煙草青枯病黑脛病綜合防治項(xiàng)目實(shí)施方案

1、“煙草青枯病和黑脛病綜合防治技術(shù)”項(xiàng)目實(shí)施方案一、研究?jī)?nèi)容和預(yù)期目標(biāo)1、研究?jī)?nèi)容：（1）鑒定煙草青枯病和黑脛病的致病小種，通過(guò)現(xiàn)代生物技術(shù)手段，開展早期檢測(cè)、監(jiān)測(cè)技術(shù)體系研究。 （2）結(jié)合氣象、土壤、品種、生物和生產(chǎn)方式等因素系統(tǒng)研究我市煙區(qū)煙草青枯病和黑脛病的發(fā)生條件、流行規(guī)律。（3）結(jié)合我市煙區(qū)現(xiàn)狀和生產(chǎn)習(xí)慣，研究有針對(duì)性的農(nóng)業(yè)防治措施，形成農(nóng)業(yè)防治技術(shù)規(guī)程,探索生物防治手段。2、預(yù)期目標(biāo)：（1）基本明確重慶煙區(qū)煙草青枯病和黑脛病發(fā)生、危害、流行的特點(diǎn)和規(guī)律。（2）初步明確重慶煙區(qū)煙草青枯病和黑脛病病原致病力分化和煙草青枯病生理小種，探索綜合防治手段。（3）初步建立早期快速檢測(cè)與監(jiān)測(cè)技術(shù)。

2、二、合作研究期限：2006年3月2006年12月三、試驗(yàn)研究地選擇1、室內(nèi)試驗(yàn)研究在西南大學(xué)植物生態(tài)病理研究所進(jìn)行。2、系統(tǒng)調(diào)查、樣品采集及綜合防治探索研究擬在酉陽(yáng)縣煙草種植區(qū)進(jìn)行。四、具體研究?jī)?nèi)容和實(shí)施方案（一）重慶煙區(qū)煙草青枯病和黑脛病發(fā)生、危害、流行的特點(diǎn)和規(guī)律研究。1、 調(diào)查地點(diǎn)：酉陽(yáng)縣煙草青枯病、黑脛病發(fā)生地區(qū)2、 研究方法：（1） 通過(guò)與當(dāng)?shù)責(zé)煵莨镜募夹g(shù)人員、煙農(nóng)座談和實(shí)地考察，了解當(dāng)?shù)赝寥罓顩r，品種特性，栽培措施（含病殘?bào)w處理），水肥管理等因素與兩病害的關(guān)系。（2） 通過(guò)縣煙草公司，從當(dāng)?shù)貧庀蟛块T獲?。囟?、濕度、降雨等）氣象資料，結(jié)合病害調(diào)查，基本明確煙草青枯病、黑脛病發(fā)生、

3、危害、流行與氣候條件之間的關(guān)系。（3） 定點(diǎn)調(diào)查：選擇有代表性的田塊（水田、旱地、品種等）定點(diǎn)觀察。從田間初始發(fā)病開始采用系統(tǒng)調(diào)查方法，每隔35天調(diào)查記載青枯病、黑脛病發(fā)生情況。將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為青枯病、黑脛病的季節(jié)流行曲線圖，分析病害隨著時(shí)間的推移所表現(xiàn)出來(lái)的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。找尋青枯病、黑脛病發(fā)生流行的主導(dǎo)因子。3、 人員安排：兩位大學(xué)生駐點(diǎn)系統(tǒng)調(diào)查與教師定期下點(diǎn)調(diào)查相結(jié)合。（二）煙草青枯病和黑脛病病原致病力分化和煙草青枯病生理小種研究。1、菌種標(biāo)樣采集點(diǎn)：主要在酉陽(yáng)縣發(fā)病地區(qū)以及其他煙區(qū)縣有代表性發(fā)病田。2、研究方法：（1） 采樣：在青枯病、黑脛病發(fā)生期，分多次、多縣、多點(diǎn)，選擇有代表性的發(fā)病田，

4、采集不同類型的病害標(biāo)本。冷凍保鮮條件下，無(wú)污染帶回實(shí)驗(yàn)室。（2） 病原菌分離：在室內(nèi)進(jìn)行病菌的分離、純化。獲得的菌種保存在冰箱和室溫條件下。（3） 菌種的致病性測(cè)定：在實(shí)驗(yàn)室，將分離獲得的所有菌株分別接種在煙草感病品種的健康植株上，調(diào)查其發(fā)病情況，確定各個(gè)菌株的致病性。（4） 病原菌致病力分化研究：在實(shí)驗(yàn)室，將有致病性的菌株分別接種在不同品種的健康煙草植株上，發(fā)病后，調(diào)查病害的發(fā)病率和病情指數(shù)，根據(jù)不同菌株在不同品種上的致病反應(yīng)，評(píng)價(jià)菌株的致病力。為監(jiān)測(cè)重慶地區(qū)青枯病、黑脛病菌致病力的變化以及品種的選擇奠定一點(diǎn)基礎(chǔ)。（5） 青枯病生理小種研究：選擇有代表性的20個(gè)以上菌株，接種到煙草青枯病菌生

5、理小種鑒別寄主（茄子、辣椒、馬鈴薯、番茄和花生等）上，根據(jù)致病程度和病情指數(shù)確定生理小種類型。將分離的青枯菌菌株分別接種到3糖3醇培養(yǎng)基上，根據(jù)其利用糖、醇的差異確定其生物型。初步了解重慶煙區(qū)病原菌小種的類型。為進(jìn)一步研究青枯病菌在煙區(qū)的其他寄主打下基礎(chǔ)。（三）探索青枯病的快速檢測(cè)技術(shù)和方法1、血清學(xué)方法：將分離純化并經(jīng)致病性測(cè)定的青枯病菌強(qiáng)毒株，免疫注射雄性健康家兔，制備抗血清。以其它土壤細(xì)菌菌株為對(duì)照，純化血清；根據(jù)免疫反應(yīng)，確定其特異性。2、分子生物學(xué)方法：從genebank database中獲得的煙草青枯病菌 (r.solanacearum)的鞭毛亞基基因flic的序列,根據(jù)該序列合

6、成1對(duì)特異寡聚核苷酸引物：forward 5_-gaacgccaacggtgcgaact-3_ reverse5_-ggcggccttcagggaggtc-3_以其它土壤細(xì)菌菌株為對(duì)照，對(duì)采集分離得到的煙草青枯病菌菌株進(jìn)行特異擴(kuò)增試驗(yàn)。在室內(nèi)分別對(duì)以上兩種方法進(jìn)行試驗(yàn)研究，并對(duì)比兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，初步探索快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)該病菌的技術(shù)和方法，為后續(xù)試劑盒的研制奠定基礎(chǔ)。（四）綜合防治技術(shù)研究1、 大田示范地點(diǎn)：在酉陽(yáng)縣青枯病、黑脛病發(fā)生地區(qū)選擇不同發(fā)病煙田和無(wú)病田5-10畝，探索青枯病、黑脛病的綜合防治措施。2、 試驗(yàn)示范田要求：（1） 如有可能，分別選取去年發(fā)病率為5%、10%、20%的病田作為

7、實(shí)驗(yàn)地；（2） 能避開山洪、大水的沖刷；（3） 不是積水地，開溝排水方便；（4） 方便管理。3、 煙苗要求：漂浮育苗，無(wú)病健苗。4、 示范比較措施：（1） 頭年煙葉收獲后及時(shí)清除病殘?bào)w的田地，與未清除病殘?bào)w的田地對(duì)發(fā)病的影響；（2） 對(duì)排水不暢，易積水，濕度大的田塊，起壟提埂，開好四周排水溝，增加橫溝數(shù)量，防止田間積水，與傳統(tǒng)方式開溝對(duì)發(fā)病的影響；（3） 經(jīng)常檢查病情，發(fā)現(xiàn)病株立即開展防治： 發(fā)現(xiàn)青枯病零星病株及時(shí)拔除，帶出田集中銷毀；向病窩土壤施用生石灰200克300克；全田開始藥劑灌根防治3-4次。在整個(gè)生長(zhǎng)期，發(fā)現(xiàn)病株帶出田集中銷毀。藥劑待定。 發(fā)現(xiàn)黑脛病零星病株，全田開始藥劑淋根防治2

8、-3次。藥劑待定。（4）收獲前，調(diào)查統(tǒng)計(jì)最終發(fā)病率。收獲后及時(shí)清除病殘?bào)w。為明年田間試驗(yàn)作好準(zhǔn)備。5、 探索生物防治手段：從煙田土壤中、煙草植株內(nèi)外，分離對(duì)青枯病、黑脛病具有拮抗作用的附生細(xì)菌或內(nèi)生細(xì)菌，進(jìn)行平板測(cè)試，篩選出有利用價(jià)值的生防菌；在實(shí)驗(yàn)室做初步控病測(cè)定。五、進(jìn)度安排2006.3-4月：制定試驗(yàn)計(jì)劃，安排課題組人員作好前期準(zhǔn)備，開始預(yù)備試驗(yàn)工作，實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)試驗(yàn)煙草苗；到酉陽(yáng)縣與煙草公司人員商定試驗(yàn)，安排試驗(yàn)地及學(xué)生駐點(diǎn)事宜。2006.4-8月 采用定點(diǎn)調(diào)查與普查相結(jié)合的方式，對(duì)酉陽(yáng)縣青枯病、煙草黑脛病病害的危害程度、分布情況、影響因素等做較為全面的調(diào)查，基本明確青枯病、黑脛病的危害情況、發(fā)生條件和流行規(guī)律。對(duì)病原菌加以分離，鑒定重慶地區(qū)煙草青枯病、黑脛病的致病力