基因轉(zhuǎn)染技術(shù)及其應(yīng)用簡介PPT學(xué)習(xí)教案_第1頁
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1、會計學(xué)1基因轉(zhuǎn)染技術(shù)及其應(yīng)用簡介基因轉(zhuǎn)染技術(shù)及其應(yīng)用簡介第1頁/共50頁一、基因轉(zhuǎn)染簡介一、基因轉(zhuǎn)染簡介第2頁/共50頁第3頁/共50頁第4頁/共50頁第5頁/共50頁A.限制酶切除限制酶切除 a.從原核基因組DNA制備視原核基因組物理圖譜已知或未知，克隆方法不同。 b. 從真核基因組從真核基因組DNA制備制備 c.從已克隆的從已克隆的DNA片段制備片段制備第6頁/共50頁第7頁/共50頁第8頁/共50頁第9頁/共50頁第10頁/共50頁第11頁/共50頁第12頁/共50頁粘端連接方法要點粘端連接方法要點平端連接方法要點平端連接方法要點單酶單切點單酶單切點 防自身環(huán)化，希望防自身環(huán)化，希望定向

2、插入；定向插入；雙酶雙切點雙酶雙切點 定向克隆，構(gòu)建表定向克隆，構(gòu)建表達載體的最好用此法；達載體的最好用此法；利用同裂解酶產(chǎn)生相同粘端。利用同裂解酶產(chǎn)生相同粘端。平端，平端連接；平端，平端連接；Linker連接酶切產(chǎn)生粘端連接；連接酶切產(chǎn)生粘端連接；Adaptor銜接目的基因和載體；銜接目的基因和載體；同源同聚尾同源同聚尾，克隆，克隆cDNA的最好方法的最好方法T載體，載體，PCR產(chǎn)物產(chǎn)物T/A克隆法連接?？寺》ㄟB接。第13頁/共50頁第14頁/共50頁第15頁/共50頁(二二)基因轉(zhuǎn)染真核細胞的基本方法基因轉(zhuǎn)染真核細胞的基本方法第16頁/共50頁第17頁/共50頁第18頁/共50頁第19頁/

3、共50頁第20頁/共50頁第21頁/共50頁第22頁/共50頁第23頁/共50頁第24頁/共50頁第25頁/共50頁第26頁/共50頁第27頁/共50頁第28頁/共50頁第29頁/共50頁第30頁/共50頁第31頁/共50頁第32頁/共50頁第33頁/共50頁第34頁/共50頁第35頁/共50頁37第36頁/共50頁第37頁/共50頁第38頁/共50頁第39頁/共50頁Double-stranded RNAinjectC. elegansNeg. control UninjectedAntisense RNA dsRNAsenseantisenseNature 1998, 391:806-811Mex-3 mRNA detection in embryos by in situ hybridization第40頁/共50頁第41頁/共50頁第42頁/共50頁第43頁/共50頁第4

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