DB36T-動(dòng)物源性食品中金剛烷胺的檢測(cè) 量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法

ICS?FORMTEXT點(diǎn)擊此處添加ICS號(hào)FORMTEXT點(diǎn)擊此處添加中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)分類(lèi)號(hào)FORMTEXT?????DBFORMTEXT??DBFORMTEXTXX/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????FORMTEXT動(dòng)物源性食品中金剛烷胺的檢測(cè)量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法FORMTEXTDeterminationofamantadineresidueinanimalderivedfoodQuantumdotmicrospherelateralflowimmunoassayFORMTEXT點(diǎn)擊此處添加與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識(shí)FORMDROPDOWNFORMTEXT?????FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT????????發(fā)布DBXX/XXXXX—XXXX前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設(shè)備 27試樣制備 28檢測(cè)步驟 39結(jié)果表述 310其他 4前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出并歸口。本文件起草單位：南昌大學(xué)、江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局、江西省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證總院、江西維邦生物科技有限公司本文件主要起草人：動(dòng)物源性食品中金剛烷胺的檢測(cè)量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法范圍本文件規(guī)定了動(dòng)物源性食品中金剛烷胺殘留量的量子點(diǎn)微球熒光免疫層析檢測(cè)方法。本文件適用于雞肉、雞蛋和豬肉中金剛烷胺的快速檢測(cè)。本方法檢測(cè)金剛烷胺的檢出限為0.1μg/kg，定量限為0.3μg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB31650食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T27417合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理本方法以量子點(diǎn)微球?yàn)闊晒鈽?biāo)記物，基于競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析技術(shù)原理，通過(guò)熒光信號(hào)讀取儀進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，對(duì)動(dòng)物源性食品中金剛烷胺進(jìn)行半定量或定量檢測(cè)。試劑和材料除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純水：應(yīng)符合GB/T6682，二級(jí)水。金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。甲醇（CH3OH）。乙酸乙酯(CH3COOC2H5)。正己烷(C6H14)。二水合磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）。十二水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。氯化鈉（NaCl）。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。氯化鉀（KCl）。鹽酸（HCl）。氫氧化鈉（NaOH）。樣本提取劑A：稱(chēng)取8.0g氯化鈉（5.8）、0.2g磷酸二氫鉀（5.9）、0.2g氯化鉀（5.10）、2.9g十二水合磷酸氫二鈉（5.7），加入約500mL水（5.1）溶解，再加入鹽酸（5.11）溶液0.5mL，加水（5.1）定容至1L。樣本提取劑B：稱(chēng)取20.0g氫氧化鈉（5.12），加入約900mL水（5.1）溶解混勻，定容至1L。樣本復(fù)溶液磷酸鹽緩沖液（10mmol/L，pH7.4）：稱(chēng)取8.0g氯化鈉（5.8）、2.77g十二水合磷酸氫二鈉（5.7）、0.352g二水合磷酸二氫鈉（5.6），用水（5.1）溶解并定容至1L。金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液（100μg/mL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取10mg（精確至0.01mg）金剛烷胺（5.2）于燒杯中，用甲醇（5.3）溶解后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用甲醇（5.3）稀釋至刻度，搖勻。-20℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。儀器和設(shè)備分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。微量移液器：20～200μL、100～1000μL和1～10mL。旋渦混合器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。恒溫孵育器：設(shè)定溫度誤差不超過(guò)±1度。熒光免疫分析儀：激發(fā)波長(zhǎng)為365±5nm，發(fā)射波長(zhǎng)為610±5nm。樣品濃縮儀：設(shè)定溫度誤差不超過(guò)±1度。攪碎機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。離心管：1.5mL和50mL。金剛烷胺量子點(diǎn)微球熒光免疫層析快速檢測(cè)試劑盒（一般含檢測(cè)卡和ID卡，內(nèi)設(shè)對(duì)應(yīng)批次標(biāo)準(zhǔn)曲線）。試樣制備試樣準(zhǔn)備稱(chēng)取約200g具有代表性的禽肉組織樣品，充分均質(zhì)混勻，分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標(biāo)記。留樣置于-20℃保存。試樣前處理準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣2g（精確至0.01g）均質(zhì)樣本于50mL離心管中。加入2mL樣本提取劑A（5.13），渦旋振蕩2min，加入1mL樣本提取劑B（5.14），渦旋振蕩30s，最后加入4mL乙酸乙酯（5.4），手動(dòng)振蕩混勻30s，靜置1min，待溶液分層。準(zhǔn)確吸取2mL上清液于10mL離心管中，于65℃用樣品濃縮儀（6.6）吹干。加入1mL正己烷（5.5），完全溶解后再加入500μL樣本復(fù)溶液（5.15），輕輕顛倒混勻，確保離心管壁上的殘留均能被樣本復(fù)溶液混勻（請(qǐng)勿振蕩）。靜置1min，溶液分層后吸取下層液體用于檢測(cè)。注：不同廠家檢測(cè)卡所用的樣品前處理方法可能不同，應(yīng)按照產(chǎn)品使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)行操作。檢測(cè)步驟測(cè)試前打開(kāi)熒光免疫分析儀（6.5），確認(rèn)試劑盒中的ID卡與試劑盒的批號(hào)是否匹配后插入ID卡，在儀器測(cè)試界面點(diǎn)擊“讀ID卡/讀項(xiàng)目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點(diǎn)擊“確認(rèn)”即可使用。將恒溫孵育器（6.4）開(kāi)機(jī)，待溫度升至37℃即可使用。從包裝鋁箔袋中取出檢測(cè)卡，在半小時(shí)內(nèi)使用。將檢測(cè)卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測(cè)液于檢測(cè)卡的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應(yīng)10min。反應(yīng)時(shí)間結(jié)束后立即將檢測(cè)卡插入讀取儀中，點(diǎn)擊儀器界面的“測(cè)試”，儀器會(huì)自動(dòng)給出定量測(cè)試結(jié)果，15min后測(cè)試無(wú)效。注：不同廠家讀卡儀所用儀器界面設(shè)置可能不同，應(yīng)按照儀器使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)行。結(jié)果表述樣品中金剛烷胺的含量由熒光分析儀自動(dòng)計(jì)算并顯示，單位為微克/千克（μg/kg）。其他本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB31660.5《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物性食品中金剛烷胺殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)附錄A。附錄A（資料性）產(chǎn)品性能指標(biāo)計(jì)算A.1檢出限和定量限通過(guò)對(duì)20個(gè)獨(dú)立的空白樣品進(jìn)行測(cè)定，檢出限以空白樣品20次測(cè)定結(jié)果的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算；定量限以空白樣品20次測(cè)定結(jié)果的均值加10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算。A.2準(zhǔn)確度綜合考慮目標(biāo)分析物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量值或禁用目標(biāo)分析物的參比方法定量限，制備低、中、高三個(gè)濃度水平的盲樣，每個(gè)濃度水平進(jìn)行至少6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。三個(gè)濃度水平的平均加標(biāo)回收率應(yīng)在70-130%（需討論確定）。A.3重復(fù)性采用三批驗(yàn)證產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，每批至少6次重復(fù)測(cè)定中等濃度水平的樣品，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于15%。A.4特異性目標(biāo)分析物及其結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液配制成系列梯度濃度，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出I