重組腺病毒治療膀胱癌的研究進(jìn)展解析

1、基金項目：國際863計劃項目（2008AA02Z421作者單位:730030蘭州大學(xué)第 二醫(yī)院泌尿研究所通訊作者：王志平,E2mail:erywzp ?綜述？重組腺病毒治療膀胱癌的研究進(jìn)展傅崇德王志平doi:10.3870/j.iss n.167424624.2009.04.018膀胱癌的發(fā)病率在我國泌尿系統(tǒng)腫瘤中位居第一，多發(fā)、難治和術(shù)后復(fù)發(fā) 率高是膀胱癌的特點，目前以手術(shù)切除為主、放化療為輔的治療方案效果均不理 想。膀胱癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率仍然很高，特別是對于晚期腫瘤、表淺膀胱癌以及有耐 藥性的原位膀胱癌。鑒于這種現(xiàn)狀，迫切需要新的治療方法的出現(xiàn)。重組腺病毒介 導(dǎo)的膀胱癌基因治療是目前關(guān)注最多

2、的治療方法。腺病毒由于具有嗜上皮細(xì)胞性、對人致病性低、能同時表達(dá)多個基因、能有效 進(jìn)行增殖、滴度高等優(yōu)點，是基因治療中最廣泛使用的載體之一。而膀胱癌多發(fā)源 于尿路移行上皮，并且膀胱具有與外界相通這一解剖優(yōu)勢，通過對腺病毒基因進(jìn)行重 組，導(dǎo)入治療基因或膀胱癌細(xì)胞特異性啟動子行膀胱灌注以降低其治療的不良反應(yīng)，是膀胱癌基因治療的較有前途的策略。一、以復(fù)制缺陷型腺病毒作載體導(dǎo)入治療基因1.導(dǎo)入抑癌基因行基因校正治療：抑癌基因可通過抑制原癌基因的活化及表達(dá)， 或使癌基因表達(dá)蛋白產(chǎn)物失活等，對細(xì)胞增殖起負(fù)調(diào)節(jié)作用，具有誘導(dǎo)終末分化和細(xì) 胞凋亡、維持基因穩(wěn)定和潛在抑制腫瘤生長的功能，當(dāng)其發(fā)生突變、缺失或功能

3、失活時，可導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而發(fā)生腫瘤。將正常的抑癌基因轉(zhuǎn)入膀胱癌細(xì)胞系及利 用癌基因置換來控制或抑制癌基因表達(dá)，必然會導(dǎo)致癌細(xì)胞生長受阻，從而達(dá)到治療 膀胱腫瘤的目的。p53基因突變見于超過半數(shù)的膀胱癌，以表淺性膀胱癌居多。其功 能的喪失可導(dǎo)致早期腫瘤的發(fā)生，而且越到晚期或腫瘤的惡性程度越高，這種突變的 發(fā)生率則越高。由于p53基因具有抑制細(xì)胞生長及導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的能力，已成為膀 胱腫瘤基因治療的主要候選基因。研究證實攜帶p53基因的腺病毒載體Ad5CMV2p53能夠明顯抑制人類和鼠的膀胱癌細(xì)胞系的生長，延長宿主動物對腫瘤 的耐受時間。I期臨床試驗發(fā)現(xiàn)進(jìn)展性膀胱癌患者膀胱灌注Ad5CMV2p53

4、是安全可行的，對表淺性膀胱癌抗癌效應(yīng)明顯，但其基因轉(zhuǎn)移效率及表達(dá)水平有待提高。p16基因的變異不僅在腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮作用，而且與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)。50%的表淺膀 胱癌存在p16基因的突變和缺失1,恢復(fù)腫瘤細(xì)胞中正常p16基因功能是抑制腫瘤 增殖的一種手段。Grim等2利用腺病毒載體將完整的p16基因轉(zhuǎn)入p16陰性的膀 胱癌細(xì)胞E J和UMUC23,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖顯著降低。周文泉等3研究發(fā)現(xiàn)將 Ad2p16導(dǎo)入p16蛋白表達(dá)陰性的T24細(xì)胞,能抑制其生長。朱朝輝等4發(fā)現(xiàn)將 Ad2p53和Ad2p16同時導(dǎo)入E J細(xì)胞的抗癌效應(yīng)強于兩者單獨使用。Rb基因是最早發(fā)現(xiàn)且易發(fā)生突變的一種抑癌基因。野生型R

5、b基因置換可抑制Rb缺陷腫瘤細(xì)胞的致癌性。Rb基因的失活不僅存在于散發(fā)性膀胱癌中，同時也存在于具有Rb基 因介入的膀胱癌細(xì)胞系中，其結(jié)果使癌細(xì)胞緩慢增生。Xu等觀察由腺病毒載體轉(zhuǎn) 染Rb基因入膀胱癌細(xì)胞，使癌細(xì)胞DNA合成明顯下降，細(xì)胞生長率下降。Zhang等 發(fā)現(xiàn)Ad2RB94能使端粒酶表達(dá)陽性的膀胱癌細(xì)胞出現(xiàn)明顯的生長抑制和caspase依賴的凋亡，而對端粒酶陰性的人類尿路上皮無毒性作用。ErbB2的表達(dá)異常也是 膀胱癌發(fā)生的一個相關(guān)因素，lrie等7構(gòu)建了一種能同時表達(dá)p53和抗ErbB2核酶 的腺病毒Ad2p53/erbB2Rz,發(fā)現(xiàn)其抗膀胱癌細(xì)胞生長作用明顯優(yōu)于 Ad2p53和 Ad

6、2erbB2Rz單獨或聯(lián)合應(yīng)用，而且非特異性載體相關(guān)不良反應(yīng)較少。2導(dǎo)入細(xì)胞因子行免疫基因療法：許多研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞通過減弱免疫原性或 使其消失、抑制免疫反應(yīng)來逃避免疫系統(tǒng)的作用。全身性細(xì)胞因子的應(yīng)用可以增強 免疫反應(yīng)，但常常合并諸如毛細(xì)血管漏綜合征等嚴(yán)重的并發(fā)癥。將細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn) 入腫瘤細(xì)胞，不僅可以使腫瘤局部產(chǎn)生細(xì)胞因子，而且減少了全身不良反應(yīng)，細(xì)胞因子 的持續(xù)表達(dá)還可以使腫瘤局部維持穩(wěn)定的細(xì)胞因子濃度。顧正勤等8通過膀胱灌注的方法將攜帶有人類IL22的重組腺病毒AdhlL22灌入大鼠膀胱內(nèi)，分不同時間段 獲取大鼠膀胱黏膜組織，發(fā)現(xiàn)腺病毒介導(dǎo)hIL22在膀胱移行上皮細(xì)胞中得到有效表 達(dá)，

7、基因表達(dá)持續(xù)時間達(dá)到7天。IN F2 a 2能夠減少血管內(nèi)皮生長因子（V EGF的表達(dá)來抑制腫瘤血管的發(fā)生產(chǎn) 生抗腫瘤的作用。Adam等9以腺病毒作載體將IN F2 a 2導(dǎo)入各種膀胱上皮癌細(xì) 胞發(fā)現(xiàn)V EGF、基質(zhì)金屬蛋白酶22的表達(dá)明顯降低,而用多達(dá)100000IU的重組IN F作用后V EGF表達(dá)無明顯變化，體內(nèi)試驗觀察到治療后隨著 V EGF的降低，腫瘤血 管密度也隨之減小，從而證明了腺病毒介導(dǎo)的INF2a 2b對表淺性膀胱癌的治療優(yōu)勢 并可望降低其復(fù)發(fā)率。3導(dǎo)入自殺基因：自殺基因療法是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將哺乳動物細(xì)胞中不含有的 自殺基因轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞中，該基因表達(dá)的產(chǎn)物可將無毒的藥物前體

8、轉(zhuǎn)化為有毒的藥 物，影響腫瘤細(xì)胞的遺傳物質(zhì)合成，最終引起細(xì)胞死亡。目前研究最多的是單純皰疹 病毒胸苷激酶基因/更昔洛韋（HSV2T K/ GCV系統(tǒng)。HSV2T K殺傷腫瘤細(xì)胞主要是 通過催化一些與核苷類似的藥物如 GCV磷酸化，這些藥物不能在細(xì)胞T K基因作用 下磷酸化，因而其本身對細(xì)胞的毒性很低。在導(dǎo)入 HSV2T K并能有效表達(dá)的腫瘤細(xì) 胞中，這種藥物可被磷酸化而抑制細(xì)胞 DNA的合成。Akasaka等10利用化學(xué)藥物 誘發(fā)小鼠發(fā)生膀胱腫瘤，然后用膀胱灌注法將攜帶有HSV2T K的腺病毒導(dǎo)入鼠膀胱 中，接著注入GCV,3d后，腫瘤細(xì)胞發(fā)生了明顯的空泡變性，14d后，腫瘤生長被明顯抑 制，

9、并且可觀察到腺體化生。隨后的相似實驗也證明了 HSV2T K/GCV系統(tǒng)是治療 膀胱癌的一種安全有效的新方法。自殺基因治療腫瘤可同時殺死轉(zhuǎn)染細(xì)胞和鄰近的未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，產(chǎn)生旁觀者效 應(yīng)。旁觀者效應(yīng)可以彌補基因治療中載體轉(zhuǎn)染效率低和轉(zhuǎn)染后表達(dá)少等方面的不 足。Tanaka等11認(rèn)為這種旁觀者效應(yīng)由連接蛋白（Connexins,Cxs介導(dǎo),構(gòu)建能同時 表達(dá)HSV2T K和Cx26基因的腺病毒，發(fā)現(xiàn)Cx26的引入能明顯增加HSV2T K/GCV 的抗腫瘤效應(yīng)。CD/52FC系統(tǒng)通過表達(dá)胞嘧啶脫氨酶（CD將無毒性前藥52氟胞嘧啶（52FC脫 氨轉(zhuǎn)變?yōu)橛屑?xì)胞毒性的代謝產(chǎn)物 52氟尿嘧啶（52FU,52FU

10、抑制細(xì)胞RNA合成而殺 死細(xì)胞。譚萬龍等12建立C57BL/6同系膀胱癌Mb49皮下移植瘤模型，腫瘤注射腺 病毒聯(lián)合丙氧鳥苷（GCV和（或52FC治療,發(fā)現(xiàn)腺病毒介導(dǎo)CD2T K融合雙自殺基因 聯(lián)合GCV和（或52FC能有效治療膀胱癌，融合雙自殺基因CD2T K/（GCV+ 52FC系 統(tǒng)對膀胱癌治療有協(xié)同作用，其效果優(yōu)于CD2T K GCV或CD2T K/52FC系統(tǒng)。4.反義基因療法：反義基因療法是指應(yīng)用反義核酸在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平阻斷某些 異?；虻谋磉_(dá)。如針對c2myc翻譯起始區(qū)的15聚反義寡脫氧核苷酸，可以有效地 抑制人膀胱癌細(xì)胞DNA合成,p62表達(dá)減少，致瘤性下降；反義轉(zhuǎn)化生長因子重

11、組質(zhì) 粒,可使鼠膀胱腫瘤細(xì)胞的克隆形成能力減弱。尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA在人膀胱腫瘤中含量增多，而用反義寡核苷酸抑制uPA基因表達(dá),可使腫瘤轉(zhuǎn)移能力減 弱。朱朝輝等13以Ad2p53轉(zhuǎn)染E J和BIU287膀胱癌細(xì)胞，再以脂質(zhì)體將增殖細(xì)胞 核抗原反義寡核苷酸（PCNA2ASO轉(zhuǎn)入細(xì)胞，通過體內(nèi)外試驗發(fā)現(xiàn)兩者可明顯抑制 p53突變的膀胱癌細(xì)胞的生長。叢生蛋白（Clusterin是一種抗凋亡蛋白，其過度表達(dá) 與膀胱癌的進(jìn)展和復(fù)發(fā)密切相關(guān)，Ad5CMV2p53可使之在膀胱癌細(xì)胞表達(dá)上調(diào)而影 響其療效。Miyake等14研究發(fā)現(xiàn)將作用于Clusterin的反義（AS叢生蛋白寡聚脫氧 核苷酸（OD

12、N與Ad5CMV2p53聯(lián)合作用于人類膀胱癌 K o TCC21細(xì)胞可觀察到 DNA斷裂導(dǎo)致凋亡,而兩者單獨使用均未出現(xiàn),K o TCC21細(xì)胞接種裸鼠后發(fā)現(xiàn)，兩 者的聯(lián)合殺滅了 60%的細(xì)胞生長并根除了 100%的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。二、條件復(fù)制腺病毒腺病毒的復(fù)制需要細(xì)胞周期從G1期進(jìn)入S期。腺病毒感染細(xì)胞后，其早期蛋白 E1A與宿主細(xì)胞的RB蛋白結(jié)合,激活E2F轉(zhuǎn)錄因子,迫使細(xì)胞周期進(jìn)入S期,從而為 腺病毒的復(fù)制提供了良好環(huán)境。但隨著 E2F的激活,p53也被激活了。p53蛋白使細(xì) 胞周期阻滯在G1期或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而限制了病毒的復(fù)制。然而腺病毒的 E1B255kD蛋白可以結(jié)合p53蛋白并使之失

13、活，最終使細(xì)胞周期進(jìn)入S期，從而使腺 病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。多數(shù)膀胱癌細(xì)胞存在p53或RB的突變，因此腺病毒E1A或E1B255kD的缺失或異常對于腺病毒在腫瘤細(xì)胞（p53或RB功能異常內(nèi)的復(fù)制無 關(guān)緊要，但它們的存在可引起腺病毒在正常細(xì)胞（p53或RB功能正常內(nèi)復(fù)制從而導(dǎo) 致正常細(xì)胞凋亡。因此，可通過改變腺病毒的E1A或E1B255kD基因使其相應(yīng)的功能喪失，從而使腺病毒選擇性地在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并破壞腫瘤細(xì)胞，而正常細(xì)胞即使被感染，病毒也不會復(fù)制，即條件復(fù)制腺病毒。1改造腺病毒復(fù)制必需基因,增強其腫瘤特異性：1996年,Bischoff等首先報道了E1B255kD缺失的溶瘤腺病毒dl1520

14、（又稱ON YX2015可以選擇性地在p53功能異 常的癌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并破壞癌細(xì)胞，卻不能在正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。這是因為 dl1520喪失 了 E1B255kD的活性而不能結(jié)合并失活宿主細(xì)胞的 p53功能,因而在p53功能正常 的細(xì)胞如正常細(xì)胞內(nèi)不能復(fù)制，而在p53功能異常細(xì)胞如癌細(xì)胞內(nèi)則可以大量復(fù) 制。E1B255kD缺失的腺病毒能殺死p53功能缺陷的膀胱癌細(xì)胞并且對正常細(xì)胞無 毒性作用，而對含有野生型p53的膀胱癌細(xì)胞溶瘤作用不明顯。Hsieh等15介紹了 一種E1B2 55kD缺失的腺病毒Ad5WS，以及能編碼纖溶酶原三環(huán)結(jié)構(gòu)域 125（一種 血管生成抑制劑的重組缺陷腺病毒載體，兩者聯(lián)合應(yīng)用可

15、明顯增加Ad5WS的溶膀胱 癌細(xì)胞TCC2SU P的效果。Wang等16報道了一種E1A突變、E1B255KD缺失的 雙限制溶瘤腺病毒 AxdAdB23,并與AxE1AdB（E1B255KD 缺失和dl9222947（E1A突 變相對照，作用于各種膀胱癌細(xì)胞系及正常膀胱黏膜細(xì)胞HCV29,發(fā)現(xiàn)AxdAdB23導(dǎo)致各種膀胱癌細(xì)胞的溶解，并且比AxE1AdB和dl9222947更易出現(xiàn)細(xì)胞病理反應(yīng)，而 對HCV29細(xì)胞無毒性作用，然后建立了 SCID小鼠膀胱癌模型，膀胱灌注AxdAdB23 后行B超檢測發(fā)現(xiàn)腫瘤生長明顯抑制，并且延長了存活期。2.插入腫瘤組織特異性啟動子驅(qū)動病毒在膀胱癌中特異性復(fù)制

16、：將腫瘤特異性 啟動子放置于腺病毒某些必需基因（E1A前面驅(qū)動這些基因的轉(zhuǎn)錄翻譯，使腺病毒僅 能在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制起到特異性溶瘤效果。絕大多數(shù)腫瘤端粒酶活性明顯增強，主要與人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（h TER T轉(zhuǎn)錄水平升高有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)含人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄 酶啟動子驅(qū)動的E1A基因的重組腺病毒Ad2h TER T,體外實驗證實此腺病毒能在 端粒酶（+的腫瘤細(xì)胞中大量復(fù)制，而在端粒酶（-的細(xì)胞中則復(fù)制能力極低，其腫瘤殺 傷能力比ON YX2015強。連文峰等17報道了以h TER T為啟動子驅(qū)動HSV2T K 基因的重組腺病毒 Ad2h TER T2HSV2T K結(jié)合無毒的環(huán)氧鳥苷（GCV對人膀胱癌細(xì) 胞株

17、253JBALB/C裸小鼠顯示出明顯的腫瘤抑制作用。尿路上皮細(xì)胞中存在糖蛋白（Uroplakins,U Ps,在其他組織中幾乎不表達(dá)，其中U PU具有膀胱特異性。Zhang等18構(gòu)建了通過U PU啟動子控制腺病毒表達(dá)的膀胱 特異性腺病毒CG8840,隨后的研究又證明人和小鼠的 U PU啟動子在人膀胱腫瘤細(xì) 胞中都具有特異性的活性，即使是在分化極差的尿路上皮癌細(xì)胞中仍然使得其下游 基因得到表達(dá)。骨涎蛋白（bone sialoprtein,BSP在許多骨細(xì)胞腫瘤、膀胱癌細(xì)胞都有 表達(dá)。Melquist等19建立了利用BSP作為啟動子的條件腺病毒Ad2BSP2E1a發(fā)現(xiàn) 它能顯著降低對其敏感的膀胱腫

18、瘤細(xì)胞的生長率。環(huán)氧化酶2（Cox22是催化前列腺素合成的酶，在多種惡性腫瘤如膀胱癌中高表達(dá)。Shirakawa等20以構(gòu)建Cox22的條件腺病毒AdE32cox22327,發(fā)現(xiàn)能明顯抑制Cox22和CAR高表達(dá)的膀胱癌細(xì)胞 KK47和5637的生長，而對Cox22 和CAR無表達(dá)的人類前列腺癌細(xì)胞PC3和人類結(jié)腸癌細(xì)胞Colo320作用不明顯。 E2F21a是Rb基因缺陷的腫瘤特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件，調(diào)節(jié)腺病毒復(fù)制必需的E1a基 因的表達(dá),使腺病毒僅在Rb缺陷腫瘤細(xì)胞中特異性復(fù)制產(chǎn)生毒性作用。Ramesh等21構(gòu)建了以E2F21a作啟動子調(diào)控E1a表達(dá)的條件腺病毒 CG0070證明了 CG007

19、0 在Rb缺陷的膀胱癌細(xì)胞中特異性復(fù)制，病毒量是人類正常細(xì)胞中的100倍,其毒性 是正常細(xì)胞的1000倍，并且能編碼可在動物模型誘導(dǎo)長效特異的抗腫瘤免疫的細(xì)胞 因子人類粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子。L2plasti n（網(wǎng)素是編碼肌動蛋白結(jié)合蛋白的一類基因，正常細(xì)胞中僅在成熟白細(xì)胞可見，存在于90%的上皮細(xì)胞癌而正常上皮 細(xì)胞中無表達(dá)，構(gòu)建L2plastin驅(qū)動CD表達(dá)條件腺病毒 Ad2Lp2CD,能增加52 FC轉(zhuǎn) 化為有毒性的52FU后對膀胱癌和卵巢癌細(xì)胞的抗癌敏感性。Midkine（M K肝素結(jié) 合細(xì)胞因子，是維甲酸反應(yīng)基因的產(chǎn)物，在多種腫瘤中過度表達(dá)（包括膀胱癌，而在正 常組織中低表達(dá)或

20、不表達(dá)。Terao等22發(fā)現(xiàn)以M K作啟動子的腺病毒Ad2M K2E1a能明顯抑制膀胱癌細(xì)胞的生長。Oct2 3/4在胚胎干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特異性表達(dá)，在轉(zhuǎn)移性膀胱癌的表達(dá)高于非轉(zhuǎn)移膀胱癌。Wu等23構(gòu)建E1B255kDa缺失腺病毒Ad.9OC,由Oct23/4反應(yīng)元件驅(qū)動，治療Oct23/4陽性轉(zhuǎn)移膀胱癌，能在轉(zhuǎn)移膀胱癌 誘導(dǎo)比起非轉(zhuǎn)移膀胱癌更強的細(xì)胞溶解，而在正常細(xì)胞中無毒性作用。由此可見Ad.9OC對Oct23/4表達(dá)陽性的腫瘤細(xì)胞有效果，尤其轉(zhuǎn)移膀胱癌是其良好的靶標(biāo)。三、增強腺病毒轉(zhuǎn)染效率的治療腺病毒感染細(xì)胞的過程是從腺病毒纖毛的頭節(jié)區(qū)黏附到細(xì)胞表面的特異性受體 （柯薩奇/腺病毒受體，C

21、AR開始的。CAR是Ad5的高親和力受體，在很多腫瘤中表達(dá) 較低，研究發(fā)現(xiàn)在膀胱癌細(xì)胞系，腺病毒與CAR的結(jié)合受損。有報道認(rèn)為很多人類 膀胱癌細(xì)胞系CAR的表達(dá)缺乏，是膀胱上皮細(xì)胞對腺病毒的感染效率低下的主要原 因，接著Sachs等24又進(jìn)一步證明了膀胱癌惡性程度越高 CAR的表達(dá)越低而av整 合素的表達(dá)越高。CAR屬于免疫球蛋白超家族成員的細(xì)胞間黏附分子，并且提出 CAR的表達(dá)降低減少細(xì)胞黏附，可能會增加腫瘤的轉(zhuǎn)移，與膀胱腫瘤的侵襲表型相 關(guān)。Matsumoto等25認(rèn)為CAR具有維持尿路上皮完整性和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的能 力,CAR的表達(dá)與腫瘤的生物惡性程度呈負(fù)相關(guān)，CAR的表達(dá)增加可以抑制腫瘤

22、的 生長。Pong等26行體內(nèi)外試驗證明組蛋白脫乙?；敢种苿┛s酚酸肽F K228與異丙氧黃酮和植物異黃酮、染料木黃酮、天然異黃酮能通過增加CAR啟動子基因組蛋白乙?；?，抑制組蛋白脫乙酰基酶活性來增加膀胱癌 CAR的表達(dá)及腺病毒的攝取 來增加重組腺病毒的轉(zhuǎn)染效率。Shieh等27發(fā)現(xiàn)鬼臼乙叉甙（Etoposide能增強 Ad2h TER T2CD對52FC在膀胱癌細(xì)胞的敏感性，而在正常細(xì)胞則不能，這與低氧誘 導(dǎo)因子（HIF21A的表達(dá)上調(diào)有關(guān),相反激活了正常細(xì)胞中p53和下調(diào)了啟動子的活 性Etoposide也通過增加膀胱癌和正常細(xì)胞 CAR的表達(dá)而增加病毒的復(fù)制。兩者聯(lián) 合應(yīng)用可抑制腫瘤生長

23、并延長生存期，誘導(dǎo)腫瘤完全消退并在75%的荷瘤小鼠產(chǎn)生 抗腫瘤免疫，增加CD4+和CD8+細(xì)胞的浸潤及腫瘤的壞死。治療間質(zhì)性膀胱炎的氧 氯苯磺酸也是較有效的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑。膀胱癌的高復(fù)發(fā)率和p16突變率使其成為p16基因治療的理想靶標(biāo)，然而腺病毒載體介導(dǎo)的p16基因治療的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低下使其療 效不佳。Lee等28發(fā)現(xiàn)丁酸鹽可通過增加細(xì)胞表面 CAR的表達(dá)顯著提高Ad2p16 的轉(zhuǎn)染效率，及對CAR表達(dá)較低的膀胱癌細(xì)胞抗瘤效應(yīng)。四、協(xié)同策略由于腺病毒轉(zhuǎn)染效率低、腫瘤特異性不明顯和多數(shù)化療藥物易出現(xiàn)耐受及不良 反應(yīng)，而有些化療藥物可以增加膀胱癌細(xì)胞 CAR的表達(dá),同時腺病毒基因治療又可 修正引起藥物耐受

24、的基因，剔除其影響因素，兩者的聯(lián)合應(yīng)用可增加療效。p53的突 變使細(xì)胞循環(huán)增加，程序性細(xì)胞死亡減少，降低化療藥物的敏感性。Pagliaro等29研 究發(fā)現(xiàn)Ad5CMV2p53與順鉑協(xié)同作用可增加后者的療效，降低耐受。Freunda等30 發(fā)現(xiàn)阿霉素、順鉑、絲裂霉素 C、甲氨喋呤可以增加T K2 GCV基因治療的效果。 趙國志等31報道溶瘤病毒增強絲裂霉素對膀胱癌 T224細(xì)胞的體內(nèi)外殺傷效果。 另外，多個腺病毒治療載體聯(lián)合應(yīng)用在膀胱癌基因治療中的研究也較多。五、總結(jié)腺病毒由于其諸多優(yōu)勢成為基因治療的首選載體，而其嗜上皮特性及膀胱與外 界相通這一解剖特點，使重組腺病毒在膀胱癌的基因治療研究倍受青

25、睞。近年來有 關(guān)重組腺病毒治療膀胱癌的研究層出不窮，也取得了一定的成果，但其中存在的問題 仍不容忽視。腺病毒轉(zhuǎn)染效率低及膀胱癌組織特異性不強始終是制約膀胱癌基因治 療進(jìn)展的瓶頸，而且目前多數(shù)研究還停留在試驗階段，還無法評價其確切的臨床療 效。Wakayama等32通過對腺病毒纖維頭結(jié)區(qū)進(jìn)行改造發(fā)現(xiàn)可以增加條件復(fù)制腺 病毒在CAR缺乏的膽管癌的復(fù)制及溶瘤效果，這對于腺病毒轉(zhuǎn)染效率低的膀胱癌或 許可以嘗試?？傊?，隨著人們對膀胱癌發(fā)病機制及其生物學(xué)特性的深入認(rèn)識，制約膀胱癌基因治療進(jìn)展的瓶頸有望突破。參考文獻(xiàn)1 Czerniak B,Chaturvedi V,Li L,et al.Superimpo

26、sed histologicand gen etic mapp ing of chromosome9 in progressi on of huma n urinary bladder neoplasia:implications for a genetic model ofmultistep urot helial carci nogen esis and early detect ion of uri2nary bladder cancerJ.Oncogene,1999,18(5:118521196. 2 Grim J,D AmicoA,Frizelle S,et al.Ade no vi

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29、ti no2 blastoma94produces rapid telomere erosi on, chromosomal crisis,a nd caspase2depe ndent apoptosis in bladder can cer and immortalized human urot helial cells but not in normal urot he2 lial cellsJ.CancerRes,2003,63(15:7602765.7 Irie A,Mat sumoto K,A nderegg B,et al.Growt h in hibiti on ef2 fic

30、acy of an ade no virus express ing dual t herapeutic gen es, wild2type p53,a nd an ti2erbB2ribozyme,aga inst huma n blad2 der cancer cellsJ.Ca ncer Gene Ther,2006,13(3:2982305.8 顧正勤，許傳亮，高旭，等.腺病毒介導(dǎo)hlL22基因轉(zhuǎn)染膀胱上皮的體內(nèi)研究J臨床泌尿外科雜志，2005,20(11:6952696. 9 Adam L,BlackPC,Kassouf W,et al.Ade noviral mediated in

31、2terfer on 2alpha2b gene t herapy suppresses t he pro2a ngioge nic effect of vascular en dot helial growt h factor in superficial blad2 der can cerJ.J Urol,2007,177(5:190021906.10 Akasaka S,Suzuki S,Shimizu H,et al.Suicide gene t herapy for chemically induced rat bladder tumor entailing instillation

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