容要詳細(xì)給出。征求意見(jiàn)要對(duì)征求對(duì)象的代表性、回復(fù)情況、意見(jiàn)處理情況進(jìn)行總結(jié)說(shuō)明。1.起草階段自收到下達(dá)任務(wù)后，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所聯(lián)合多家單位和企業(yè)，牽頭成立了標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組，并確定了起草組成員。起草工作小組由長(zhǎng)期從事西番蓮（百香果）種質(zhì)資源收集評(píng)價(jià)、育種及規(guī)范化生產(chǎn)種苗的相關(guān)科研機(jī)構(gòu)和企業(yè)，明確小組及成員的職責(zé)和任務(wù)分工，通過(guò)調(diào)研、查閱文獻(xiàn)、討論等方式確定標(biāo)準(zhǔn)制定方向、工作原則和詳細(xì)實(shí)施方案。標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)程中，始終堅(jiān)持科學(xué)研究與實(shí)踐相結(jié)合的原則，將西番蓮種質(zhì)資源植物病毒脫除研究過(guò)程中總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)生產(chǎn)實(shí)踐進(jìn)一步驗(yàn)證、補(bǔ)充、完善，使之規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化。2024年1月~6月制定標(biāo)準(zhǔn)工作小組收集和查閱了國(guó)內(nèi)外有關(guān)西番蓮種苗培育相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)材料等文獻(xiàn)資料，通過(guò)收集、整理和分析，并根據(jù)多次赴省外和省內(nèi)多個(gè)西番蓮（百香果）產(chǎn)區(qū)的調(diào)研情況，結(jié)合西番蓮苗木生產(chǎn)和果實(shí)生產(chǎn)的相關(guān)企業(yè)、種植戶的反饋意見(jiàn)，確定了標(biāo)準(zhǔn)制定的方向與主體框架，參考我國(guó)其它農(nóng)作物脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程編寫(xiě)的要素，針對(duì)西番蓮脫毒苗生產(chǎn)需解決的技術(shù)性及操作性問(wèn)題，于2024年6月完成了《西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)文本的起草工作。2.標(biāo)準(zhǔn)的起草（綜述征求意見(jiàn)對(duì)象，以及采納、未采納、部分采納的意見(jiàn)處理情況）2024年7-8月在標(biāo)準(zhǔn)起草的同時(shí)，為確保各項(xiàng)技術(shù)的準(zhǔn)確性和權(quán)威性，團(tuán)隊(duì)對(duì)西番蓮（百香果）種苗脫毒技術(shù)的每一項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行了重復(fù)試驗(yàn)，進(jìn)一步對(duì)各項(xiàng)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了驗(yàn)證從而起到了對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步的完善和補(bǔ)充作用。標(biāo)準(zhǔn)制定工作小組通過(guò)不斷研討，聽(tīng)取海南、福建、廣西、貴州等西番蓮組培技術(shù)研發(fā)、種苗生產(chǎn)企業(yè)負(fù)責(zé)人和技術(shù)骨干的意見(jiàn)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步修改和完善。形成NY/T-24082《西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》的征求意見(jiàn)稿。并于2024年8月對(duì)本標(biāo)準(zhǔn)的“征求意見(jiàn)稿”發(fā)送給我國(guó)部分高校和科研機(jī)構(gòu)的專(zhuān)家審閱，廣泛征求意見(jiàn)。二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要內(nèi)容及確定依據(jù)（一）編制原則主要闡述標(biāo)準(zhǔn)制定或修訂過(guò)程遵循的基本原則。按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)管理辦法以及GB/T1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則（第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則）以及GB/T1.2-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則（第2部分：以ISO、IEC標(biāo)準(zhǔn)化文件為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件起草規(guī)則）等要求編寫(xiě)。本標(biāo)準(zhǔn)的制定遵循“先進(jìn)性、實(shí)用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”的原則，注重標(biāo)準(zhǔn)的通用性、適用性、配套性和可操作性。標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)內(nèi)容緊密聯(lián)系我國(guó)健康種苗生產(chǎn)的現(xiàn)狀，根據(jù)我國(guó)生產(chǎn)實(shí)際，面向科研、教學(xué)、技術(shù)推廣和生產(chǎn)等部門(mén)廣泛征求意見(jiàn)，使標(biāo)準(zhǔn)先進(jìn)、科學(xué)、實(shí)用。（二）主要內(nèi)容的及確定依據(jù)逐章逐節(jié)闡明標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容中的術(shù)語(yǔ)、技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則等提出和確定的依據(jù)。不要寫(xiě)成任務(wù)來(lái)源部分的內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容包括：帶病毒種源的熱處理、外植體消毒、莖尖組織培養(yǎng)、無(wú)菌試管苗熱處理及其莖尖二次培養(yǎng)、脫毒種苗遺傳穩(wěn)定性鑒定、病毒檢測(cè)等多項(xiàng)技術(shù)。本文件規(guī)定了百香果脫毒種苗生產(chǎn)過(guò)程中培養(yǎng)材料的術(shù)語(yǔ)和定義、熱處理、莖尖脫毒、種苗繁育和遺傳穩(wěn)定性鑒定和脫毒種苗生產(chǎn)的技術(shù)，僅適用于西番蓮（百香果）商業(yè)品種的脫毒種苗繁育。1、本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范性引用文件本標(biāo)準(zhǔn)中所列的規(guī)范性引用文件有：NYT2517-2013（植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南西番蓮）、NY/T3972-2021（西番蓮種苗）、SN/T2964-2011《植物病毒檢測(cè)規(guī)范》、NY/T2678-2015《馬鈴薯6種病毒的檢測(cè)RT-PCR法》、NY/T2678-2015《瓜類(lèi)種傳病毒檢疫鑒定方法》、GB5084-2021《農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。主要是作為引用與本標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)的其他標(biāo)準(zhǔn)中的技術(shù)內(nèi)容納入所制定的標(biāo)準(zhǔn)中，并構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)的一部分內(nèi)容，以保持相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的一致性和協(xié)調(diào)性。其目的是為了簡(jiǎn)化標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)工作，方便標(biāo)準(zhǔn)資料的收集，減少不必要的編輯性加工和修改，避免重復(fù)寫(xiě)出引用文件的內(nèi)容而引起不必要的差錯(cuò)和標(biāo)準(zhǔn)間的不協(xié)調(diào)，也可避免增加標(biāo)準(zhǔn)的篇幅。表2本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范性引用文件說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)條文引用文件西番蓮（百香果）遺傳穩(wěn)定性鑒定 6.3原原種苗的遺傳穩(wěn)定性鑒定NY/T2517植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南西番蓮種苗類(lèi)型7種苗質(zhì)量要求與檢查判斷規(guī)則NY/T3972西番蓮種苗種苗要求、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、判定規(guī)則5.7再生植株病毒檢測(cè)SN/T2964-2011植物病毒檢測(cè)規(guī)范、NY/T2678-2015馬鈴薯6種病毒的檢測(cè)RT-PCR法、NY/T2678-2015瓜類(lèi)種傳病毒檢疫鑒定方法灌溉水質(zhì)要求6.7.1水肥管理GB5084-2021農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)2、關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)指標(biāo)確定的說(shuō)明2.1關(guān)于種苗脫毒試驗(yàn)說(shuō)明植物病毒素有植物癌癥之稱，在植物體內(nèi)通過(guò)維管組織和胞間連絲進(jìn)行擴(kuò)散，干擾植物新陳代謝，造成作物減產(chǎn)、品質(zhì)降低，甚至植株死亡。病毒一般為系統(tǒng)性感染，一旦侵入植物體內(nèi)，很難根除，且無(wú)有效防治方法，在植物繁殖材料更替換代、調(diào)運(yùn)過(guò)程中造成大面積傳播。根據(jù)大量查閱文獻(xiàn)的結(jié)果，試驗(yàn)采用熱處理、莖尖培養(yǎng)、超低溫脫毒處理等方法進(jìn)行西番蓮（百香果）種苗病毒脫除。2.2帶病植株熱處理熱處理材料可以是盆栽植株，也可以是離體植株。盆栽的熱處理一般放在專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的人工氣候培養(yǎng)箱中進(jìn)行34~40℃高溫處理；離體植株的熱處理，通常是離體培養(yǎng)材料的試管苗在超過(guò)正常生長(zhǎng)的溫度條件下進(jìn)行處理。熱處理是利用病毒與植物的耐熱性不同，在高溫條件下處理植物材料一定的時(shí)間，使植物體內(nèi)病毒失去活性或鈍化，擴(kuò)散速度減緩，而植株生長(zhǎng)加快，處理的植株新梢不帶病毒，選取該組織進(jìn)行離體培養(yǎng)或微芽嫁接即可獲得脫毒植株。熱處理不能使病毒完全失活，在停止處理一段時(shí)間后，病毒仍可以擴(kuò)散至整個(gè)植株。2.3莖尖培養(yǎng)脫毒莖尖培養(yǎng)包括較大的莖尖（0.5-1.0㎝）培養(yǎng)或莖尖分生組織（<1.0㎜）培養(yǎng)，莖尖是持續(xù)保持分裂能力的胚芽發(fā)展而來(lái)，由一團(tuán)胚性細(xì)胞組成，獲得的再生植株遺傳變異低。據(jù)報(bào)道，病毒可以到達(dá)除生長(zhǎng)點(diǎn)以外的任何部位，且與莖尖距離越短病毒含量越小或沒(méi)有病毒。利用莖尖新陳代謝快、沒(méi)有維管束形成、生長(zhǎng)素濃度高導(dǎo)致病毒無(wú)法復(fù)制、遷移、聚集濃度低的原理，采用生物學(xué)技術(shù)病毒的脫除。莖尖脫毒率與莖尖成活率呈反比，莖尖越小脫毒率越高，但是成活率越低，反之亦然。2.4研究基礎(chǔ)團(tuán)隊(duì)前期注重西番蓮屬種質(zhì)的收集、種質(zhì)資源離體培養(yǎng)、莖尖組織培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽苗的病毒檢測(cè)、擴(kuò)繁與管理等技術(shù)的研究，已開(kāi)展了西番蓮多種種質(zhì)資源的組培脫毒和種苗無(wú)性擴(kuò)繁技術(shù)研究，已完成主栽品種紫果西番蓮和南美引進(jìn)的黃果西番蓮、瑞香西番蓮、藍(lán)花西番蓮等種質(zhì)的組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)的研發(fā)，并完成了脫毒種苗的田間性狀觀察、果實(shí)品質(zhì)檢測(cè)、產(chǎn)量測(cè)算等研究工作。相關(guān)研究論文已在分子植物育種、InternationalJournalofAgricultureandBiology（IJAB）、熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)等期刊上發(fā)表。2.5試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施為了更好的使種苗脫毒，采用高溫處理對(duì)母本進(jìn)行病毒鈍化處理。選擇健壯的百香果主栽品種--紫色百香果（臺(tái)農(nóng)一號(hào)）、小黃金百香果的盆栽苗，去除枝條頂芽，待側(cè)芽萌發(fā)0.5-1.0cm時(shí)，將盆栽苗在35~40℃條件下進(jìn)行變溫處理，每隔8h變換一次溫度，每天光照16h，處理10-15d后，立即剪取新生頂端0.5-1㎝，外植體消毒處理后接種至MS培養(yǎng)基中進(jìn)行較大莖尖組織培養(yǎng)，獲得的試管苗再經(jīng)35-38℃變溫處理5-7d后，立即切取1-3㎜無(wú)菌莖尖進(jìn)行再生、繼代培養(yǎng)；針對(duì)百香果主要病毒馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus）、東亞西番蓮病毒（EAPV）、黃瓜花葉病毒（CMV）等病毒，采用RT-PCR分子技術(shù)檢測(cè)，對(duì)生根苗進(jìn)行病毒檢測(cè)，獲得脫毒植株。引物信息見(jiàn)下表3。表3病毒引物列表靶標(biāo)基因引物名稱核苷酸序列（5′-3′）片段大小/bp反應(yīng)條件功能PeERS2（內(nèi)標(biāo)基因）PeERS2-P1GGCGACCCACTTCATAAATC55795℃預(yù)變性3min；94℃30sec、55℃30sec、72℃45sec共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃10min；25℃保存鑒定樣品是否合成第一鏈cDNAPeERS2-P2CACGGACAGCAACAACCTCTPe-PotyvirusPe-Potyvirus-FGCWKCHATGATYGARGCHTGGG68095℃預(yù)變性3min；94℃30sec、45℃45sec、72℃1min共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃10min；25℃保存鑒定樣品是否感染PotyvirusPe-Potyvirus-RAYYTGYTYMTCHCCATCCATCPe-EAPVEAPVIBfGAATCCGTGTCCCTCCAGTC98095℃預(yù)變性3min；94℃30sec、55℃30sec、72℃1min共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃10min；25℃保存鑒定樣品是否感染EAPVEAPVIBrGTTTACCTAACCTTTACTGCGGPe-CMVCMV-147-P1TCGTCCAACYATTAACCACC45595℃預(yù)變性3min；94℃30sec、55℃30sec、72℃45sec共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72℃10min；25℃保存鑒定樣品是否感染CMVCMV-601-P2GTACCARCTCGTCCGTCTCG2.6、關(guān)于脫毒種苗遺傳穩(wěn)定性的鑒定方法鑒定經(jīng)脫毒處理、組織培養(yǎng)獲得的脫毒種苗的遺傳穩(wěn)定性的方法通常從植物學(xué)特征、農(nóng)藝學(xué)性狀、分子水平檢測(cè)等方面入手。莖尖或莖段等通過(guò)直接發(fā)生途徑獲得的不定芽，不易發(fā)生變異或變異率較低；通過(guò)胚狀體途徑再生植株變異較少；通過(guò)愈傷組織和懸浮培養(yǎng)分化出的不定芽，變異率較高；另外，外植體的繼代培養(yǎng)次數(shù)和時(shí)間也會(huì)影響植株的遺傳穩(wěn)定性。因此，將綜合脫毒處理獲得的脫毒種苗與其大田繁殖的對(duì)照進(jìn)行田間的植物學(xué)、農(nóng)藝性狀、果實(shí)品質(zhì)及產(chǎn)量性狀比較。2.6.1試驗(yàn)地條件與設(shè)計(jì)選擇土壤均為磚紅壤，土壤肥力一致區(qū)域?yàn)樵囼?yàn)地點(diǎn)。采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)，在同一試驗(yàn)區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)4個(gè)處理，分別是紫果臺(tái)農(nóng)一號(hào)、小黃金百香果的未脫毒常規(guī)苗和脫毒健康種苗，每個(gè)處理種植30株幼苗，3次重復(fù)，株行距為150cm×300cm，試驗(yàn)區(qū)設(shè)計(jì)保護(hù)行，栽培管理方法一致。2.6.2植物學(xué)特征觀察每隔1個(gè)月進(jìn)行苗期生長(zhǎng)勢(shì)觀察，并對(duì)脫毒苗和常規(guī)苗進(jìn)行藤、葉、花和果實(shí)等器官的植物學(xué)進(jìn)行觀察比較。2.6.3始花期、收獲期、可食率等農(nóng)藝性狀的調(diào)查以幼苗期標(biāo)記的種苗為樣本，以第1朵花開(kāi)放的時(shí)間為始陸續(xù)開(kāi)花的時(shí)間記為始花期。在收獲期分別記錄首次和末次收獲正常成熟果實(shí)的時(shí)間。在果實(shí)成熟期隨機(jī)選取自然變黃和變紫的果實(shí)30個(gè)，測(cè)定每個(gè)果實(shí)的單果重、果殼重量，依此測(cè)算果實(shí)可食率。2.6.4可溶性固形物含量、總酸含量、固酸比等品質(zhì)性狀的測(cè)定在果實(shí)收獲期從樣本植株中隨機(jī)選取果皮顏色轉(zhuǎn)為黃色或紫色的果實(shí)20個(gè)，分別測(cè)定可溶性固形物(%)、總酸含量(%)、糖分(%)，并計(jì)算果實(shí)固酸比。結(jié)果以平均值表示，精確到0.01。2.6.5單株產(chǎn)量、單位面積產(chǎn)量等豐產(chǎn)性測(cè)定在果實(shí)主要成熟期選取具有代表性的植株≥5株，隨機(jī)選取20個(gè)代表性果實(shí)，稱取果實(shí)質(zhì)量，計(jì)算單果重，精確到0.1g；根據(jù)該數(shù)據(jù)測(cè)算單季單株產(chǎn)量，精確到0.1kg。根據(jù)單株產(chǎn)量和種植密度計(jì)算單位面積產(chǎn)量，精確到0.1kg。2.7試驗(yàn)總結(jié)試驗(yàn)采用熱處理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合，在切取莖尖前先對(duì)母株進(jìn)行熱處理，擴(kuò)大莖尖無(wú)毒區(qū)，通過(guò)莖尖組織培養(yǎng)獲得無(wú)菌試管苗，無(wú)菌苗單株再進(jìn)行熱處理，切取莖尖進(jìn)行二次培養(yǎng)，可極大提高種苗脫毒概率。最后，對(duì)脫毒種苗進(jìn)行病毒檢測(cè)，確認(rèn)無(wú)規(guī)定的病毒后，再通過(guò)其遺傳穩(wěn)定性鑒定、產(chǎn)量和品質(zhì)性狀進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及綜合評(píng)價(jià)，才能在生產(chǎn)上應(yīng)用。由于有的病毒具有延遲的恢復(fù)期，因此在最初18個(gè)月中每隔一定時(shí)間仍需進(jìn)行病毒檢測(cè)，對(duì)于持續(xù)顯示陰性反應(yīng)、無(wú)特定病毒的植株，才可以進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖。同時(shí)脫毒種苗容易被再次感染的可能，因此在繁殖的不同時(shí)期，對(duì)出圃種苗仍需重復(fù)進(jìn)行病毒檢測(cè)才能提供生產(chǎn)應(yīng)用。三、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告，技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益（一）試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告提出和確定標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容時(shí)進(jìn)行的主要試驗(yàn)或驗(yàn)證的分析，即確定的技術(shù)內(nèi)容指標(biāo)是否科學(xué)合理可行的驗(yàn)證、論證情況。不要重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。不可籠統(tǒng)概括。1、主要試驗(yàn)的主體主要試驗(yàn)的主體包括本標(biāo)準(zhǔn)編制主持單位中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，起草參加單位福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所、廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院、海南金琪智能科技有限公司、貴州正嶸農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司。2、試驗(yàn)驗(yàn)證的方法、手段試驗(yàn)調(diào)查、文獻(xiàn)查閱、會(huì)議研討、試驗(yàn)分析、征求意見(jiàn)、標(biāo)準(zhǔn)審定等。3、試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析（1）產(chǎn)業(yè)調(diào)研標(biāo)準(zhǔn)起草小組于2022年至今對(duì)海南、廣西、福建、貴州等西番蓮（百香果）主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行病毒病調(diào)查，發(fā)現(xiàn)影響百香果產(chǎn)量和品質(zhì)的病毒主要是黃瓜花葉病毒、馬鈴薯Y病毒、夜來(lái)香花葉病毒、西番蓮病毒以及引起果表皮似蠟質(zhì)覆蓋的綜合病毒等。病毒病是導(dǎo)致果農(nóng)經(jīng)濟(jì)效益損失，阻礙西番蓮產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的瓶頸，目前生產(chǎn)上無(wú)有效防治的方法。（2）試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證分析1）試驗(yàn)以海香6號(hào)、中百6號(hào)、黃香1號(hào)等黃果優(yōu)異品種和紫果優(yōu)異品種（臺(tái)農(nóng)一號(hào)）的帶病種苗為試驗(yàn)對(duì)象，選取新梢新生部分為外植體，MS培養(yǎng)基添加ZT和6-BA均對(duì)莖尖萌芽效果顯著，萌芽率達(dá)80%以上，平均萌芽系數(shù)為3±2；芽繼代培養(yǎng)2-3次后再經(jīng)二次熱處理，切取無(wú)菌苗莖尖進(jìn)行二次莖尖培養(yǎng)。取芽長(zhǎng)度0.1~0.3㎝新生莖尖，接種于含6-BA、IBA、ZT的MS固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4~8周，芽伸長(zhǎng)和增殖系數(shù)增加，莖枝伸長(zhǎng)2.5±0.5㎝，增殖系數(shù)為5±1；分離叢生芽，取主莖長(zhǎng)度>1.5㎝單芽，轉(zhuǎn)接至含IBA、NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，獲得黃果嫩莖生根率達(dá)85%以上，紫果嫩莖生根率達(dá)93.1%。外植體預(yù)處理與potyvirus、EAPV病毒檢測(cè)注：A為種苗盆栽熱處理，B為外植體預(yù)處理，C為外植體體內(nèi)的病毒檢測(cè)莖尖初代培養(yǎng)與無(wú)菌苗熱處理注：A為較大莖尖外植體，B為莖尖腋芽誘導(dǎo)，C為無(wú)菌苗熱處理生根誘導(dǎo)培養(yǎng)A為紫果生根培養(yǎng)，B、C為黃果生根培養(yǎng)以感染病毒的樣本為陽(yáng)性對(duì)照，以水為陰性對(duì)照，對(duì)經(jīng)過(guò)莖尖脫毒獲得的移栽生根苗的葉片進(jìn)行RT-PCR分子檢測(cè)得知，內(nèi)標(biāo)基因PeERS2擴(kuò)增為全部陽(yáng)性，說(shuō)明20個(gè)樣品總RNA反轉(zhuǎn)錄成功。說(shuō)明該批次20個(gè)樣品沒(méi)有感染病毒。而20個(gè)待測(cè)樣品中均未檢測(cè)出病毒靶標(biāo)基因，即檢測(cè)結(jié)果均為陰性，說(shuō)明所檢測(cè)樣品已脫除黃瓜花葉病毒（CMV）、馬鈴薯Y病毒（potyvirus）、百香果果斑病毒（PaMV）感染。另外，隨機(jī)抽取16個(gè)樣本的脫毒組培苗新葉送樣至福州海關(guān)技術(shù)中心進(jìn)行7種百香果病毒（CMV、TeMV、EAPV、potyvirus、西番蓮重型斑駁相關(guān)病毒、西番蓮潛隱病毒、雙生病毒）檢測(cè)，獲得14株脫毒苗，脫毒率達(dá)87.5%。2）脫毒種苗遺傳穩(wěn)定性鑒定根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)NY/T2517-2013對(duì)百香果植株性狀描述的要求，據(jù)觀察與統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，上述紫果、黃果的脫毒種苗的藤形狀、葉裂類(lèi)型、葉片顏色等植物學(xué)特征與母本保持一致，但在生長(zhǎng)勢(shì)方面脫種毒苗比常規(guī)苗的更強(qiáng)，葉片長(zhǎng)度、寬度均顯著大于常規(guī)苗的（P<0.05），花型性狀與母本保持一致，與常規(guī)苗相比，脫毒種苗花朵大小大于常規(guī)苗，更有利于吸引昆蟲(chóng)和其他傳粉者授粉，提高花朵被授粉率。在常規(guī)栽培管理?xiàng)l件下脫毒種苗花期比常規(guī)苗延時(shí)開(kāi)花約30d，通過(guò)配套栽培技術(shù)可使脫毒種苗的晚開(kāi)花期縮短至3-5d。脫毒種苗果實(shí)具有色澤光亮、平滑、果形端正、商品果率高的特點(diǎn)。感染病毒病黃果植株黃果脫毒種苗（二）技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益闡述本標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)經(jīng)濟(jì)層面可行性分析以及實(shí)施后預(yù)期取得的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益。1、技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證西番蓮（百香果）是我國(guó)熱帶亞熱帶地區(qū)特色經(jīng)濟(jì)作物，在海南、廣西、福建、貴州、云南等省份和地區(qū)均有規(guī)模化種植。本標(biāo)準(zhǔn)參照國(guó)內(nèi)其他作物的同類(lèi)最新標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)框架并結(jié)合西番蓮（百香果）自身特點(diǎn)，在大量試驗(yàn)技術(shù)、交流和驗(yàn)證的基礎(chǔ)上起草了《西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》，技術(shù)上處于國(guó)內(nèi)先進(jìn)水平。西番蓮（百香果）脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程的制定和實(shí)施，為指導(dǎo)和規(guī)范了我國(guó)西番蓮（百香果）種苗脫毒生產(chǎn)，保證苗木質(zhì)量，加速我國(guó)西番蓮產(chǎn)業(yè)良種良苗標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的進(jìn)程，具有十分重要的意義。2、預(yù)期經(jīng)濟(jì)效益結(jié)合團(tuán)隊(duì)前期獲得的國(guó)家專(zhuān)利“一種百香果實(shí)生苗的多級(jí)修剪方法”和節(jié)本增效栽培技術(shù)取得的研究成果，采用原原種、原種和生產(chǎn)用種的方法，將原種作為母本培育健康脫毒嫁接苗。與普通扦插、嫁接苗相比，脫毒種苗的生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，抗逆性強(qiáng)，果實(shí)色澤光亮、平滑、果個(gè)大，商品果率達(dá)90~100%之間，果實(shí)糖度達(dá)18Brix以上，脫毒種苗的單位面積產(chǎn)量提高10%以上。3、預(yù)期社會(huì)效益制定《西番蓮（百香果）脫毒苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》將規(guī)范我國(guó)西番蓮脫毒種苗市場(chǎng)，保證了苗木質(zhì)量，提高產(chǎn)量和品質(zhì)，提振果農(nóng)種植西番蓮（百香果）的信心，增加農(nóng)村就業(yè)率，促進(jìn)農(nóng)民增收，帶動(dòng)農(nóng)村發(fā)展；同時(shí)有助于西番蓮（百香果）產(chǎn)業(yè)健康、可持續(xù)發(fā)展。4、預(yù)期生態(tài)效益常規(guī)扦插苗和嫁接苗的表型性狀為種苗生長(zhǎng)勢(shì)弱，葉片卷須帶病，果皮表面暗沉粗糙，果實(shí)畸形、可食率低，產(chǎn)量降低，為了使產(chǎn)量和果實(shí)外觀品質(zhì)提高，果農(nóng)不得不加強(qiáng)水肥管理以增強(qiáng)苗木長(zhǎng)勢(shì)和抗逆能力。然而，在生產(chǎn)上種植脫毒種苗，植株長(zhǎng)勢(shì)旺盛、抗旱性強(qiáng)，在生產(chǎn)上可減少一定量的肥料、農(nóng)藥以及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等投入，促進(jìn)土壤生態(tài)良性循環(huán)，利于周邊植被的生長(zhǎng)，減少對(duì)環(huán)境的破壞。四、與國(guó)際、國(guó)外同類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對(duì)比情況，或者與測(cè)試的國(guó)外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況主要說(shuō)明采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)程度，以及與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比情況，或與測(cè)試的國(guó)外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況，并說(shuō)明未采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的原因。本標(biāo)準(zhǔn)在研究與編制過(guò)程中，查閱了相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。在國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（InternationalOrganizationforStandardization，ISO）的標(biāo)準(zhǔn)中，國(guó)外俄羅斯、肯尼亞、馬來(lái)西亞、哥倫比亞、美洲-圭亞那、斯里蘭卡的西番蓮（百香果）標(biāo)準(zhǔn)中只涉及果實(shí)等級(jí)、果汁規(guī)格的相關(guān)要求，沒(méi)有脫毒種苗生產(chǎn)要求的相關(guān)內(nèi)容。五、以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)的起草情況，以及是否合規(guī)引用或者采用國(guó)際國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)，并說(shuō)明未采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的原因與西番蓮（百香果）相關(guān)的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)有：俄羅斯國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GOST34402-2018《Маракуйясвежая.Техническиеусловия（新鮮的百香果規(guī)格）》，哥倫比亞標(biāo)準(zhǔn)NTC6456-2020《Frutasfrescas.Gulupa.Especificaciones》，美洲-圭亞那GYS64-1996《Specificationforgradesofpassio