關(guān)龍膽地上部分保肝作用研究

1、關(guān)龍膽地上部分保肝作用研究【摘要】 目的通過不同毒物引起的肝損傷來研究關(guān)龍膽地上部分的保肝作用。方法選用D?舶肴樘前貳虼?乙酰胺、四氯化碳等3個(gè)肝損傷毒物造肝損傷模型，通過不同機(jī)制引起的肝損傷來研究關(guān)龍膽地上部分的保肝作用。結(jié)果關(guān)龍膽地上部分有一定的保肝作用，可降低各種肝損傷模型的ALT，AST，AKP等。結(jié)論 關(guān)龍膽地上部分也有一定的藥用價(jià)值，用全草取代地下部分入藥有一定的可行性。 【關(guān)鍵詞】 關(guān)龍膽 保肝作用 谷丙轉(zhuǎn)氨酶 谷草轉(zhuǎn)氨酶 堿性磷酸酶Abstract：ObjectiveThe activity of the aerial parts of Gentiana manshurica

2、Kitag. assessment on carbon tetrachloride-induced hepatic damage following biochemical parameters were evaluated. MethodsThe biochemical parameters were detected in model rats, eg serum transaminase enzyme levels(Aspartate aminotransferase and Alanine transaminase)and alkaliphosphatase(AKP).ResultsT

3、he biochemical parameters were reduced in model rats. ConclusionThe results showed that the crude methanolic extract of aerial parts had certain hepatoprotective effect.There are relations between activity and its content of Gentiopicroside.The effective dose proportion between aerial parts and unde

4、rground parts is similar to that of content of Gentiopicroside between them.Key words：Gentiana manshurica Kitag.; Hepatoprotective effect; Aspartate aminotransferase; Alanine transaminase; Phosphatase龍膽為常用中藥，中國藥典2000版收載為龍膽科植物三花龍膽Gentiana manshurica Kitag.、龍膽Gentiana scabra Bge.、三花龍膽Gentiana triflora

5、 Pall.或堅(jiān)龍膽Gentiana rigescens Franch. 的干燥根及根莖，具有清熱燥濕、瀉肝膽火的功效，主治濕熱黃疸、陰腫陰癢、帶下、強(qiáng)中、濕疹瘙癢、目赤等癥1。論文論文參考網(wǎng)三花龍膽又名東北龍膽，是“關(guān)龍膽”的主流，質(zhì)量優(yōu)良。一直以來中醫(yī)以龍膽入藥，只取其根及根莖部分，而地上部分則被當(dāng)作廢料丟棄。龍膽常被用作保肝中藥。實(shí)驗(yàn)證明龍膽配伍茵陳、梔子、郁金等中藥有促進(jìn)膽汁分泌與排泄及降低轉(zhuǎn)氨酶作用24。為了更合理有效地開發(fā)資源，充分發(fā)掘我國中醫(yī)藥寶庫的潛在價(jià)值，我們對(duì)關(guān)龍膽的莖、葉、花、根中的龍膽苦苷和當(dāng)藥苦苷進(jìn)行了較深入的研究。同時(shí)，對(duì)地上部分總提取物的保肝作用也進(jìn)行了研究。篩選

6、改善肝功能藥物和對(duì)其活性進(jìn)行評(píng)價(jià)需用動(dòng)物模型。利用毒物、營養(yǎng)因素缺乏、手術(shù)方法、免疫方法以及病毒可以造成肝損傷。造成肝損傷的毒物包括四氯化碳、硫代乙酰胺、醋氨酚、D-半乳糖胺、乙硫氨酸、-萘異硫氰酸酯（ANIE）、鬼筆堿（phalloidin）、-鵝膏素（-amanitin）、酒精、黃曲霉素等。 本實(shí)驗(yàn)選用D-半乳糖胺、硫代乙酰胺、四氯化碳等3個(gè)肝損傷毒物造肝損傷模型5，通過不同機(jī)制引起的肝損傷來研究龍膽地上部分的保肝作用。1 材料1.1 動(dòng)物昆明種小鼠，體重（20.02.0）g，雌雄各半，哈爾濱市獸醫(yī)研究所，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：黑XCXK20020001。1.2 試劑四氯化碳（CCl4），哈爾

7、濱市新達(dá)化工廠產(chǎn)品（分析純），批號(hào)000718；硫代乙酰胺（TAA），天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心（分析純），批號(hào)20040102；D-半乳糖胺（GlanN）：北京化工廠，批號(hào)870522；聯(lián)苯雙酯，德州德藥制藥有限公司，批號(hào)040410；甲醇，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心（分析純），批號(hào)20011222；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）試劑盒、堿性磷酸酶（AKP）試劑盒，南京建成生物工程研究所,批號(hào)20040915。1.3 藥材關(guān)龍膽，采自哈爾濱市蔣化龍膽種植基地，經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)中藥鑒定教研室沈志濱副教授鑒定為關(guān)龍膽。2 方法取關(guān)龍膽根浸膏0.90 g，加蒸餾水配成0.01

8、5 g/ml溶液備用。給小鼠按20 ml/kg灌胃給藥（相當(dāng)于生藥5 g/kg給藥）。分別取關(guān)龍膽地上部分浸膏30.4，15.2，7.6 g加蒸餾水配成0.5，0.25 ，0.125 g/ml溶液備用。 給小鼠按20 ml/kg灌胃給藥（分別相當(dāng)于生藥25，50，75 g/kg給藥）。2.1 龍膽地上部分對(duì)氨基半乳糖（GlanN）急性肝損傷的保護(hù)作用?。?02）g健康小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成正常組、模型組、關(guān)龍膽根組、不同劑量關(guān)龍膽地上部分組、聯(lián)苯雙酯組。除正常組、模型組小鼠每日灌胃生理鹽水20 ml/kg外，其它各組均按20 ml/kg給藥，1次/d，連續(xù)4 d。于末次給藥或生理鹽水后0.5

9、 h，除正常組小鼠ip生理鹽水20 ml/kg外，其余6組小鼠分別按120 mg/kg腹腔注射10% GlaN,18 h后，眼眶取血，3 000 r/min離心10 min，取血清測(cè)ALT，AST，AKP。2.2 龍膽地上部分對(duì)硫代乙酰胺（TAA）急性肝損傷的保護(hù)作用?。?02）g健康小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成正常組、模型組、關(guān)龍膽根組、不同劑量關(guān)龍膽地上部分組、聯(lián)苯雙酯組。除正常組、模型組小鼠每日灌胃生理鹽水20 ml/kg外，其它各組均按20 ml/kg給藥，1次/d，連續(xù)4 d。于末次給藥或生理鹽水后30 min，除正常組小鼠腹腔注射生理鹽水20 ml/kg外，其余6組小鼠分別按50 mg

10、/kg腹腔注射TAA,18 h后，眼眶取血，3 000 r/min離心10 min，取血清測(cè)ALT，AST，AKP。2.3 龍膽地上部分對(duì)CCl4急性肝損傷的保護(hù)作用取（202）g健康小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成正常組、模型組、關(guān)龍膽根組、不同劑量關(guān)龍膽地上部分組、聯(lián)苯雙酯組。除正常組、模型組小鼠每日灌胃生理鹽水20 ml/kg外，其它各組均按20 ml/kg給藥，1次/d，連續(xù)4 d。于末次給藥或生理鹽水后30 min，除正常組小鼠腹腔注射生理鹽水20 ml/kg外，其余6組小鼠分別腹腔注射0.15%CCl4 10 ml/kg。18 h后，眼眶取血，3 000 r/min離心10 min，取血清

11、測(cè)ALT，AST，AKP。論文參考網(wǎng)3 結(jié)果3.1 龍膽地上部分對(duì)小鼠氨基半乳糖(GlanN)急性肝損傷的保護(hù)作用血清生化測(cè)定結(jié)果表明，GlanN肝損傷組（模型組）小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶ALT，AST和A均明顯升高，說明造模成功。龍膽地上部分總提物高、中、低劑量組，龍膽根總提物組與模型組比較雖然可以在一定程度上降低ALT，AST，AKP水平，但經(jīng)過數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析，并沒有顯著性差異。說明龍膽全草對(duì)GlaN所致的急性肝損傷無明顯保護(hù)作用。結(jié)果見表1。表1 龍膽地上部分總提物對(duì)GlanN肝損傷小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影響(略)3.2 龍膽地上部分對(duì)小鼠TAA急性肝損傷的保護(hù)作用血清生化測(cè)定結(jié)果表明

12、，TAA肝損傷組（模型組）小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶ALT，AST，AKP均明顯升高，說明造模成功。龍膽地上部分總提物高，中，低劑量組、龍膽根組與陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯均可對(duì)抗血清ALT，AST、AKP的升高，總提物高、中、低劑量組與模型組對(duì)照有顯著性差別(P0.05）。見表2。表2 龍膽地上部分總提物對(duì)TAA肝損傷小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影響(略)3.3 龍膽地上部分對(duì)小鼠CCl4急性肝損傷的保護(hù)作用血清生化測(cè)定結(jié)果表明，CCl4肝損傷組（模型組）小鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶ALT，AST和堿性磷酸酶AKP均明顯升高，說明造模成功。龍膽地上部分總提物高、中、低劑量組、龍膽根總提物組與陽性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯均可對(duì)

13、抗血清ALT，AST，AKP的升高，地上部分總提物高、中、低劑量組與模型組對(duì)照有顯著性差別(P0.05）。結(jié)果見表3。表3 龍膽地上部分總提物對(duì)CCl4肝損傷小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影響(略)4 討論我們采用昆明種小鼠，設(shè)計(jì)3個(gè)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)關(guān)龍膽地上部分有一定的保肝作用，可降低各種肝損傷模型的ALT，AST，AKP等。CCl4，TAA，GlanN都是引起肝損傷的傳統(tǒng)肝損傷模型，關(guān)龍膽地上部分可使CCl4引起的肝損傷轉(zhuǎn)氨酶下降，和龍膽根及根莖作用一致，提示龍膽地上部分具有抗氧化作用和細(xì)胞保護(hù)作用。TAA干擾RNA從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)過程，影響蛋白質(zhì)的合成。龍膽地上部分能降低TAA對(duì)肝

14、臟的侵害作用，和龍膽根及根莖作用一致，提示龍膽地上部分可以保護(hù)肝細(xì)胞膜，不至于使細(xì)胞的離子環(huán)境破壞，導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死。關(guān)龍膽地上部分對(duì)GlanN無明顯保護(hù)作用，與龍膽根及根莖作用一致。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，關(guān)龍膽地上部分和龍膽地下部分的給藥量與其含有的龍膽苦苷量有一定的相關(guān)性。當(dāng)關(guān)龍膽地上部分以510倍地下部分藥量給藥時(shí)，兩者呈現(xiàn)一致的藥效，但當(dāng)繼續(xù)增加地上部分的藥量時(shí)，無明顯改變，且小鼠體重減輕，可能是由于地上部分葉綠素等的影響，使小鼠食欲降低。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)三花龍膽和其它龍膽地上部分也含有一定量的龍膽苦苷和當(dāng)藥苦苷6，我們下一步將對(duì)三花龍膽和其它龍膽地上部分的保肝作用進(jìn)行研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1國家藥典委員會(huì).中國藥典，部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：72.2薛惠娟，趙偉康.龍膽草對(duì)甲亢大鼠肝勻漿類固醇還原酶活性的影響J.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1992，12（4）：230.3仲來福.四氯化碳致大鼠肝損傷的機(jī)理J.中國藥理