分析方法驗證ppt課件

1、Validation of Analytical Method分析方法驗證分析方法驗證內(nèi)容內(nèi)容分析方法驗證的法規(guī)要求ICH、USP、ChP和EP中的方法驗證分析方法驗證的要求分析方法驗證步驟分析方法驗證勝利的前提分析方法驗證留意要點(diǎn)含量分析方法驗證接受規(guī)范方法確認(rèn)和方法傳送分析方法驗證的法規(guī)要求分析方法驗證的法規(guī)要求 中國GMP2020、中國藥典非常關(guān)注驗證的過程, 分析方法驗證不完善是常見的問題。 藥質(zhì)量量規(guī)范中分析方法必需驗證 藥物消費(fèi)工藝變卦、制劑的組分變卦、原分析方法進(jìn)展修訂時，那么質(zhì)量規(guī)范分析方法必需進(jìn)展驗證。 ICH Q2R1 Validation of Analytical Pr

2、ocedures EU GMP Volume 4 Analytical method shall be validated, all testing operations described in the marketing authorisation should be carried out according to the approved method. FDA cGMP 21 CFR 211. Test method, which are used for assessing compliance of pharmaceutical articles with established

3、 specifications, must meet proper standards of accuracy and reliability.分析方法驗證的法規(guī)要求分析方法驗證的法規(guī)要求 中國GMP2020對分析方法驗證規(guī)定： 符合以下情形之一的，應(yīng)對檢驗方法進(jìn)展驗證： 采用新的檢驗方法 檢驗方法需變卦的 采用中國藥典未收載的檢驗方法 法規(guī)規(guī)定的其他需求驗證的檢驗方法 對不需求進(jìn)展驗證的檢驗方法，企業(yè)應(yīng)進(jìn)展方法確認(rèn)，以保證檢驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠 2021版藥典中分析方法驗證指點(diǎn)原那么附錄XIX A只規(guī)定了工程和根本方法而沒有合格規(guī)范, ICH 和USP 類似ICH、USP、CP和和EP中的方法驗

4、證中的方法驗證 ICH Q2R1：Validation of analytical Procedures: Text and Methodology - 2005/11ICH Q2A： Text on Validation of Analytical Procedure Parent Guideline - 1994/10ICH Q2B: Validation of Analytical Procedures: Methodology Developed to complement the Parent guideline - 1996/11 USP Validation of Compend

5、ial Procedures 中國藥典附錄XIX A 藥質(zhì)量量規(guī)范分析方法驗證指點(diǎn)原那么 European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare PA/PH/OMCL 05 47 DEF Validation of Analytical Procedures 2005/06分析方法驗證的要求分析方法驗證的要求 目的：證明所用的分析方法適宜于相應(yīng)的目的：證明所用的分析方法適宜于相應(yīng)的檢測要求檢測要求 需驗證的分析工程需驗證的分析工程 鑒別實驗鑒別實驗 雜質(zhì)定量或限制檢查，原料或制劑中有效雜質(zhì)定量或限制檢查，原料或制劑中

6、有效成分含量測定成分含量測定 制劑中其它成分降解產(chǎn)物、防腐劑的制劑中其它成分降解產(chǎn)物、防腐劑的測定測定 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法的測試方法分析方法驗證的要求分析方法驗證的要求 驗證內(nèi)容： 準(zhǔn)確度 精細(xì)度反復(fù)性、中間精細(xì)度和重現(xiàn)性 專屬性 檢測限 定量限 線性 范圍 耐用性準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 Accuracy準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用回收率%表示。測定回收率R recovery的詳細(xì)方法可采用“回收實驗法和“加樣回收實驗法。數(shù)據(jù)要求：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。

7、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 Accuracy 回收實驗 空白+量A的對照品測定, 測定值為M 加樣回收實驗 已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實樣品+量A的對照品或規(guī)范品測定，測定值為M%100AMR空白回收率%100APMR準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 Accuracy含量測定方法的準(zhǔn)確度原料藥可用純度的對照品或樣品進(jìn)展測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)展比較制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)展測定，即采用在空白輔料中參與原料藥對照品的方法；如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中參與量的被測物進(jìn)展測定，或與另一個已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果精細(xì)度精細(xì)度 Precision精細(xì)度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣

8、品，經(jīng)屢次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏向d、規(guī)范偏向SD、相對規(guī)范偏向RSD變異系數(shù)，CV表示偏向d：丈量值與平均值之差規(guī)范偏向SD：相對規(guī)范偏向RSD：xxdi1)(2nxxSDi%100 xSDRSD精細(xì)度精細(xì)度 Precision 反復(fù)性repeatability：在一樣條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精細(xì)度； 在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次 把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進(jìn)展評價 中間精細(xì)度Intermediate Precision：同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精細(xì)度 三人三機(jī) 重現(xiàn)性reprodu

9、cibility：不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精細(xì)度 數(shù)據(jù)要求：需報告SD，RSD和置信區(qū)間。專屬性專屬性 Specificity專屬性指有其他成分雜質(zhì)、降解物、輔料等能夠存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定才干，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時能否遭到相互關(guān)擾程度的度量通常是經(jīng)過分析含有加了雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或撫慰劑成分的樣品，將所獲分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測試結(jié)果進(jìn)展比較，兩組測試結(jié)果之差即專屬性專屬性專屬性 Specificity鑒別反響-應(yīng)能與能夠共存的物質(zhì)或構(gòu)造類似化合物區(qū)別，不含被分析的樣品，以及構(gòu)造類似或組

10、分中的有關(guān)化合物，均應(yīng)呈負(fù)反響含量測定和雜質(zhì)測定-色譜法和其他方法，應(yīng)附代表性圖譜，亦闡明專屬性。圖中應(yīng)標(biāo)明各組份的位置，色譜法中的分別度應(yīng)符合要求雜質(zhì)可獲得的情況下，對于含量測定，試樣中可參與雜質(zhì)或輔料，調(diào)查測試結(jié)果能否受干擾；對于雜質(zhì)測定，也可向試樣中參與一定量的雜質(zhì)，調(diào)查雜質(zhì)間能否得到分別；反之那么需用其他方法進(jìn)展比較。色譜峰純度實驗二極管陣列，質(zhì)譜檢測限檢測限 Detection Limit, LOD檢測限是指試樣在確定的實驗條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。它是限制檢驗效能目的，無需定量測定，只需指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。非儀器分析目視法： 用濃度的被測物，實驗出能被可靠

11、地檢測出的最低濃度或量信噪比法: 用于能顯示基線噪音的分析方法儀器分析方法，是把低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)展比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。普通以信噪比3 1或2 1時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限規(guī)范差法：測定背景10次以上，求出規(guī)范差b；將b乘以三倍；在任務(wù)曲線上求出3b相對應(yīng)的濃度Xb；即為檢出限；將求得的對應(yīng)濃度值加上空白值空白值為0那么不加即得檢出限。定量限定量限 Quantitation Limit, LOQ定量限是指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精細(xì)度要求非儀器分析目視法： 用濃度的被測物，實驗出能被可靠地檢測出的符合準(zhǔn)確度

12、和精細(xì)度要求的最低濃度或量信噪比法：普通以信噪比S/N為10 1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)展確定，也可用儀器所測空白背景呼應(yīng)規(guī)范差SD的10倍為估計值，再經(jīng)實驗確定方法的實踐測定下限線性線性 Linearity線性是指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性在分析方法的范圍內(nèi)進(jìn)展評價。線性關(guān)系應(yīng)以信號對被分析物的濃度或含量作圖，根據(jù)圖形能否呈線性進(jìn)展評價，再用最小二乘法處置數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率Slope來表示。必要時可對呼應(yīng)信號進(jìn)展數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換。數(shù)據(jù)要求：至少需求五個濃度調(diào)查線形，需提供相關(guān)系數(shù)、y截距是檢定的能夠偏向、回歸斜率及方差等參數(shù)，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖

13、范圍范圍 Range范圍是指到達(dá)一定精細(xì)度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的詳細(xì)運(yùn)用和線性、準(zhǔn)確度、精細(xì)度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測定范圍為80%-120%；制劑含量均勻度范圍為70%-130%；雜質(zhì)測定應(yīng)為被測雜質(zhì)報告值到限制的120%；溶出度應(yīng)為測定范圍的20%，如規(guī)定了限制范圍，應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%，例如緩釋片1h70%, 那么驗證范圍定為0-90%。耐用性耐用性 Robustness耐用性又稱粗放度，是指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的接受程度，為常規(guī)檢驗提供根據(jù)。是衡量實驗室和任務(wù)人員之間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)

14、性的尺度; 假設(shè)方法易遭到分析條件的影響，或要求苛刻，應(yīng)注明。典型的變動包括：分析溶液的穩(wěn)定性用不同時間段的樣品和規(guī)范品溶液與新制的規(guī)范品溶液的對比結(jié)果來分析溶液的穩(wěn)定性提取時間耐用性耐用性 Robustness液相色譜的典型變動：流動相PH0.5流動相組成有機(jī)相5%色譜柱同一廠家的三個批號，或兩個不同廠家同固定相和填充物，尺寸溫度20-25C和流速10%檢測波長5nm氣相色譜的典型變動：色譜柱同一廠家的三個批號，或兩個不同廠家同固定相和填充物，尺寸溫度流速檢驗工程和驗證內(nèi)容總結(jié)檢驗工程和驗證內(nèi)容總結(jié)中國藥典要求鑒別鑒別雜質(zhì)定雜質(zhì)定量測定量測定雜質(zhì)限雜質(zhì)限度測定度測定含量含量溶出度溶出度等等準(zhǔn)

15、確度準(zhǔn)確度XOXOO精細(xì)度精細(xì)度-反復(fù)反復(fù)性性XOXOO精細(xì)度精細(xì)度-中間中間精細(xì)度精細(xì)度XOXOO專屬性專屬性O(shè)OOOO檢測限檢測限XXOXX定量限定量限XOXXX線性線性XOXOO范圍范圍XOXOO耐用性耐用性O(shè)OOOO中國藥典檢驗工程和驗證內(nèi)容總結(jié)檢驗工程和驗證內(nèi)容總結(jié)鑒別鑒別Cat IV雜質(zhì)定雜質(zhì)定量測定量測定Cat II雜質(zhì)限雜質(zhì)限度測定度測定Cat II含量含量Cat I溶出度溶出度等等Cat III準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度XO*O*精細(xì)度精細(xì)度XOXOO專屬性專屬性O(shè)OOO*檢測限檢測限XXOX*定量限定量限XOXX*線性線性XOXO*范圍范圍XO*O*USP注：* 根據(jù)詳細(xì)情況予以驗證分析

16、方法驗證步驟分析方法驗證步驟預(yù)驗證驗證方案的制定驗證目的、背景設(shè)備設(shè)備、試劑、對照品、樣品信息待驗證的方法、工程、可接受規(guī)范施行人員及培訓(xùn)參考文獻(xiàn)驗證的施行搜集完好的驗證過程記錄和原始圖譜數(shù)據(jù)和記錄復(fù)核驗證結(jié)果評價驗證報告根據(jù)驗證報告制定檢驗規(guī)范分析方法驗證勝利的前提分析方法驗證勝利的前提1經(jīng)過培訓(xùn)的驗證明施人員2儀器曾閱歷證確認(rèn)、校準(zhǔn)并在校準(zhǔn)有效期內(nèi)3可靠穩(wěn)定的對照品建議運(yùn)用法定機(jī)構(gòu)提供的可靠穩(wěn)定的實驗試劑分析方法驗證留意要點(diǎn)分析方法驗證留意要點(diǎn)預(yù)驗證預(yù)驗證是指在正式驗證前進(jìn)展的實驗，目的是搜集證據(jù)，以初步證明該檢驗方法可以到達(dá)預(yù)期要求，同時確定各個工程的可接受規(guī)范。空白樣空白樣是指根據(jù)樣品

17、的特性、配方和工藝過程，制備除了不含被測物外其他組成與樣品完全一致的模擬樣品。取樣效率取樣效率僅用于清潔驗證所用檢驗方法的驗證，是指用棉簽或特定溶劑從設(shè)備外表獲取的被測物的量與設(shè)備外表被測物的實踐含量接近的程度，以回收率%表示。含量測定方法驗證的可接受規(guī)范含量測定方法驗證的可接受規(guī)范 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度各濃度下的平均回收率均應(yīng)在各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間之間9個回收率數(shù)據(jù)的相對規(guī)范差個回收率數(shù)據(jù)的相對規(guī)范差RSD應(yīng)應(yīng)不大于不大于2.0%。 精細(xì)度精細(xì)度1反復(fù)性：反復(fù)性：6份供試液含量的相對規(guī)范差應(yīng)不大份供試液含量的相對規(guī)范差應(yīng)不大于于2.0%。2中間精細(xì)度：中間精細(xì)度：1

18、2個含量數(shù)據(jù)的相對規(guī)范差應(yīng)不個含量數(shù)據(jù)的相對規(guī)范差應(yīng)不大于大于2.0%。 專屬性專屬性空白對照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完空白對照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分別，分別度不得小于全分別，分別度不得小于2.0。 檢測限檢測限主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。 定量限定量限主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于主峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。含量測定方法驗證的可接受規(guī)范含量測定方法驗證的可接受規(guī)范 線性線性回歸線的相關(guān)系數(shù)回歸線的相關(guān)系數(shù)R不得小于不得小于0.998，Y軸截距軸截距應(yīng)在應(yīng)在100呼應(yīng)值的呼應(yīng)值的2以內(nèi)，呼應(yīng)因子的相對規(guī)以內(nèi)，呼

19、應(yīng)因子的相對規(guī)范差應(yīng)不大于范差應(yīng)不大于2.0%。 耐用性耐用性主峰的拖尾因子不得大于主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必需，主峰與雜質(zhì)峰必需到達(dá)基線分別；各條件下的含量數(shù)據(jù)到達(dá)基線分別；各條件下的含量數(shù)據(jù)n=6的相的相對規(guī)范差應(yīng)不大于對規(guī)范差應(yīng)不大于2.0%。 系統(tǒng)順應(yīng)性系統(tǒng)順應(yīng)性主峰峰面積的相對規(guī)范差應(yīng)不大于主峰峰面積的相對規(guī)范差應(yīng)不大于2.0%，主峰保，主峰保管時間的相對規(guī)范差應(yīng)不大于管時間的相對規(guī)范差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰。另外，主峰的拖尾因子不得大于的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必需到達(dá)，主峰與雜質(zhì)峰必需到達(dá)基線分別，主峰的實際塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量規(guī)范的基線分別，主峰

20、的實際塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量規(guī)范的規(guī)定。規(guī)定。分析方法確認(rèn)分析方法確認(rèn)方法確認(rèn)是一種簡化了的方法驗證，目的是為了確認(rèn)藥典方法或其他曾閱歷證的方法能否適用于實踐運(yùn)用環(huán)境。各國藥典和行業(yè)法規(guī)收載的檢驗方法從外部引入的曾閱歷證的檢驗方法以往老產(chǎn)品的檢驗方法，原廠無力或無法進(jìn)展方法傳送方法確認(rèn)普通應(yīng)進(jìn)展準(zhǔn)確度、反復(fù)性、專屬性測試。USP Verification of Compendial Procedures分析方法傳送分析方法傳送分析方法傳送轉(zhuǎn)移是指一方將曾閱歷證的方法傳送轉(zhuǎn)移給另一方的過程。方法傳送主要進(jìn)展不同實驗室在一定時限內(nèi)對同一份樣品的重現(xiàn)性測試的結(jié)果比對。微生物分析方法驗證微生物分析方法驗證微生物方法驗證內(nèi)容：無菌制劑微生物檢測方法驗證非無菌制劑微生物檢測方法驗證防腐劑