紫外可見分光光度法測定水楊酸的含量

1、紫外可見分光光度法測定水楊酸的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解紫外可見分光光度計(jì)的性能、結(jié)構(gòu)及其使用方法。2、掌握紫外可見分光光度法定性、定量分析的基本原理和實(shí)驗(yàn)技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理紫外-可見光譜是用紫外 -可見光測獲的物質(zhì)電子光譜， 它研究產(chǎn)生于價電子在電子能級間的躍遷，研究物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)的分子吸收光譜。當(dāng)不同波長的單色光通過被分析的物質(zhì)時能測得不同波長下的吸光度或透光率，以 abs為縱坐標(biāo)對橫坐標(biāo)波長 作圖，可獲得物質(zhì)的吸收光譜曲線。一般紫外光區(qū)為190-400nm ，可見光區(qū)為 400-800nm 。紫外吸收光譜的定性分析為化合物的定性分析提供了信息依據(jù)。由于分子結(jié)構(gòu)不同但只要具有相同的生色

2、團(tuán)，它們的最大吸收波長值就相同。因此，通過對末知化合物的掃描光譜、 最大吸收波長值與已知化合物的標(biāo)準(zhǔn)光譜圖在相同溶劑和測量條件下進(jìn)行比較，就可獲得基礎(chǔ)鑒定。利用紫外吸收光譜進(jìn)行定量分析時，必須選擇合適的測定波長。 苯甲酸和水楊酸的紫外吸收光譜如圖1 所示。圖 1 苯甲酸與水楊酸紫外吸收光譜圖1-苯甲酸； 2-水楊酸水楊酸在波長 300 nm處有吸收峰， 而苯甲酸此處無吸收， 在波長 230 nm兩組吸收峰重疊， 為了避開其干擾， 選用 300 nm 波長作為測定水楊酸的工作波長。由于乙醇在 250350nm 無吸收干擾，因此可用60%乙醇為參比溶液。三、儀器與試劑1儀器紫外可見分光光度計(jì)（ u

3、vwin 5 ，北京普析通用儀器有限公司） ；容量瓶100ml 1 個、50ml 5 個；刻度吸量管1ml、2ml、5ml 各 1 支 。2試劑水楊酸對照品（分析純） ；60% 乙醇溶液（自制）。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備： 準(zhǔn)確稱取 0.0500 g水楊酸置于 100 ml 燒杯中，用 60%乙醇溶解后，轉(zhuǎn)移到100 ml 容量瓶中，以 60%乙醇稀釋至刻度，搖勻。此溶液濃度為 0.5mg ml-1。2、將五個 50ml 容量瓶按 1-5 依次編號。分別移取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml 于相應(yīng)編號容量瓶中，各加入60%乙醇溶液，稀釋至刻度，搖勻。3、

4、用 1 cm石英吸收池、，以 60%乙醇作為參比溶液，在200350 nm 波長范圍內(nèi)測定一份水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的紫外吸收光譜，確定最大吸收波長。4、在選定波長下，以60%乙醇為參比溶液，由低濃度到高濃度測定水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列及未知液的吸光度。以水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 根據(jù)水楊酸試液的吸光度， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算水楊酸試樣中水楊酸的含量。表 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制定及未知試樣濃度檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度： 0.5mg ml-1編號移取標(biāo)準(zhǔn)溶液體積 （ml） 溶液濃度（ g ml-1）吸光度（ a）空白0 0 0 標(biāo) 1 0.5 5 標(biāo) 2 1 10 標(biāo) 3 2 20 標(biāo) 4 3 30 標(biāo) 5 4 40 未知濃度溶液編號未知溶液的吸光度（ a）溶液濃度（ g ml-1）未知液五、數(shù)據(jù)處理1、根據(jù)某一濃度下的全波長掃描圖，確定最佳吸收波長。2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算工作曲線方程及r2值。3、計(jì)算未知樣中水楊酸的濃度。六、注意事項(xiàng)1、配制樣品前要將所使用的玻璃儀器清洗干凈。2、移取標(biāo)準(zhǔn)溶液之前要潤洗移液管。3、測量前用待測液潤洗比色皿，測量由低濃度到高濃度依次進(jìn)行。思考題1、綜述紫外吸收光譜分析的基本原理。2、歸納影響紫外光譜定性