細(xì)胞工程考研大題

1、細(xì)胞工程考研問(wèn)答題細(xì)胞工程的地位，內(nèi)容和技術(shù)從某種意義上來(lái)說(shuō)，基因工程是現(xiàn)在生物技術(shù)的核心，而細(xì)胞工程則是它的基礎(chǔ)和公共平臺(tái)，基因工程與細(xì)胞工程的結(jié)合決定著生物技術(shù)的發(fā)展。按照生物類型可以分為：動(dòng)物細(xì)胞工程，植物細(xì)胞工程，微生物細(xì)胞工程，按照操作對(duì)象可以分為細(xì)胞與植物培養(yǎng)，細(xì)胞融合，細(xì)胞核移植，染色體操作，轉(zhuǎn)基因生物等，常用的化學(xué)消毒方法有哪些化學(xué)方法：常用的是75%的酒精及1%的新吉爾滅，甲醛，環(huán)氧乙烷，氯已定，戊二醛，過(guò)氧乙酸等。物理滅菌法：紫外線，電離輻射，濕熱，干熱，過(guò)濾除菌等常用培養(yǎng)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法：懸滴培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)。常用的培養(yǎng)技術(shù)：克隆培養(yǎng)法。二倍體培養(yǎng)，同步

2、化培養(yǎng)及大規(guī)模培養(yǎng)。體培養(yǎng)細(xì)胞有哪些類型其生長(zhǎng)有什么區(qū)別<1>貼壁型細(xì)胞1成纖維型細(xì)胞：細(xì)胞貼壁后呈長(zhǎng)梭形，圓形細(xì)胞核位于中央，生長(zhǎng)呈放射狀，旋渦狀走向。細(xì)胞之間排列疏散，有較大的細(xì)胞間隙。2上皮型細(xì)胞：細(xì)胞貼壁后呈三角形及不規(guī)則扁平的多角形，中央有扁圓形核，細(xì)胞彼次緊密連接。3游走型細(xì)胞：細(xì)胞在支持物上分散生長(zhǎng)，一般不連接成片形成菌落，呈活躍的游走和變形運(yùn)動(dòng)，速度快且方向不固定，外形不規(guī)則且不斷變化。4多形型細(xì)胞：形態(tài)上不規(guī)則，一般分胞體和胞突兩部分，其中胞突為細(xì)長(zhǎng)型，類似絲狀偽足，胞體呈現(xiàn)多角形。<2>懸浮型細(xì)胞：某些細(xì)胞體外培養(yǎng)不需要貼附支持物上而生存空間大，能大

3、量繁殖細(xì)胞，容易進(jìn)行傳代培養(yǎng)。細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程包括哪些每一個(gè)生長(zhǎng)階段有什么特征(1)原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，是指從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一代的階段，一般持續(xù)14周。此期細(xì)胞移動(dòng)比較的活躍，可見(jiàn)細(xì)胞分裂，但是不旺盛。(2)傳代期：原代細(xì)胞生長(zhǎng)一定時(shí)間后，如是貼附型細(xì)胞就會(huì)連接成片而鋪滿瓶底，這時(shí)需要將原代細(xì)胞分開(kāi)至多個(gè)培養(yǎng)瓶中。細(xì)胞增殖旺盛，并維持二倍體核型。(3)衰退期：此期細(xì)胞仍生存，但是不增殖或者增殖很慢，最后衰退死亡。每代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線包括那幾個(gè)主要時(shí)期各期細(xì)胞有何特點(diǎn)(1)潛伏期：此時(shí)細(xì)胞已存活具有代謝及運(yùn)動(dòng)功能，但是尚未增殖(2)指數(shù)生長(zhǎng)期：又稱對(duì)數(shù)期，此期細(xì)胞增殖旺盛，成倍增長(zhǎng)

4、，活力最佳，適用于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。(3)停止期，又稱平臺(tái)期，此期細(xì)胞幾經(jīng)將其支持物表面沾滿，細(xì)胞活力減退，已不再進(jìn)行分裂增殖。體外培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)滿足哪些營(yíng)養(yǎng)成分1.水：所需化學(xué)成分，生存環(huán)境，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都必須用水溶解才能吸收，代謝產(chǎn)物溶于水才能排除，維持細(xì)胞形態(tài)，調(diào)節(jié)滲透壓，平衡pH。2.平衡鹽溶液：組織細(xì)胞培養(yǎng)中常用的基本液體，維持滲透壓，調(diào)節(jié)pH，供給細(xì)胞生存所需的能量和無(wú)機(jī)離子成分。3.消化液：進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)組織的取材，傳代拍樣中貼壁細(xì)胞的分離，都要使用消化液。4.消化酶抑制液：無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)必須使用消化酶抑制液，以保護(hù)細(xì)胞免受殘留的消化酶的過(guò)度消化而損壞。調(diào)整液：常用的有NaHC03溶液和HE

5、PES溶液。6抗生素液：預(yù)防由于操作不慎而產(chǎn)生的微生物污染。7.谷氨酰胺補(bǔ)充液：細(xì)胞代謝過(guò)程中有重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加培養(yǎng)基的基本要求營(yíng)養(yǎng)成分(氨基酸，單糖，維生素，其他成分)，促進(jìn)生長(zhǎng)因子及激素，pH，滲透壓原代培養(yǎng)的過(guò)程組織取材，組織細(xì)胞分離(機(jī)械法：離心分離，切割分離，機(jī)械分散；消化法：胰蛋白酶，膠原酶，螯合劑)，培養(yǎng)(組織塊培養(yǎng)，單層細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞培養(yǎng))什么是細(xì)胞系，細(xì)胞株如何建立細(xì)胞系在研究中細(xì)胞系和細(xì)胞株能發(fā)揮哪些作用國(guó)際上有哪些著名的細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞系：是由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的一種細(xì)胞為主的，能在體外長(zhǎng)期生存的不均一的細(xì)胞群體。細(xì)胞株：細(xì)胞系經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的克隆化，便得到

6、由單一細(xì)胞組成的細(xì)胞株。初代培養(yǎng)，又稱為原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞，組織和器官進(jìn)行第一次的培養(yǎng)物。一旦進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。美國(guó)的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫(kù)或細(xì)胞銀行（ATCQ和人遺傳突變細(xì)胞庫(kù)（HGMR），細(xì)胞衰老細(xì)胞庫(kù)（CAR）等。細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的重要技術(shù)基礎(chǔ)，細(xì)胞培養(yǎng)包括天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基主要來(lái)自動(dòng)物體液或從組織分離提純制備的，營(yíng)養(yǎng)成分高，但是成分復(fù)雜，來(lái)源有限，合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成的，細(xì)胞培養(yǎng)包括原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，原代培養(yǎng)是指細(xì)胞或組織離開(kāi)有機(jī)體之后的首次培養(yǎng)，培養(yǎng)到細(xì)胞生長(zhǎng)到一定密度后就需要

7、更新培養(yǎng)液，這就是細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)的方法通常有：懸滴培養(yǎng)法，培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法，和旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法。動(dòng)物的細(xì)胞與組織培養(yǎng)是從動(dòng)物體內(nèi)取出組織或細(xì)胞，模擬有機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，在體外建立無(wú)菌，適溫和一定營(yíng)養(yǎng)條件等，使之生長(zhǎng)和生存，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)，動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞工程的重要技術(shù)基礎(chǔ)，細(xì)胞融合，組織工程，胚胎工程，動(dòng)物克隆等都離不開(kāi)細(xì)胞的培養(yǎng)，培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)有：貼附，接觸抑制，密度依賴性等。接觸抑制：是體外培養(yǎng)中某些貼附型細(xì)胞生長(zhǎng)特征之一，當(dāng)兩個(gè)細(xì)胞由于移動(dòng)而相互靠近發(fā)生接觸時(shí)，細(xì)胞不在移動(dòng)，在接觸區(qū)域的細(xì)胞膜皺褶樣活動(dòng)停止，從而使細(xì)胞停止運(yùn)動(dòng)，這種由于細(xì)胞接觸而抑

8、制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象稱為接觸抑制。密度抑制：當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大，培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制，導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。簡(jiǎn)述單克隆抗體的制備過(guò)程及其主要原理。選擇HGPRT,T不分泌抗體的骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)抗原免疫的B淋巴細(xì)胞融合，用HAT培養(yǎng)基篩選出雜交瘤，再經(jīng)過(guò)有限稀釋法或軟瓊脂法克隆抗體分泌陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，在動(dòng)物體內(nèi)或體外對(duì)其進(jìn)行大量培養(yǎng)，生產(chǎn)單克隆抗體。HAT的選擇原理是什么HAT培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞由次黃嘌吟核苷酸和嘧啶核苷酸合成DNA途徑而設(shè)計(jì)的。體外受精技術(shù)卵母細(xì)胞的采集和成熟培養(yǎng)；【1】超數(shù)排卵，從活體卵巢中采集卵母細(xì)胞；從屠宰后母畜卵巢上

9、采集卵母細(xì)胞；【2】卵母細(xì)胞的選擇，【3】卵母細(xì)胞的成熟培養(yǎng)。精子的獲能處理；體外受精：【1】常規(guī)的體外受精技術(shù)【2】與分離精子相結(jié)合的體外受精技術(shù)【3】顯微受精技術(shù)。受精卵的體外培養(yǎng)；胚胎移植。成體干細(xì)胞的類型成體干細(xì)胞是分布在成體組織中尚未分化的，具有自我更新，并能構(gòu)建和補(bǔ)充相應(yīng)組織的各種類型細(xì)胞潛能的干細(xì)胞，分為：造血干細(xì)胞，神經(jīng)干細(xì)胞，胰島干細(xì)胞，皮膚干細(xì)胞。簡(jiǎn)述細(xì)胞核移植的發(fā)展史，討論“多莉”羊產(chǎn)生的學(xué)術(shù)意義1952年Briggs和King發(fā)明了細(xì)胞核移植技術(shù)，首次把兩棲淚囊體胚的細(xì)胞核移植到去核卵中，發(fā)育成為可攝食的蝌蚪。1997年，英格蘭愛(ài)丁堡羅斯林研究所和PPL制藥公司利用高度

10、分化的綿羊乳腺上皮細(xì)胞，通過(guò)核移植克隆了一只雌性小綿羊多莉。它是人類首次用成年的體細(xì)胞乳腺上皮細(xì)胞獲得的克隆后代，證明了哺乳動(dòng)物高度分化的細(xì)胞核在卵母細(xì)胞質(zhì)的支持下也能夠恢復(fù)其全能性，為細(xì)胞的全能性增加了新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。組織工程核心技術(shù)組織工程化皮膚，組織工程化骨骼，組織工程化血管，組織工程化管狀器官，組織工程化腺體器官簡(jiǎn)述細(xì)胞核移植的類型和主要的操作技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植與體細(xì)胞核移植【1】胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)【2】干細(xì)胞核移植技術(shù)【3】體細(xì)胞核移植技術(shù)操作技術(shù)：【1】核受體細(xì)胞的準(zhǔn)備【2】核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備【3】細(xì)胞核移植【4】激活【5】重組胚的體內(nèi)或體外培養(yǎng)【6】胚胎移植核移植技術(shù)的應(yīng)用【1】制備

11、基因克隆動(dòng)物，進(jìn)行生物藥物的生產(chǎn)【2】培育優(yōu)良畜種，擴(kuò)大良種種群【3】開(kāi)展異種動(dòng)物克隆，拯救瀕危動(dòng)物【4】與干細(xì)胞技術(shù)結(jié)合。開(kāi)展治療性克隆【5】利用核移植技術(shù)，研究生物學(xué)的基本問(wèn)題。簡(jiǎn)述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備方法，分析比較幾種方法的原理與特點(diǎn)。方法原理特點(diǎn)基因顯微注射法通過(guò)顯微注射儀將外源基因直接注射到受精卵的雄原核內(nèi)使外源基因整合到DNA中，發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物外源分子的DNA大小不受限制，每次注射外源基因的長(zhǎng)度可達(dá)50KB。方法簡(jiǎn)單，導(dǎo)入過(guò)程直觀逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法將目的基因重組到逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組上，人為的感染床前或者著床后的胚胎，能夠高效哦的感染宿主細(xì)胞，感染率達(dá)到100%胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法外源DNA導(dǎo)

12、入體外培養(yǎng)的ES細(xì)胞，經(jīng)篩選后獲得整合穩(wěn)定和表達(dá)好的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，然后將這些細(xì)胞注入受體類囊配腔中，精子載體導(dǎo)入法以精子作為外源DNA載體的轉(zhuǎn)基因方法YAC介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移ES細(xì)胞轉(zhuǎn)染YAC后體外篩選，陽(yáng)性ES細(xì)胞囊胚腔注射，YAC原核注射保證巨大基因的完整性，保證較長(zhǎng)外源片段在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究中的整合率提高，保證所有順式因子的完整結(jié)構(gòu)并與結(jié)構(gòu)基因的位置關(guān)系不變，鑒于目的基因的完整性，目的上下游的側(cè)翼序列可以消除或減弱基因整合后“位置效應(yīng)”細(xì)胞核移植技術(shù)將體細(xì)胞核移植技術(shù)與轉(zhuǎn)基因技術(shù)結(jié)合，使轉(zhuǎn)基因技術(shù)結(jié)合，百分百為轉(zhuǎn)基因個(gè)體9- 6轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用，【1】改良動(dòng)物品種【2】生物制藥【3】建立診斷和治

13、療人類疾病的動(dòng)物模型【4】生產(chǎn)可用于人體器官移植的動(dòng)物器官【5】基因治療【6】基因打靶9- 7動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器的制備【1】表達(dá)載體的構(gòu)建【2】目的基因的選擇【3】體外重組【4】基因轉(zhuǎn)導(dǎo)【5】胚胎移植【6】鑒定，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器可以從分子水平和乳腺分泌物兩個(gè)方面鑒定10- 1什么是染色體工程動(dòng)物染色體工程主要包括哪些方面是按照人們的需要對(duì)生物的染色體進(jìn)行操作，添加，消減或者替換染色體，從而達(dá)到定向選育新品種或者創(chuàng)造人工新物種的目的，動(dòng)物染色體工程主要包括染色體倍性改造，結(jié)構(gòu)改造及人工染色體的利用。10- 2動(dòng)物染色體加倍技術(shù)主要有哪些比較它們各自的特點(diǎn)及其適用對(duì)象?！?】化學(xué)誘導(dǎo)法；利

14、用秋水仙素，細(xì)胞松弛素B,麻醉劑N20【2】物理方法；溫度休克法，水靜壓【3】生物學(xué)方法；通過(guò)雜交技術(shù)秋水仙素能抑制和破壞紡錘體的形成，用它處理正在分裂的細(xì)胞，可使染色體正常復(fù)制而細(xì)胞不發(fā)生分裂，主要用于植物多倍體的誘導(dǎo)細(xì)胞松弛素B通過(guò)抑制動(dòng)物的肌動(dòng)蛋白聚合成微絲，阻止細(xì)胞質(zhì)的分裂，常用于制造動(dòng)物多倍體溫度休克法廉價(jià)、易操作，是誘導(dǎo)動(dòng)物多倍體化的常用手段，適合養(yǎng)殖場(chǎng)大規(guī)模使用。水靜壓法誘導(dǎo)率高、處理時(shí)間短、對(duì)受精卵損傷小、成活率高。由于成本較高處理卵的量有限，不適用于大規(guī)模生產(chǎn)。雜交技術(shù)可按照人們的設(shè)計(jì)獲得優(yōu)良基因組合的異源多倍體，從而創(chuàng)造動(dòng)植物的新種、新類型和新品種，也可利用該技術(shù)來(lái)研究物種

15、的進(jìn)化和親緣關(guān)系。11- 1結(jié)合細(xì)胞工程的發(fā)展，全面分析和理解細(xì)胞學(xué)說(shuō)和植物全能性理論的意義細(xì)胞工程發(fā)展史：1839年，施萊登和施旺發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞學(xué)。1902年，Haberlabdt提出了細(xì)胞全能學(xué)說(shuō)。1958年，Stwovrd有胡蘿卜韌皮部組織誘導(dǎo)生成再生植株。1907年，Harrison創(chuàng)立動(dòng)植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。植物細(xì)胞的全能性：植物體的一部分組織或者器官具有發(fā)育成完整植株的潛在能力，稱之為植物細(xì)胞的全能性。植物全能性理論是植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)。11- 2愈傷組織有什么特點(diǎn)它在植物細(xì)胞工程中有什么作用愈傷組織是脫分化后的細(xì)胞經(jīng)過(guò)細(xì)胞分裂，產(chǎn)生無(wú)組織結(jié)構(gòu)、無(wú)明顯極性的松散的細(xì)胞團(tuán)。愈傷組織的誘

16、導(dǎo)是植物細(xì)胞體外再生的第一步。也是關(guān)鍵的一步。當(dāng)組織從植物體上分離下來(lái)時(shí)，細(xì)胞一般都處于靜止?fàn)顟B(tài)，稱為靜止細(xì)胞。靜止細(xì)胞在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上被活化，細(xì)胞的代謝活動(dòng)迅速增強(qiáng)，細(xì)胞質(zhì)增加，胞內(nèi)出現(xiàn)活躍的胞質(zhì)流動(dòng)，核糖體大量積累，蛋白質(zhì)合成旺盛，RNA含量迅速增加。靜止細(xì)胞的活化為細(xì)胞的分裂提供了物質(zhì)保證?；罨蟮撵o止細(xì)胞進(jìn)入分裂期，外植體表面形成愈傷組織，又愈傷組織在一定的條件下重新分化為各種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步發(fā)育成完整植株。11-3愈傷組織形成再生植株需要經(jīng)過(guò)什么途徑要經(jīng)過(guò)器官的發(fā)生和胚狀體發(fā)生兩條途徑。器官的發(fā)生是由愈傷組織首先在一種培養(yǎng)基生誘導(dǎo)形成的芽（或根），再在另一種培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成根（或

17、芽）。胚狀體發(fā)生是由愈傷組織形成類似種子的胚的結(jié)構(gòu)，同時(shí)產(chǎn)生芽端和根端的結(jié)構(gòu)，稱為胚狀體。11-4分析影響植物組織脫分化和再分化的因素內(nèi)部因素：包括植物的遺傳性狀和生理狀況，外部因素：包括營(yíng)養(yǎng)條件（如植物激素，無(wú)機(jī)鹽，有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分）和環(huán)境條件（如培養(yǎng)基的PH,滲透壓，溫度，濕度，光照）11-5植物組織培養(yǎng)基的組成成分有哪幾類在離體培養(yǎng)中的功能是什么【1】無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分。如鎂是葉綠素分子的一部分，鈣是細(xì)胞壁的組成之一，氮是各種氨基酸，維生素，蛋白質(zhì)和核酸的重要組成部分?！?】有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分。碳源，含氮物質(zhì)【3】植物激素類，生長(zhǎng)素類，細(xì)胞分裂素類，赤霉素類【4】瓊脂它是培養(yǎng)基中的一種必需成分【5】PH

18、值在滅菌之前培養(yǎng)基的PH值一般都調(diào)節(jié)到11-6分析植物離體培養(yǎng)的環(huán)境條件及對(duì)培養(yǎng)的影響環(huán)境的影響主要有：【1】光的影響：光對(duì)培養(yǎng)基所產(chǎn)生的影響是不同的，在煙草細(xì)胞培養(yǎng)物中泛醌的合成不受光的影響，【2】溫度的影響：不同植物細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和次生產(chǎn)物的合成對(duì)溫度有一定的要求?！?】振蕩的頻率：搖床的振蕩頻率對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和代謝物的積累都會(huì)產(chǎn)生影響。11-13植物幾種大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)各有什么特點(diǎn)培養(yǎng)體系營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，易成團(tuán)產(chǎn)物含量較低，遺傳不穩(wěn)定，培養(yǎng)后期粘性大固定化培養(yǎng)載體固定化：生長(zhǎng)慢，產(chǎn)物含量較高，遺傳穩(wěn)定，可以連續(xù)培養(yǎng)，自固定化：生長(zhǎng)較快，細(xì)胞聚集，成大顆粒，產(chǎn)量高。培

19、養(yǎng)夜澄清植物器官培養(yǎng)毛狀根生長(zhǎng)迅速，分支多，不需要外源激素，向地型弱，產(chǎn)量高，遺傳穩(wěn)定芽生長(zhǎng)較慢，遺傳較穩(wěn)定，產(chǎn)物含量高，需要光照，體細(xì)胞胚生長(zhǎng)慢，遺傳穩(wěn)定，次級(jí)代謝產(chǎn)物含量較高。冠癭組織生長(zhǎng)快，不需要外源激素，產(chǎn)量高，遺傳穩(wěn)定，懸浮培養(yǎng)為顆粒狀12- 1什么是植物快繁技術(shù)總結(jié)其主要的操作步驟。利用組織培養(yǎng)技術(shù)，將優(yōu)良植株的莖尖，腋芽，葉片，鱗片等器官，組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，在短時(shí)間內(nèi)獲得大量遺傳性一致的植株的技術(shù)稱為植物的快繁技術(shù)。其主要的操作流程包括無(wú)菌母株的制備，不定芽增殖，完整植株的形成，再生植株的鍛煉和馴化及再生植株的鑒定等步驟。12- 2植物脫毒方法有哪些有微莖尖培養(yǎng)法，株心組織

20、培養(yǎng)法，熱處理法13- 1通過(guò)離體培養(yǎng)獲得單倍體的途徑有哪些通過(guò)離體培養(yǎng)花藥和花粉，是離體培養(yǎng)獲得單倍體的主要途徑13- 2花藥培養(yǎng)中再生植株的形成途徑與再生植株倍性有何關(guān)系花藥再生植株有兩種方式：【1】花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再分化形成植株，【2】胚狀體再生，即花藥中的花粉通過(guò)形成胚狀體，發(fā)育成單倍體植株，在花藥培養(yǎng)中，花藥中的花粉最容易形成胚狀體或愈傷組織，但是，有時(shí)花藥的體細(xì)胞也可以分裂繁殖，因此，體外花藥培養(yǎng)除了得到小抱子來(lái)源的單倍體植物，還會(huì)的到花藥體細(xì)胞來(lái)源的二倍體植株。13- 3花粉培養(yǎng)過(guò)程花粉培養(yǎng)是指把花粉從花藥中分離岀來(lái)，以花粉粒作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。13-

21、4花藥與花粉培養(yǎng)的方法13-4-1材料如何選擇【1】材料的遺傳差異【2】母本生理狀態(tài)的影響【3】花粉發(fā)育時(shí)期13-4-2材料的預(yù)處理【1】低溫處理【2】高溫處理【3】離心處理【4】激光照射【5】乙烯利處理【6】甘露醇處理13-4-3培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基，【1】碳源【2】激素【3】附加成分13- 4-4，接種與再生植株的培養(yǎng)【1】材料的滅菌處理【2】培養(yǎng)條件【3】花粉的培養(yǎng)【4】花粉植株的鑒定【5】單倍體植物的染色體加倍14- 1植物胚乳有哪些類型植物胚乳可以分為兩大類：被子植物胚乳和騾子植物胚乳。胚乳發(fā)育初期是否形成細(xì)胞壁可分為：【1】核型胚乳【2】細(xì)胞型胚乳【3】沼生目型胚乳14- 2植物胚胎培

22、養(yǎng)的定義和發(fā)展植物胚胎培養(yǎng)包括：胚培養(yǎng)，胚珠培養(yǎng)，子房培養(yǎng)和胚乳培養(yǎng)。胚培養(yǎng)包括成熟胚培養(yǎng)和幼胚培養(yǎng)。1904年Hanning培養(yǎng)羅卜和辣根菜的胚，Laibach在1925年19289年培養(yǎng)亞麻種間雜種幼胚成功的獲得了種間雜種，首次證實(shí)了這種方法在實(shí)際應(yīng)用中的價(jià)值14- 3胚培養(yǎng)的意義【1】克服了遠(yuǎn)源雜交不孕和幼胚敗育【2】成熟胚培養(yǎng)快速繁殖【3】胚培養(yǎng)作為轉(zhuǎn)基因受體材料15- 1愈傷組織與體細(xì)胞胚胎發(fā)生愈傷組織原來(lái)是指植物受損時(shí)在愈合傷口處長(zhǎng)出的一團(tuán)瘤狀突起，突起內(nèi)的細(xì)胞已發(fā)生脫分化的變化，培養(yǎng)中的愈傷組織是指從外植體的內(nèi)部或切口表面形成的一團(tuán)沒(méi)有分化的均勻一致，無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞團(tuán)。這種組

23、織具有再分化能力。愈傷組織的形成大致要經(jīng)過(guò)起動(dòng)期，分裂期，形成期三個(gè)階段。愈傷組織器官的發(fā)生：【1】不定芽方式：是指愈傷組織培養(yǎng)物，通過(guò)形成不定芽的再生植株，【2】胚狀體的形成，是指培養(yǎng)的組織或細(xì)胞中直接或間接形成胚胎的生長(zhǎng)方式。15- 2人工種子就是將植物離體培養(yǎng)產(chǎn)生的體細(xì)胞胚包埋在含有營(yíng)養(yǎng)成分和保護(hù)功能的物質(zhì)中而制成的，在條件適宜時(shí)他同普通種子一樣可以發(fā)芽成苗。人工種子包括：體細(xì)胞胚，人工胚乳，人工中皮。15- 3人工種子的研究現(xiàn)狀【1】人工種子結(jié)構(gòu)完整，體積小，便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸?！?】供制作人工種子的體細(xì)胞胚數(shù)量多，繁殖快【3】制作人工種子時(shí)還可以加入菌肥，微生物，農(nóng)藥，以抵抗外來(lái)病毒和微

24、生物的侵染，【4】對(duì)生育周期長(zhǎng)的多年生植物，育性不良的且難于有性繁殖的植物可用人工種子技術(shù)進(jìn)行繁殖，【5】不受季節(jié)限制，利用人工種子技術(shù)大量，快速繁殖性狀優(yōu)良，遺傳穩(wěn)定的植物品種。【6】人工種子和天然種子一樣，具有堅(jiān)硬的種皮，適用機(jī)械化播種。16- 1植物原生質(zhì)體的制備方法有哪些【1】機(jī)械分離法；常用于分離藻類原生質(zhì)體，細(xì)胞在高滲糖溶液中發(fā)生輕微質(zhì)壁分離，原生質(zhì)體收縮成球形后，再用機(jī)械法磨碎組織，原生質(zhì)體也從受損的細(xì)胞壁中釋放出來(lái)?！?】酶解分離法：用纖維素酶，半纖維素酶，果膠酶，R10，蝸牛酶等細(xì)胞壁降解酶，脫除植物細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體的方法。16- 2為什么說(shuō)原生質(zhì)體培養(yǎng)系統(tǒng)是現(xiàn)在生物技術(shù)的載體植物原生質(zhì)體融合的最大意義在于能克服種，屬以上的植