正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選金花茶種子總多酚的最佳提取工藝

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選金花茶種子總多酚的最佳提取工藝（作者：?jiǎn)挝唬亨]編：）作者：唐前，羅燕英，唐玲，黃連冬，于大永，馮寶民，王 永奇【摘要】 目的優(yōu)選金花茶種子中總多酚的提取工藝。方法采用丙酮-水法從金花茶種子中提取總多酚，利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選總多酚最佳提取 工藝，考察丙酮濃度、時(shí)間、溫度、提取次數(shù)及料液比對(duì)總多酚收率 的影響。結(jié)果總多酚的最佳提取工藝為：25倍量的50%酮-水, 80C， 提取3次，4 h/次，總多酚含量為9.59%,總多酚的收率為1.71%。 結(jié)論丙酮-水提取法可用于金花茶種子中總多酚的提取，其中提取溶 劑倍量和提取溫度對(duì)總多酚提取的影響較大?！娟P(guān)鍵詞

2、】金花茶種子；總多酚；提取工藝；正交實(shí)驗(yàn)Abstract : ObjectiveTo optimize the tech no logy for extracti on of total polyphe nol from Theopsis chrysa ntha Hu. Seeds.MethodsThe seeds was extracted using acet on e-aqueous, and the extract rate of totalpolyphenol was studied by orthog onal test, and the effects of solve nt c

3、oncen tratio n ofextracti on, time of extractio n, temperature of extracti on, nu mber times of extracti on, solve nt times of extracti on were inv estigated.ResultsThe optimum extracti on tech no logy was as follows: 25 times 50% acet on e-aqueous, extract ing 3 times at 80 C for 4h on ce. By this

4、tech no logy the extracti on rate of total polyphenol was 1.71% and the content of total polyphenol was 9.59%. Con clusi on This method can be applied the extracti on of totalpolyphenol in Theopsis chrysantha Hu. Seeds. Theextract ing solve nt times and temperature of extracti on show objective effe

5、cts.Key words: Theopsis chrysantha Hu.seeds; Total polyphenol; Extract ing tech no logy; Orthogo nal test金花茶Theopsis chrysantha Hu是山茶科山茶屬金花茶組植物， 有32個(gè)種5個(gè)變種。金花茶在我國(guó)僅分布于廣西的南部和西南部。 廣西成為目前已知的金花茶現(xiàn)代分布中心，被譽(yù)為金花茶的故鄉(xiāng)1。金花茶種子中所含多元酚類化合物，主要包括兒茶素類物質(zhì)、黃 酮類和沒(méi)食子酸等。多酚類物質(zhì)是一類具有獨(dú)特生理活性和藥理活性 的天然產(chǎn)物，在抗誘變、抗腫瘤、抗病毒、抗微生物、抗衰老、抗氧 化等很

6、多方面具有良好的作用2,3。我們前期的研究表明，金花茶種子中的多酚類成分具有抗激素依賴性腫瘤的作用，如：孚L腺癌、前列腺癌、宮頸癌等。故在單因素研究的基礎(chǔ)上，以金花茶種子中總多酚收率為指標(biāo)，利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選了總多酚的提取工藝?，F(xiàn)報(bào)道如下。1儀器與試藥1.1儀器unico 7200可見(jiàn)分光光度計(jì)（尤尼柯上海儀器有限公司）;Laborata4000 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Heidolph 公司）;BP210S十萬(wàn)分之一電子天平（Sartorius 公司）;水浴鍋HH-4（國(guó)華電器有限公司）;真 空干燥箱DZF-6021型（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;循環(huán)水式真空 泵SHZ-D（鞏義市英峪圣華儀器廠）。1.

7、2 試藥 金花茶種子 Theopsis chrysantha Hu.Seeds 于2008-10月采集于廣西省南寧市金花茶公園，鑒定人：廣西林業(yè)科學(xué) 研究院高級(jí)工程師梁盛業(yè)；對(duì)照品（沒(méi)食子酸 中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：120563-200412，純度99.1%），其余試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1總多酚的測(cè)定42.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取干燥至恒重的沒(méi)食子酸對(duì)照品10 mg,置100 ml棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖勻，精 密量取25 ml,置100 ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得 濃度為0.025 mg ml- 1的對(duì)照品溶液；精確吸取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0，0

8、.5 ，1.0 ，1.5 ，2.0和2.5 ml分別置10 ml棕色容量瓶中，各加水至5 ml,再分別加入磷鉬鎢酸試液1 ml,用29% Na2CO3 溶液稀釋至刻度，搖勻，以相應(yīng)的試劑為空白，30 min 后，在754 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A。以吸光度A為縱坐標(biāo)，體積V（ml）為橫 坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程 A=0.353 2V-0.029 2(R2=0.9991)。2.1.2樣品溶液的測(cè)定準(zhǔn)確稱取10.0 g金花茶種子，粉碎，與500 ml的圓底燒瓶中，按實(shí)驗(yàn)設(shè)置的處理?xiàng)l件提取，回收溶劑后真 空干燥，準(zhǔn)確稱取干燥粉末50 mg用水溶解，定溶至50 ml的容量瓶 中，搖勻，精密量取5

9、ml置于25 ml的棕色容量瓶中，搖勻，準(zhǔn)確取2 ml于棕色容量瓶中，照“ 2.1.1 ”項(xiàng)下自“各加水”后同法測(cè)定吸 光度，帶入回歸方程中計(jì)算總多酚的含量，并計(jì)算總多酚的收率?？?多酚收率(%)=提取液中總多酚質(zhì)量/金花茶種子質(zhì)量x 100%2.2單因素實(shí)驗(yàn)5，62.2.1提取溶劑的濃度對(duì)總多酚收率的影響在恒定浸提時(shí)間為3h、浸提溫度為100C、提取次數(shù)為1次、料液比為1 : 15的條件下， 分設(shè)40% 50% 60% 70%共4個(gè)提取濃度進(jìn)行提取，計(jì)算金花茶種 子中總多酚的收率。結(jié)果如圖1所示，隨著丙酮濃度的增加，總多酚 的收率增加，當(dāng)丙酮濃度為55%寸總多酚的收率最高，但隨著丙酮濃 度的

10、繼續(xù)增加，總多酚的收率明顯降低，可能是由于55%酮水溶液對(duì)總多酚溶解性能好、對(duì)原料的溶脹系數(shù)高的原因。故選提取溶劑為55%酮-水。2.2.2料液比對(duì)總多酚收率的影響在恒定浸提時(shí)間為3h、浸提溫度為100C、浸提次數(shù)為1次、提取溶劑為55%酮-水的 條件下，分設(shè)1 ： 10，1 ： 15，1 ： 20，1 : 25 (W/V)共4個(gè)溶劑倍量 進(jìn)行提取，計(jì)算總多酚的收率，結(jié)果如圖 2。由圖2可知，總多酚的 收率在料液比為1 : 20時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，故選定料液比為1 : 20。223提取溫度對(duì)總多酚收率的影響在恒定提取時(shí)間為3 h，提取次數(shù)為1次、料液比為1 : 20、提取溶劑為55航酮-水的條件下，

11、 分設(shè)50, 60, 70, 80, 90，100C ,6個(gè)溫度點(diǎn)進(jìn)行提取，計(jì)算總多酚 的收率，結(jié)果如圖3。由圖3可知，總多酚收率隨提取溫度的升高而 增大，但溫度高于75C，總多酚含量明顯下降。因此，選定75C為最佳提取溫度。2.2.4提取時(shí)間對(duì)總多酚收率的影響在恒定浸提溫度為75 C、提取次數(shù)為1次、料液比為1 : 20、提取溶劑為55%酮-水的條件下， 分設(shè)1，2, 3，3.5，4，5 h,共6個(gè)提取時(shí)間，計(jì)算總多酚的收率。 從圖4可以看出，提取時(shí)間為3.5h的時(shí)候總多酚收率最高，隨著提 取時(shí)間的延長(zhǎng)，總多酚的收率基本不變，故選定 3.5 h為最佳提取時(shí) 間。圖4提取時(shí)間對(duì)總多酚收率的影響

12、2.2.5浸提次數(shù)對(duì)總多酚收率的影響在恒定浸提時(shí)間為3.5 h、浸提溫度為75C、料液比為1 : 20、提取溶劑為55%酮-水的條件 下，分設(shè)1次，2次，3次，4次,共4個(gè)提取次數(shù)進(jìn)行提取，計(jì)算總 多酚的收率，結(jié)果見(jiàn)圖5。由圖5可知，提取3次即可將總多酚提取 完全。故設(shè)定提取次數(shù)為3次。圖5浸提次數(shù)對(duì)總多酚收率的影響2.3正交實(shí)驗(yàn)考察采用 L9(34)正交表考察最佳工藝條件。多酚 含量測(cè)定及總多酚收率計(jì)算同“ 2.1.2 ”項(xiàng)。正交實(shí)驗(yàn)因素水平安排見(jiàn)表1,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。表1因素水平3結(jié)論分析可知，各因素的影響依次為D二CAB,即提取溶劑倍量二提取溫度提取溶劑濃度提取時(shí)間，所以最佳工藝組合為

13、A1B3C3D3即25 倍量的50%酮-水，80C,提取3次，4 h/次，總多酚含量為9.59%, 總多酚的收率為1.71%。其中提取溶劑倍量和提取溫度對(duì)總多酚提取 的影響較大?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1梁盛業(yè)，陸敏珠,黃連冬，等.中國(guó)金花茶栽培與開(kāi)發(fā)利用M.北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2005: 3.2 Khan N, Mukhtar H.Tea polyphenols for healthpromtionJ丄 ife Sciences, 2007, 81 :519.3 Chandra Mohan K V P, Gunasekaran P, VaralakshmiE,et al.In vitro evaluation of the anticancer effect of lacto-fe rrin and tea polyphe nol comb in atio n on oral