醫(yī)學(xué)論文HCV檢測(cè)現(xiàn)狀及新進(jìn)展

1、醫(yī)學(xué)論文-hcv檢測(cè)現(xiàn)狀及新進(jìn)展【摘要】丙肝是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的傳染病之一，主要通過(guò)血液傳染。我國(guó)平均感染率為3.2%。北方稍高，約為4.6%，南方為2.6%2.9%，感染人數(shù)估計(jì)有3700萬(wàn)。受感染的母親傳播給嬰兒的發(fā)生率為5%?；技毙愿窝缀蠹s有50%70%的感染者有轉(zhuǎn)為慢性肝炎的傾向，重者2025年后可轉(zhuǎn)化為肝硬化，肝硬化患者10年內(nèi)有大約30%的發(fā)展為終末期肝病1-2，并且hcv感染與原發(fā)性肝細(xì)胞癌有較密切的關(guān)系。對(duì)于hcv感染者，第3、5、7、10年的肝癌累積發(fā)生率達(dá)11%、18.1%、29%、45.6%3。隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的迅猛發(fā)展，hcv檢測(cè)技術(shù)也不斷提高但與檢測(cè)乙型肝炎病毒（hbv）

2、相比，hcv的檢測(cè)還有許多難題有待解決。 【關(guān)鍵詞】hcv抗hcvrnaelisart-pcr hcv檢測(cè)目前存在的主要問(wèn)題有：1.由于hcv抗原結(jié)構(gòu)的特殊性，直接檢測(cè)血清中hcv抗原的技術(shù)問(wèn)題還未徹底解決。2.抗體（抗hcv）出現(xiàn)時(shí)間晚，從hcv感染后到抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)的時(shí)間平均為5070天，有的患者可延長(zhǎng)至69個(gè)月，檢測(cè)的“窗口期”較長(zhǎng)。3.病毒基因型復(fù)雜而且容易變異，使基因水平的檢測(cè)質(zhì)量不夠穩(wěn)定。隨著有關(guān)人員近年來(lái)的不斷努力和相關(guān)科學(xué)的迅猛發(fā)展，已經(jīng)在hcv檢測(cè)技術(shù)方面有了重要進(jìn)展。 1第三代抗hcv試劑的應(yīng)用 檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體（抗hcv）仍是目前常用手段，這方面的檢測(cè)方法主要是第三代酶免疫

3、測(cè)定法（eia）或間接酶免疫法（elisa），我國(guó)大多采用elisa方法。 elisa方法中包被抗原的組成和質(zhì)量是關(guān)鍵因素。第三代elisa試劑比第一、第二代試劑有明顯的改進(jìn)，其包被的抗原為hcv核心抗原ns3、ns4和ns5。由于第一、第二代試劑的重組基因多肽抗原中仍有sod多肽，所以都存在抗sod造成的假陽(yáng)性。而第三代hcv試劑，用中國(guó)北方地區(qū)hcv全基因序列，根據(jù)文獻(xiàn)開(kāi)發(fā)的預(yù)測(cè)蛋白理化性質(zhì)及三級(jí)結(jié)構(gòu)和抗原決定簇的位點(diǎn)的序列軟件，完成了hcv全基因序列的親水性親近性移動(dòng)性分析，已預(yù)測(cè)到hcv抗原決定簇的位點(diǎn)。第三代試劑的特異性達(dá)到99%4。抗hcv檢測(cè)可成為丙型肝炎病毒早期感染的檢測(cè)指標(biāo)5

4、。 hcv感染通常是持續(xù)的終生感染。雖然第三代hcv抗體elisa試劑增加了hcvns5區(qū)表達(dá)的蛋白作為抗原，提高了試劑敏感性，hcv感染的“窗口期”通常還需要平均40多天。因此，第三代elisa試劑仍需要提高和改進(jìn)，例如在篩查試驗(yàn)的特異性方面，仍存在假陽(yáng)性結(jié)果。對(duì)強(qiáng)陽(yáng)性或弱陽(yáng)性樣本的檢測(cè)，國(guó)產(chǎn)試劑（主要廠家）的s/co值高于進(jìn)口試劑，但是無(wú)論對(duì)陽(yáng)性及陰性樣本檢測(cè)，國(guó)產(chǎn)試劑的cv值及特異性均明顯低于進(jìn)口試劑，以致出現(xiàn)更多的假陽(yáng)性結(jié)果。此外，丙肝抗體酶免試劑皆沒(méi)有灰區(qū)的設(shè)定，s/co比值較低（但大于）的結(jié)果也報(bào)告陽(yáng)性，亦是假陽(yáng)性比較多的原因。6 2丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)方法的建立 多年來(lái)，專(zhuān)業(yè)人員

5、一直探索能夠直接檢測(cè)hcv抗原，以達(dá)到縮短窗口期的目的。但是由于hcv抗原的特殊性和相關(guān)抗體制備中存在的困難，使這方面的進(jìn)展受到阻礙。 2.1hcv核心抗原檢測(cè) hcv核心抗原是hcv感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染指標(biāo)，幾乎與hcvrna同時(shí)出現(xiàn)，核心抗原和hcvrna的動(dòng)力學(xué)變化密切相關(guān)。 hcv核心抗原檢測(cè)用雙抗體夾心法定性或定量檢測(cè)血清樣品中的hcv核心抗原，其基本原理是：以基因工程核心抗原免疫小鼠后獲得的純抗hcv核心抗原單克隆抗體作為固相包被物，用與固相包被物有不同抗原決定簇的抗-hcv核心抗原單克隆抗體作為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物，與血清中的hcv核心抗原反應(yīng)，opd顯色后進(jìn)行定性或定量測(cè)定

6、。該方法不受被檢測(cè)樣品中抗-hcv的干擾，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠?？捎糜趆cv早期急性丙型肝炎診斷，抗-hcv陽(yáng)性感染者的病毒血癥分析以及hcv感染者治療前后病毒血癥追蹤分析7。 有報(bào)道，hcv-cag檢測(cè)可以較hcv抗體檢出時(shí)間提早2346d8，且eia法較pcr法簡(jiǎn)便、快速，現(xiàn)有能力開(kāi)展elisa檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室無(wú)需增加特殊設(shè)備，均可檢測(cè)。其結(jié)果與rt-pcr方法的復(fù)合率為85.71%。因此，在不具備rna檢測(cè)條件的實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展hcv-cag檢測(cè)時(shí)很好的篩查方法。有報(bào)道，在對(duì)180例抗-hcv陰性患者的篩查中，檢出hcvcag陽(yáng)性2例，表明僅用抗hcv檢測(cè)將有可能存在0.55%感染者漏診的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是

7、對(duì)手術(shù)前丙肝病毒篩查的病例，它涉及到術(shù)中感染責(zé)任和用血安全等問(wèn)題。丙肝核心抗原檢測(cè)在一定程度上降低了這些風(fēng)險(xiǎn)。因此,丙肝核心抗原檢測(cè)可作為hcv抗體檢測(cè)的補(bǔ)充試劑。 2.2hcv抗原檢測(cè) 十幾年來(lái)，一些學(xué)者曾經(jīng)試圖建立血清中各種hcv抗原的檢測(cè)方法，但由于血液中hcv抗原含量太低，用常規(guī)方法無(wú)法檢測(cè)出。近年來(lái)，由于hcv單克隆抗體的研究成功，已有國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)表了肝組織及人體分泌物中hcv抗原檢測(cè)成功的報(bào)導(dǎo)。如果能加強(qiáng)對(duì)hcv中和抗體wv、抗-hcv-igm、抗-hcv核心抗體的研究9，進(jìn)一步開(kāi)發(fā)對(duì)血清及肝組織內(nèi)hcv抗原的測(cè)定，可能會(huì)在丙肝的實(shí)驗(yàn)診斷方面取得更大進(jìn)展。 3丙型肝炎病毒rna的檢

8、測(cè) 現(xiàn)在用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（rt-pcr）檢測(cè)血清中的hcvrna。基本原理是首先經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用，在特異性引物存在下，將hcvrna逆轉(zhuǎn)錄為單鏈的cdna，再通過(guò)pcr將cdna擴(kuò)增。定性pcr的靈敏度高于定量pcr。羅氏公司的定性pcr的靈敏度為50kiu/l，定量pcr為600kiu/l；拜爾公司的定性pcr的靈敏度為10kiu/l，其定量pcr為615kiu/l。定性pcr檢測(cè)主要用于急性丙型肝炎診斷，而定量pcr則用于療效監(jiān)測(cè)。 最新報(bào)導(dǎo)，應(yīng)用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增系統(tǒng)(tma)可以將hcvrna的檢出率提高到510iu/ml的水平。其原理為：目標(biāo)序列在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下，以引物為引導(dǎo)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

9、，逆轉(zhuǎn)錄酶的rna酶h活性將雜合鏈上的rna降解以后，合成雙鏈的dna，并在t7rna多聚酶的作用下，轉(zhuǎn)錄出成千上萬(wàn)個(gè)目標(biāo)rna序列，這些rna又可以作為模板進(jìn)行下一個(gè)循環(huán)，整個(gè)反應(yīng)是一個(gè)自我催化過(guò)程，靈敏度高，反應(yīng)條件簡(jiǎn)單，擴(kuò)增效率高，無(wú)需專(zhuān)門(mén)的擴(kuò)增儀器，整個(gè)反應(yīng)在一個(gè)試管中進(jìn)行，減少污染。 參考文獻(xiàn) 1straderdb,wrightt,thomasdl,hepatology,2004,39:1147-1171. 2周永興.世界華人消化雜志,2004,12:2369-2371. 3謝立,吳曉東.世界華人消化雜志,2005,13:884-886. 4邢文革,鄭懷競(jìng).中華肝臟病毒雜志，2004，12：170-171. 5lunelf、villonp、payanc，hepatology，2002，36（pt2）：353. 6王國(guó)華、張賀秋、李少波等.丙型肝炎核心抗原檢測(cè)試劑的研究及初步應(yīng)用j|中國(guó)輸血雜志，2004，17（5）：11-14. 7孟淑芳,李秀華,尹紅章等.丙