線栓法致大鼠局灶腦缺血模型的評價及思考

1、線栓法致大鼠局灶腦缺血模型的評價及思考         09-09-02 09:24:00     編輯：studa20                        作者：陳小睿 孟憲麗 孟保華 李佳川【摘要】  目的基于實驗經(jīng)驗的總結，

2、重點介紹線栓法致大鼠局灶性腦缺血模型的制作方法及操作程序，為建立較為穩(wěn)定的腦缺血模型提供參考。方法采用線栓自頸總動脈插入，經(jīng)頸內(nèi)動脈阻斷大腦中動脈以造成局灶性腦缺血模型，測定各組腦組織含水率及梗塞體積比。結果模型組腦組織含水率及腦梗塞體積比明顯高于假手術組；陽性藥尼莫地平能明顯減輕線栓模型損傷引起的腦組織缺血，降低腦含水率和腦梗塞體積。結論 通過對線栓法模型進行改良，可有效縮短造模時程，減少手術損傷，提高再灌注后存活率，使造模效果趨于穩(wěn)定。 【關鍵詞】  線栓法； 腦缺血； 動物模型Abstract：ObjectiveBased on the summary of the exper

3、iences from experiments, the method for model building and the details of manipulation of the model of focal cerebral ischemia by suture-occluded in rats were emphasized in this article in order to build steadier models. MethodsThe suture was inserted via CCA into ICA to block MCA for building the M

4、CAO model of rats and then the water ratio and the percentage of the infarcted volume of the brain tissue were measured.ResultsThe water ratio and the percentage of the infarct volume of the model group were significantly higher than those in sham operated group. As the positive comparison, Nimodipi

5、ne could significantly relieve the impairment caused by MCAO and decrease the water ratio and the percentage of the infarct volume. ConclusionThe suture-occluded method shorten the time, relieve the impairment in OPS, heighten the livalility after reperfusion and the model is steady.Key words：Suture

6、-occluded method;  Cerebral ischemia;  Animal model    缺血性腦卒中是一種常見的腦血管疾病，其發(fā)病率、致殘率和病死率高，嚴重威脅著人類的健康和生命安全，因此防治腦缺血藥物的研究已成為當今醫(yī)學研究熱點之一。如何在動物實驗中建立相對穩(wěn)定的、能模擬臨床病理機制且操作簡便易行的模型則是基礎研究的關鍵問題所在。    大腦中動脈（MCA）為臨床上缺血性腦損傷的易患部位，故MCA阻斷模型被廣泛用于腦梗塞的研究1。近年來應用較為廣泛的造模包括：經(jīng)顳下或經(jīng)眶入路直接電凝或結扎法

7、、線栓法、光化學誘導血栓法等2。其中，線栓法無需開顱，損傷小，成功率相對較高，可避免外源注入栓子造模的隨機性和缺血部位的不可預測性，能實現(xiàn)腦缺血再灌注損傷的研究。筆者通過對Longa線栓法進行改進，并在多次的實驗操作中積累了相關經(jīng)驗。1  材料1.1  動物清潔級SD大鼠，雄性，體重250350 g，由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供。合格證號： SCXK(川)200415。自由飲水進食，適應性喂養(yǎng)1周。術前12 h禁食。1.2  線栓的制備直徑0.26 mm優(yōu)質(zhì)黑色尼龍魚線（產(chǎn)地日本），剪取約7 cm長線段，將一端插入液體石蠟并迅速提起，垂直晾干，讓石蠟自然下

8、滴均勻覆蓋前端線身。成品線栓顯微鏡下線頭呈水滴狀，線身直徑達0.28 mm，自此端始20 mm處修正液作一標記備用。2  方法2.1  手術操作步驟10水合氯醛0.35 ml/100 g腹腔注射麻醉大鼠。仰臥位固定，術區(qū)常規(guī)消毒，頸正中線切口，沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣分離肌肉筋膜及右側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內(nèi)動脈（ICA），在CCA遠心端和近心端及ECA處掛線備用。近心端結扎CCA，ECA。然后在距CCA分叉部4mm處剪一小口，將栓線插入到ICA，用眼科鑷輕推栓線，當插入深度在20mm左右（修正液標記處到達ECA，ICA分叉處），感覺推進有阻力時，系牢ICA及C

9、CA遠心端的備線以固定線栓。逐層縫合切口并消毒，剪短留在體外的線栓，以備再灌注之用。慶大霉素肌注預防感染，術后保溫至動物清醒，分籠飼養(yǎng)觀察。阻斷后2 h，拔出線栓，進行再灌注。蘇醒后出現(xiàn)提尾時左前肢屈曲和前進時左側劃圈征，證明右側大腦中動脈阻塞成功。2.2  實驗分組將動物按體重隨機分層分為假手術組、模型組及陽性組3組，每組10只。陽性組按設計劑量灌胃每天給予尼莫地平片溶液1 ml/100 g（1.4 mg/100 g），1次/d，連續(xù)給藥7 d，假手術組給予等容蒸餾水。于第7天灌胃給藥1 h后，假手術組大鼠僅在麻醉狀態(tài)下分離右側頸總動脈，不予阻斷血流。陽性組和缺血模型組用“2.1”

10、所示方法建立大鼠右側大腦中動脈栓塞模型。阻斷后2 h，拔出線栓，進行再灌注。再灌注23 h后給藥1次，于第24小時斷頭處死動物取腦。2.3  缺血腦組織含水率的測定動物迅速斷頭處死取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，置于培養(yǎng)皿中，濾紙吸干表面水分，電子天平精確稱量濕重并記錄，入烘箱105烘干48 h后取出，經(jīng)反復稱量直至恒重后記錄作為組織干重。用干濕重法求得含水率。公式如下：    腦組織含水率（%）=（濕重干重）/濕重×1002.4  缺血腦組織梗塞比例測定動物迅速斷頭處死取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，置于培養(yǎng)皿中，生理鹽水沖洗，濾紙

11、吸干表面水分，入超低溫冰箱急凍20 min，取冠狀面均勻切成2 mm的厚腦片，第1刀在腦前極與視交叉連線中點處；第2刀在視交叉部位；第3刀在漏斗柄部位；第4刀在漏斗柄與后葉尾極之間。迅速放入1%TTC溶液中，避光37溫孵30 min，其間每隔5 min翻動一次，使均勻接觸到染色液。經(jīng)染色后的正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗塞組織呈蒼白色，且界限分明，易于剝離。溫孵完畢后將腦片置于10%甲醛中避光固定。24 h后取出5片腦片，電子天平精密稱取總重并記錄。眼科鑷精確剝離梗塞部位，精密稱量并記錄。腦梗塞比例測定采用下述公式：    腦梗塞比例（）（梗塞部分重量/全腦重量）×1002.5