第十章反芻動物營養(yǎng)實驗技術(shù)1

1、第十章 反芻動物營養(yǎng)實驗技術(shù)第一節(jié) 人工瘤胃技術(shù)一. 人工瘤胃技術(shù)概述人工瘤胃技術(shù)是體外研究瘤胃微生物營養(yǎng)與代謝的一類技術(shù)方法，又稱瘤胃模擬培養(yǎng)法。由于人工瘤胃技術(shù)不受試驗動物的限制，可以在常規(guī)實驗室條件下進(jìn)行研究，因此得到了越來越廣泛的應(yīng)用。早期的人工瘤胃技術(shù)主要應(yīng)用于較簡單的研究目的。如Woodman和Evans(1938)，通過體外瘤胃發(fā)酵證實纖維素在瘤胃內(nèi)降解的唯一中間產(chǎn)物是葡萄糖，終產(chǎn)物是VFA和乳酸。Quin（1943）用體外法研究了不同碳水化合物瘤胃發(fā)酵的產(chǎn)氣量。Pearson和Smith（1943）用體外法研究了瘤胃微生物對尿素的利用等。McDougall（1948）關(guān)于綿羊唾

2、液礦物質(zhì)組成的研究在人工瘤胃技術(shù)發(fā)展史上具有重要意義，之后的各種人工瘤胃系統(tǒng)人工唾液的配制均參照了McDougall的研究結(jié)果。早期的人工瘤胃發(fā)酵裝置比較簡單，不少裝置僅是在厭氧的條件下對瘤胃液進(jìn)行簡單的培養(yǎng)。由于發(fā)酵產(chǎn)物在系統(tǒng)內(nèi)的不斷積累，這類系統(tǒng)不能用于要求長時間發(fā)酵的研究工作，通常有效的發(fā)酵時間為1224小時。Louw于1949年設(shè)計了一套帶有透析系統(tǒng)的人工瘤胃裝置，將瘤胃液和底物放入滲析袋或半透膜中，然后懸浮在緩沖液內(nèi)。該裝置在一定程度上將底物和發(fā)酵終產(chǎn)物分離開，延長了有效發(fā)酵時間。二十世紀(jì)五十年代至六十年代，人工瘤胃技術(shù)在牧草有機(jī)物和纖維素瘤胃降解研究方面得到了大量應(yīng)用。用人工瘤胃技

3、術(shù)研究的內(nèi)容包括不同牧草以及牧草與純纖維體外降解速度比較；牧草顆粒大小對體外降解速度的影響；體外評定牧草營養(yǎng)價值；用體外牧草發(fā)酵測定結(jié)果預(yù)測體內(nèi)發(fā)酵等。這一階段的人工瘤胃裝置也趨于復(fù)雜，以更加接近瘤胃發(fā)酵的真實情況。如Donfer使用的發(fā)酵裝置由32個發(fā)酵瓶組成，每個發(fā)酵瓶的容積為90ml，裝入的發(fā)酵液容量為50ml。每個瓶均有進(jìn)氣口和出氣口，以每分鐘160個氣泡的速度向瓶內(nèi)通入二氧化碳。二十世紀(jì)七十年代，隨著反芻動物蛋白質(zhì)營養(yǎng)研究的深入，人工瘤胃技術(shù)開始應(yīng)用于飼料蛋白質(zhì)的瘤胃降解率評定。1972年，Ben Braver發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)法中的氨濃度與瘤胃內(nèi)氨濃度有很好的相關(guān)，并用短期培養(yǎng)法對飼料蛋

4、白質(zhì)的瘤胃降解率進(jìn)行了評定。Monhadeva（1979）、Broderik（1978，1979）用短期培養(yǎng)法評定了飼料蛋白質(zhì)的瘤胃降解率和微生物蛋白的產(chǎn)量。Road（1983）根據(jù)瘤胃產(chǎn)氣量與氨利用量之間的關(guān)系，用能量、微生物蛋白合成量計算了飼料蛋白質(zhì)的降解率。我國的吳毓群（1988），任鵬（1989）等分別用短期發(fā)酵法和持續(xù)發(fā)酵法測定了飼料蛋白質(zhì)與干物質(zhì)的降解率。二十世紀(jì)八十年代后期，人工瘤胃技術(shù)的應(yīng)用范圍擴(kuò)展到研究營養(yǎng)物質(zhì)對瘤胃微生物合成量的影響及營養(yǎng)物質(zhì)的匹配關(guān)系。這方面的研究因難以控制瘤胃內(nèi)環(huán)境而不能在體內(nèi)進(jìn)行，例如進(jìn)行瘤胃NH3濃度與瘤胃微生物合成量關(guān)系的研究由于瘤胃和動物本身對N

5、H3濃度有調(diào)節(jié)作用，這樣就不能根據(jù)不同NPN在瘤胃內(nèi)NH3濃度的差異和消失速度判斷NPN的優(yōu)劣。人工瘤胃技術(shù)由于容易實現(xiàn)試驗條件的控制而具有體內(nèi)法不可比擬的優(yōu)越性。這一時期人工瘤胃裝置以可控性持續(xù)動態(tài)發(fā)酵的模擬裝置為主，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)自行研制的RS型瘤胃持續(xù)動態(tài)模擬裝置即屬此類型。二. 短期人工瘤胃發(fā)酵裝置測定瘤胃產(chǎn)氣量短期人工瘤胃發(fā)酵裝置可以根據(jù)研究目的進(jìn)行不同的設(shè)計，其共同特點是靜態(tài)發(fā)酵，不對底物和產(chǎn)物進(jìn)行分離，因而只能持續(xù)較短的時間。但試驗裝置簡單，在飼料營養(yǎng)價值評定等研究方面仍具有很大的價值。下面介紹英國Rowett研究所用于測定瘤胃微生物產(chǎn)氣量的人工瘤胃技術(shù)，其主要用途是研究不同粗飼料

6、及添加劑等對飼料瘤胃降解及甲烷氣能損失的影響。人工唾液的制備：人工唾液由蒸餾水、礦物質(zhì)元素溶液、微量元素溶液、刃天青（reazurin）溶液混合而成。將混合溶液置于三角瓶中，水浴加熱至39之后加入還原液。將以上混合溶液置于39磁力攪拌器上不斷攪拌，同時通入CO2氣泡，直至溶液顏色由藍(lán)變至粉紅最后變?yōu)闊o色透明，表明人工唾液已呈還原狀態(tài)。升高CO2通氣管至液面以上，并連續(xù)通入CO2，調(diào)整PH值至7.07.30。礦物質(zhì)溶液:Na2HPO4 5.7g KH2PO4 6.2gMgSO4 0.6g 加蒸餾水至1升微量元素溶液:CaCl2·2H2O 16.12g MnCl2·4H2O 1

7、0.0gCoCl2·6H2O 1.0g FeCl2·6H2O 0.8g加蒸餾水至1升緩沖溶液（PH7.07.3）:NaHCO3 35g（NH4）HCO3 4g 加蒸餾水至1升刃天青溶液:100mg/100ml人工唾液:最終容積（ml）500100015002000蒸餾水23.75475712.5950.0礦物質(zhì)溶液120.0240.0360.0480.0緩沖液120.0240.0360.0480.0微量元素溶液0.060.120.180.24刃天青0.611.221.832.44還原溶液蒸餾水23.847.571.395.01MNaOH1.02.03.04.0Na2S9&#

8、183;H2O(mg)168336504672瘤胃液制備：抽取瘤胃液（一般從2-3只試驗動物抽取并混合，經(jīng)三層紗布過濾）。將瘤胃濾液加入到人工唾液中，人工唾液與瘤胃濾液的體積比例為2:1。發(fā)酵管的制備：發(fā)酵管可以選用50100ml的玻璃注射器，上有刻度。稱取200mg待測樣品加入每一個發(fā)酵管中，并準(zhǔn)確記錄加入的待測樣品重量。抽入30ml瘤胃液，排出空氣后用橡皮帽封口。置入39水溶搖床上發(fā)酵?？瞻讓φ展軆H加入瘤胃液，不加待測樣品，以校正產(chǎn)氣管。對于化學(xué)物質(zhì)等對產(chǎn)氣量的影響研究還應(yīng)加入不含化學(xué)物質(zhì)而僅含待測樣品和瘤胃液的對照。對粗飼料，讀產(chǎn)氣量數(shù)據(jù)的時間為3，6，12，24，48，72小時；對于精

9、飼料，24小時內(nèi)的讀數(shù)次數(shù)應(yīng)適當(dāng)增加。開始發(fā)酵的前24小時內(nèi)應(yīng)輕輕混勻發(fā)酵管內(nèi)容物2-3次。三. 持續(xù)動態(tài)人工瘤胃發(fā)酵系統(tǒng)持續(xù)動態(tài)人工瘤胃發(fā)酵系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，可以應(yīng)用于常規(guī)飼料營養(yǎng)價值評定、蛋白質(zhì)飼料瘤胃保護(hù)技術(shù)、各種化學(xué)試劑和藥物對微生物代謝影響及瘤胃營養(yǎng)調(diào)控等方面的研究。由于應(yīng)用持續(xù)動態(tài)人工瘤胃系統(tǒng)進(jìn)行的研究通常要求持續(xù)發(fā)酵的時間為2-10天，因此需要對整個系統(tǒng)的技術(shù)條件有一個嚴(yán)格的要求，以接近瘤胃發(fā)酵的真實情況。 持續(xù)動態(tài)人工瘤胃發(fā)酵系統(tǒng)的技術(shù)指標(biāo)1.1 瘤胃液與人工唾液的比例：以1:1較為理想，隨著人工唾液比例的增加，發(fā)酵液的PH增大，NH3濃度下降。1.2 外流速度：早期的持續(xù)動

10、態(tài)人工瘤胃裝置固相和液相的外流速度相同，后來認(rèn)識到這與瘤胃內(nèi)容物的排空情況不一致。Hoover等（1991）在總結(jié)相關(guān)研究工作的基礎(chǔ)上提出，持續(xù)動態(tài)人工瘤胃裝置的液相外流速度以0.12%/h、固相外流速度以0.042%/h為好。在實際應(yīng)用過程中最好根據(jù)研究目的，通過試驗確定。1.3 溫度：對系統(tǒng)的發(fā)酵溫度控制一定要準(zhǔn)確，即使0.5的差異也會對結(jié)果產(chǎn)生明顯的影響。由于瘤胃微生物對高溫特別敏感，應(yīng)特別注意發(fā)酵溫度不超過40，即使在40下經(jīng)過較長時間，也可觀察到活性下降。適宜的發(fā)酵溫度為39。1.4 PH值：發(fā)酵液的最佳PH值在6.7至7.0之間。以淀粉或糖類為發(fā)酵底物時，容易導(dǎo)致發(fā)酵液的PH值下降

11、。一般在發(fā)酵初期每小時調(diào)節(jié)一次PH值，可用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)至6.9。以尿素為底物時易導(dǎo)致發(fā)酵液PH值的上升，由于瘤胃微生物對于高PH值更為敏感，因此應(yīng)及時調(diào)節(jié)，可用磷酸調(diào)節(jié)至6.9。 瘤胃微生物來源和接種方法：用于提取瘤胃微生物的動物，其日糧應(yīng)根據(jù)研究目的而定。如以淀粉的瘤胃降解為研究目的，動物的日糧中應(yīng)含有較高比例的淀粉。瘤胃微生物可以從瘤胃液制備，也可以從瘤胃內(nèi)容物制備。從瘤胃液制備時，用硬質(zhì)塑料管從瘤胃的不同部位吸取瘤胃液，過濾后備用。從瘤胃內(nèi)容物制備時，取瘤胃內(nèi)容物置入盛有生理鹽水的塑料袋中，用力拍打后過濾，濾液備用。如以獲得微生物的最大活力為目的，可將瘤胃液直接加入系統(tǒng)中；如研究目的為測

12、定微生物的養(yǎng)分需要量，則應(yīng)向系統(tǒng)中加入提取的瘤胃微生物。 維持厭氧狀態(tài)：發(fā)酵系統(tǒng)應(yīng)有良好的氣密性，以防止空氣進(jìn)入。發(fā)酵開始前向系統(tǒng)中通入CO2和N2的混合氣體（CO2 95%+N2 5%），以排除原有空氣。發(fā)酵過程中的厭氧狀態(tài)可以通過不斷通入CO2（40m2/min）來維持，氣密性良好的情況下也可靠發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO2來維持。 攪拌：在持續(xù)發(fā)酵裝置中可以通入的CO2起到攪拌的作用，也可由電機(jī)（6-7轉(zhuǎn)/分）或磁力攪拌器進(jìn)行攪拌。發(fā)酵系統(tǒng)的攪拌不易太劇烈，有研究表明劇烈攪拌對纖維素的降解有不利影響。 氧化還原電位（Eh）：在厭氧環(huán)境中，不斷積累的還原性物質(zhì)使發(fā)酵系統(tǒng)的還原性不斷增強(qiáng)。在瘤胃內(nèi)通

13、過產(chǎn)生烷排除多余的電子對，將瘤胃液的Eh維持在-350-500V之間。對于持續(xù)發(fā)酵的人工瘤胃系統(tǒng)可以通過加入還原劑調(diào)節(jié)Eh，常用的還原劑有硫化銅、維生素C及半胱氨酸和胱氨酸等。四. 持續(xù)動態(tài)人工瘤胃發(fā)酵系統(tǒng)RSRS是中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院馮仰廉主持研制的持續(xù)動態(tài)系統(tǒng)。該系統(tǒng)吸收了短期發(fā)酵裝置和尼龍袋為固相的長期發(fā)酵裝置（Rusitec）的優(yōu)點，進(jìn)行試驗研究的重復(fù)性好，不同試驗周期和不同發(fā)酵罐間測定結(jié)果的變異系數(shù)一般小于5%。該系統(tǒng)在模擬瘤胃內(nèi)環(huán)境方面做到了非均一性，即在讓飼料與發(fā)酵測定混合的同時，可以模擬瘤胃內(nèi)飼料自然分層的現(xiàn)象。發(fā)酵罐的喂料量和喂料次數(shù)可人為調(diào)節(jié)，持續(xù)發(fā)酵間長達(dá)10天以上，

14、能模擬真實瘤胃內(nèi)固相和液相外流速度的不同狀況，試驗期間可收集發(fā)酵產(chǎn)生的氣體。 RS的設(shè)計與組成10-1是的正面圖，裝置放在長×寬×高為180cm×120cm×60cm的操作臺上。裝置的支架為長方體框架，長×寬×高為140cm×40cm×90cm，用3cm的三角鐵焊成?？蚣苌厦媸且粔K厚3cm的木板，上面安裝有電機(jī)、減速器及連桿、溫度控制儀?？蚣軆?nèi)下部放有137cm×37cm×30cm的有機(jī)玻璃水槽，外周是硬質(zhì)塑料板。有機(jī)玻璃槽內(nèi)底部有6個發(fā)酵罐固定座，用于固定6個發(fā)酵罐?？蚣芮懊娴牟僮髋_上放有蠕動

15、泵和緩沖液槽。框架左上側(cè)固定有電源板，由下面的穩(wěn)壓器輸送電流。操作臺的右側(cè)為高純二氧化碳瓶。圖101 北京農(nóng)大RS正面圖。圖10-2 北京農(nóng)大RS背面圖10-2是RS的背面圖，緊靠框架的6個細(xì)長管為集氣管，與集氣管在一起的6個罐是氣液分離罐，操作臺下有6個集液瓶。圖10-3 北京農(nóng)大RS功能單位圖RS裝置有6個發(fā)酵罐，因此有6個功能單位。10-3是一個簡化的功能單位圖，從右側(cè)到左側(cè)依次為緩沖液槽、蠕動泵、發(fā)酵罐、集氣管、氣液分離罐和集液瓶。按照功用，可以將RS功分為發(fā)酵系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、攪拌系統(tǒng)和樣品收集系統(tǒng)4大部分。分述如下：發(fā)酵系統(tǒng)該系統(tǒng)由發(fā)酵罐、蠕動泵和緩沖液槽組成。蠕動泵（L-075

16、24-10，Cole-perm Inc.USA）有6根輸液管道，分別接6個發(fā)酵罐，輸液范圍為036ml/min，其作用是以恒定速率同時把緩沖液連續(xù)輸入6個發(fā)酵罐。10-3右側(cè)為蠕動泵，同時顯示了連接路線。10-3中間是發(fā)酵罐的示意圖，為有機(jī)玻璃制成，高20.5cm、內(nèi)徑9.0cm，容積約1300ml，發(fā)酵罐的蓋分上下兩層，中間用密封圈密封。蓋面上共有5個連接內(nèi)外的管道，外長均為4cm，中央管道是攪拌條的通道，通道管外刻有螺紋，內(nèi)有一圓形小槽，裝滿密封油，然后用有機(jī)玻璃螺母旋緊密封，并保證攪拌條上下自如運動。發(fā)酵罐蓋中央管道的周圍有4個管，與蠕動泵軟管連接的是緩沖液入孔，內(nèi)徑3cm，罐內(nèi)長17c

17、m。與樣品收集部分相聯(lián)的是外流液出孔，內(nèi)徑3cm，罐內(nèi)長3cm，外流液出管的罐內(nèi)部分接尼龍網(wǎng)管，長10cm，通過改變尼龍網(wǎng)的孔徑控制流出顆粒的大小。外流液出孔與樣品收集系統(tǒng)之間用內(nèi)徑3cm的軟質(zhì)透明塑料管連接。喂料管較粗，內(nèi)徑5cm，罐內(nèi)長度8cm；另外一個內(nèi)徑3cm的管為輸氣管，罐內(nèi)長10cm，從輸氣管通入二氧化碳維持厭氧發(fā)酵。上述4個管的出口處都由開關(guān)控制。溫度控制系統(tǒng)溫度由電熱管和控溫儀調(diào)節(jié)。該系統(tǒng)包括有機(jī)玻璃水槽、電熱管、控溫儀和小型循環(huán)水泵。有機(jī)玻璃水槽的容積為135cm×30cm×24cm，槽底平面上有6個發(fā)酵罐固定支架；水槽兩端各有一根800W的電熱管，與控溫

18、儀（wmzk-02型，上海醫(yī)用儀表廠）相連，溫敏探頭放入水槽中間，精度為±0.5；水槽內(nèi)一端固定一臺小型循環(huán)水泵（江蘇寶應(yīng)縣水泵廠），循環(huán)水量為5升/分鐘，使水槽內(nèi)的水每12分鐘全部循環(huán)一次，消除水槽內(nèi)上下、兩端與中間的溫度差，效果可達(dá)±0.1。攪拌系統(tǒng)該系統(tǒng)包括電機(jī)、減速器、連桿、鋁合金方盒橫桿、攪拌條等部分（見10-1）。電機(jī)為永磁低速同步電動機(jī)（蘇州電訊電機(jī)廠），轉(zhuǎn)速為60/72轉(zhuǎn)/分鐘；電機(jī)與減速器連接，減速器為H型蝸輪減速器（上海奉賢減速器廠），比速為12:1；電機(jī)經(jīng)減速器與連桿相連，最終轉(zhuǎn)速為56轉(zhuǎn)/分鐘。連桿下端是一鋁合金方盒（2cm×2cm）的橫桿

19、，長140cm，距離發(fā)酵罐上端15cm，在橫條上面對應(yīng)發(fā)酵罐的位置固定6根鍍鎳攪拌條，直徑0.4cm，長30cm，經(jīng)發(fā)酵罐中央通道進(jìn)入發(fā)酵罐內(nèi)，在攪拌條底端安裝一直徑4cm的有機(jī)玻璃盤（見10-3）。該系統(tǒng)的作用是電機(jī)經(jīng)減速器帶動連桿和下端橫條，使橫條上固定的6根攪拌條在發(fā)酵罐內(nèi)以5-6次/分鐘的速度上下運動，起到緩慢攪拌發(fā)酵罐內(nèi)容物，模擬瘤胃蠕動的效果。樣品收集系統(tǒng)該系統(tǒng)包括外流液收集和發(fā)酵產(chǎn)氣收集兩部分，10-2是整體圖。10-3為單位圖，由發(fā)酵罐向左依次為集氣管、氣液分離罐和外流液收集瓶。外流液和發(fā)酵氣體依靠蠕動泵持續(xù)輸入緩沖液的壓力從發(fā)酵罐的外流液出口流出，經(jīng)管道進(jìn)入氣液分離罐。氣液分

20、離罐內(nèi)徑9cm，高19cm，有機(jī)玻璃做成。分離罐上蓋有兩個孔，內(nèi)徑3cm，外流液和氣體由一個管孔進(jìn)入后，液體下落，由分離罐底部的出孔（內(nèi)徑3cm）進(jìn)入集液瓶。發(fā)酵氣體則上浮，由分離罐蓋上的另一管孔進(jìn)入集氣管。集氣管的連接見10-3，該管為細(xì)長管，內(nèi)徑4.5cm，高100cm，容積1590ml，其上有3個與外界相通的孔；其操作程序為：在試驗前向管內(nèi)灌滿水，然后關(guān)閉上端孔，開下端孔，讓水流出，直至水壓與外界大氣壓相等，水停止流出，使集氣管上部為負(fù)氣區(qū)，當(dāng)發(fā)酵氣體進(jìn)入分離罐時，氣體就進(jìn)入負(fù)氣區(qū)，同時排出一定量的水。當(dāng)試驗結(jié)束時，用與集氣管規(guī)格相同的開口管與集氣管組成“U”形管，并調(diào)節(jié)“U”形管的水平

21、面，使兩者相等，這時集氣管內(nèi)的氣體壓力與大氣壓相同，即可測定發(fā)酵氣體體積，并能從上端孔取樣分析氣體組成，然后換算成標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下的體積和組成。 RS裝置的檢查與連接從10-1可以看出攪拌系統(tǒng)相連的路線，10-2是整套裝置連接后的背面圖，10-3則是一個功能單位的連接圖。下面簡述裝置連接流程和注意事項：2.1 裝置密封性能檢測：首先檢查發(fā)酵罐的密封性。將發(fā)酵罐蓋中央管的密封槽內(nèi)裝滿密封油，用螺母旋緊，使攪拌條上下運動自如，在上下蓋中間裝好密封圈，擰緊螺絲，并關(guān)閉除CO2入口外的所有開關(guān)，將發(fā)酵罐浸沒水中，以1.0kg/cm2的壓力通入CO2半分鐘，如果水中沒有氣泡，說明發(fā)酵罐密封良好，可以使用。同

22、樣檢查氣液分離罐和集氣管的密封性。2.2 電系統(tǒng)檢查檢查穩(wěn)壓電源輸出電壓和蠕動泵轉(zhuǎn)速的穩(wěn)定性，以及電機(jī)和減速器運轉(zhuǎn)正常與否。2.3 系統(tǒng)間連接流程按照10-3，首先把蠕動泵的6根軟管一端穿過橡皮塞放入緩沖液槽內(nèi)，另一端分別連接6個發(fā)酵罐的進(jìn)液孔。再將發(fā)酵罐的外流液出孔與氣液分離罐入孔相接，氣液分離罐的氣體出口與集氣管的側(cè)孔相連接，氣液分離罐下端的液體出口與集液瓶相連，集氣管的下端孔與水平調(diào)節(jié)管相接。最后，也即在裝置運轉(zhuǎn)前連接發(fā)酵罐的攪拌條，密封發(fā)酵罐。至此，裝置連接完畢。 瘤胃持續(xù)動態(tài)模擬裝置（RS）的操作程序3.1 制備日糧發(fā)酵罐使用顆粒日糧。制作方法是首先將所需的飼料用1.00mm的篩孔粉

23、碎兩遍，然后按需要的比例稱重并混合均勻，用顆粒機(jī)壓制成直徑0.6cm，長3cm的顆粒備用。3.2 配制緩沖液近幾年新出現(xiàn)的緩沖液配方很多，但都以McDougall在1948年測定的綿羊唾液礦物質(zhì)組成為基礎(chǔ)，并根據(jù)試驗要求稍微修改得到的人工唾液。McDougall（1948）人工唾液的配方為每10升蒸餾水內(nèi)含：NaHCO3 98克，Na2HPO4·12H2O 93克，NaCl 4.7克，KCl 5.7克，MgSO4·7H2O 1.2克，無水CaCl2 0.4克。配制方法是先把除無水CaCl2以外的其它試劑溶于蒸餾水并稀釋至刻度，然后加入CaCl2，此時緩沖液的PH約為7.8-

24、8.0，并有白色沉淀，這時迅速按1.5kg/cm2的壓力向緩沖液內(nèi)通入CO2，直至溶液澄清，pH降到7.0-7.2（約30分鐘），最后將緩沖液密封保存。緩沖液盡量在使用前配制，不要放置過久，以免PH變化和緩沖力下降。3.3 準(zhǔn)備固體接種將被測日糧提前12小時裝入尼龍袋，通過牛瘤胃瘺管放入瘤胃內(nèi)，供微生物附著消化。3.4 裝置連接與預(yù)熱裝置按本章的流程連接完畢后，向有機(jī)玻璃水浴槽內(nèi)加60升蒸餾水，即水面到達(dá)發(fā)酵罐下蓋處。啟動加熱管，調(diào)節(jié)控溫儀為39，開動循環(huán)水泵，并在每個發(fā)酵罐內(nèi)倒入620ml緩沖液，以使緩沖液得到預(yù)熱，蓋好水浴槽。3.5 試驗期操作在瘺管牛晨飼2小時后，取3頭牛的瘤胃液共200

25、0ml，用兩層紗布過濾，然后迅速向每個發(fā)酵罐內(nèi)加入620ml。同時從瘤胃內(nèi)取出已放置12小時的試驗日糧接種袋，倒入相應(yīng)的發(fā)酵罐中，每個罐內(nèi)加入10克固體接種物。固體接種后再向每個發(fā)酵罐內(nèi)加入一天的試驗日糧，然后密封發(fā)酵罐，啟動蠕動泵。向每個發(fā)酵罐內(nèi)以1.0kg/cm2的壓力通入CO2 2分鐘，此時集氣管與氣液分離罐之間的連接開關(guān)必須關(guān)閉，通氣完畢后，打開開關(guān)。4小時后，啟動攪拌系統(tǒng)。3.6 喂料按試驗需要的喂料量稱取顆粒日糧，并把每天的喂料量分成所需等分，根據(jù)需要可以每天飼喂2次到8次。每次喂料6個發(fā)酵罐共需要2分鐘，每次喂料后都要向發(fā)酵罐內(nèi)通入1分鐘CO2，維持厭氧。3.7 試驗周期一個完整

26、的試驗期為10天，適應(yīng)期7天，采樣期3天。試驗周期可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)，但是適應(yīng)期不得少于5天。3.8 收集樣品包括發(fā)酵罐內(nèi)采樣、集液瓶采樣、細(xì)菌分離和氣體采樣。 發(fā)酵罐內(nèi)采樣通過CO2進(jìn)口進(jìn)行。這種采樣的主要目的是研究NH3-N、VFA和PH等指標(biāo)隨時間變化的動態(tài)規(guī)律。采樣方法是用50ml注射器接10cm細(xì)塑料管從CO2進(jìn)口采樣，立即分析各種指標(biāo)。若不能立即分析樣品，須向樣品內(nèi)加入一滴飽和氯化汞溶液，并于低溫保存。 集液瓶采樣是大量采樣。目的在于研究各種營養(yǎng)成分變化的總量，包括NH3-N、VFA、TN和MCP，以及飼料各種成分的降解量。采樣方法是將集液瓶放在2水浴中，按與外流總液體量的1:100

27、向瓶內(nèi)加入飽和氯化汞溶液。在采樣期內(nèi)每天都將外流液混合均勻，從每個集液瓶各取混合均勻的樣品600ml，在-20冷凍保存，在采樣期結(jié)束時將每個發(fā)酵罐連續(xù)3天的樣品混合均勻，取2份500ml進(jìn)行冷凍干燥，并將干燥樣品經(jīng)1mm篩孔粉碎，密封于低溫下保存供以后分析。另取1份混合液50ml，-20保存，供測定總氮（TN），氨氮（NH3-N）和揮發(fā)性脂肪酸（VFA）。 細(xì)菌分離。在每個試驗期最后一天取樣結(jié)束后，用每個發(fā)酵罐內(nèi)的樣品分別收集細(xì)菌。方法是：先用兩層紗布過濾每個發(fā)酵罐的全部內(nèi)容物，然后把過濾液在1000g下離心10分鐘以除去飼料顆粒和原蟲，再將上清液在2000g下離心20分鐘，將上清液倒掉，并將

28、沉淀物（細(xì)菌細(xì)胞）重新懸浮于去離子水中第二次離心，然后將沉淀物冷凍干燥，得到的細(xì)菌細(xì)胞用于測定嘌呤含量。 氣體取樣。每天或全期試驗結(jié)束后用“U”形管調(diào)節(jié)水平面，使發(fā)酵氣體與外界大氣的壓力相等，然后讀出體積，并換算為標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下的體積。用注射器從集氣管上部的開關(guān)孔取樣，供分析氣體組成。第二節(jié) 消化道瘺管法給試驗動物安裝消化道瘺管的目的是從消化道的不同部位取得食糜樣品，以對飼料營養(yǎng)物質(zhì)在各段消化道的消化代謝進(jìn)行研究。對于反芻動物，飼料營養(yǎng)物質(zhì)的瘤胃降解和后段消化道消化的機(jī)制完全不同，前者是瘤胃微生物的發(fā)酵，后者是動物自身消化酶的消化，常需分開研究。因此消化道瘺管法也就成為反芻動物消化代謝研究的基本

29、方法。研究中經(jīng)常使用的瘺管有瘤胃瘺管、十二指腸瘺管和回腸瘺管。瘤胃瘺管根據(jù)研究目的可單獨安裝或與其它瘺管結(jié)合，十二指腸、回腸瘺管通常需結(jié)合安裝。本節(jié)主要介紹消化道瘺管的外科手術(shù)安裝方法及瘺管的制作。一. 瘺管的式樣 瘤胃瘺管：牛的瘤胃瘺管由硬質(zhì)塑料或橡膠制成，大口徑瘺管一般采用橡膠材料，小口徑瘺管可用60cm聚乙烯塑料棒車床加工而成。羊的瘤胃瘺管多用硬質(zhì)塑料制成。硬質(zhì)塑料瘤胃瘺管由底座、直管、旋套和瘺管蓋構(gòu)成，橡膠瘺管由上、下底座、直管和瘺管塞構(gòu)成。根據(jù)研究目的，瘤胃瘺管的內(nèi)徑可適當(dāng)增加或縮小，牛瘤胃瘺管的內(nèi)徑一般為515cm，羊的瘺管內(nèi)徑一般為48cm。瘺管壁不應(yīng)過厚，一般<0.5cm

30、。瘺管底座、旋套外徑約較直管外徑大2cm。 十二指腸和回腸瘺管：十二指腸瘺管分為過橋瘺管和T形瘺管。過橋瘺管由兩套瘺套管組成，分別安裝在斷開十二指腸的向心端和離心端。在體外由過橋套管將兩套瘺套管連接，十二指腸食糜由向心端瘺套管流出體外，再經(jīng)離心端瘺套管流入體內(nèi)。過橋瘺管的優(yōu)點是可以采到有代表性的十二指腸，缺點是不能長時間維持，無法用于持續(xù)數(shù)月的試驗研究。T型瘺管由粘合在一起的底片、直管和可分離的外夾片、圓形卡組成。底片和直管呈T型，并因此得名?；啬c瘺管與T型十二指腸瘺管相同。十二指腸和回腸瘺管用無毒的軟質(zhì)塑料或較硬的橡膠制成。牛用瘺管的直管外徑一般不超過2.5cm,羊用瘺管的直管外徑一般不超過

31、1.5cm。底片兩端為半橢圓形，寬與直管外徑相同，側(cè)翼長度牛用瘺管34cm，羊用瘺管23cm。 1 5 2 3 4 6 左圖 右圖圖 104 瘤胃瘺管式樣左圖為硬質(zhì)塑料瘺管，右圖為橡膠瘺管。1、瘺管蓋 2、直管 3、旋套 4、底座 5、上下底座 6、 瘺管塞 1 2 3 上圖 4 5 6 7 下圖圖 105十二指腸、回腸瘺管式樣上圖為十二指腸過橋瘺管，下圖為T型十二指腸和回腸；瘺管1 向心端瘺套管 2、離心端瘺套管 3、過橋套管 4、T型瘺管直管和底座 5、橡膠瘺管塞 6、外夾片 7、圓形卡二. 手術(shù)前的準(zhǔn)備 試驗動物的選擇與管理：應(yīng)用消化道瘺管法進(jìn)行試驗研究，考慮到試驗成本，一般盡量減少使用

32、的試驗動物數(shù)量，這就要求嚴(yán)格選擇試驗動物，確保獲得可靠的試驗結(jié)果。選擇之前應(yīng)充分考慮研究目的，確定選擇目標(biāo)。所選動物應(yīng)健康、無病、體況良好、性情溫順，最好選用有完整系譜、生長記錄的動物，嚴(yán)格遵守國家有關(guān)試驗動物的法律法規(guī)。 對于選定的試驗動物應(yīng)由研究人員提出飼養(yǎng)管理要求，最好由參與研究工作的人員飼養(yǎng)管理，其他人員管理時應(yīng)進(jìn)行必要的培訓(xùn)。管理人員對試驗動物的采食量、體重、生長情況及行為習(xí)性等應(yīng)做好記錄。 試驗動物的飼養(yǎng)不宜過于豐厚，以免過肥造成不必要的手術(shù)困難。手術(shù)前應(yīng)禁飼至少24小時，這對于防止手術(shù)過程發(fā)生瘤胃鼓氣、異物性肺炎等至關(guān)重要。 手術(shù)器械及場所消毒：對手術(shù)過程使用的器械、縫線、敷料、

33、手套、創(chuàng)巾、隔離衣等應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格消毒。一般應(yīng)采用高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度為121，此時蒸汽鍋的壓力約為1.05kg/cm2。不同物品的滅菌時間見表101。手術(shù)過程中需要對器械進(jìn)行快速消毒時，可采用5%來蘇兒浸泡、11000洗必太浸泡30min.、95%酒精燃燒滅菌等方法。手術(shù)室一般不少于40m2，通風(fēng)良好，設(shè)備齊全。每次手術(shù)后對地面、墻壁、手術(shù)臺、器械臺進(jìn)行徹底清洗，干燥后用2%來蘇兒噴霧消毒，或用福爾馬林高錳酸鉀或乳酸熏蒸消毒。手術(shù)前1小時打開紫外線燈進(jìn)行室內(nèi)照射。表101 1.05kg/cm2（121）下不同物品的滅菌時間物 品滅菌時間（min.）金屬器械、搪瓷器皿2030玻璃器皿、注射器20

34、橡膠、乳膠管、手套、藥液1520布料、敷料3040引自動物試驗外科手術(shù)學(xué)，中國農(nóng)業(yè)出版社 手術(shù)人員準(zhǔn)備：患有上呼吸道感染、皮膚化膿感染及剛處理過化膿感染創(chuàng)、進(jìn)行過直腸檢查和尸體剖檢的人員不得參與手術(shù)。手術(shù)人員進(jìn)入手術(shù)室前應(yīng)更換清潔的專用衣褲，并戴上手術(shù)帽和口罩，手術(shù)帽應(yīng)齊眉將頭發(fā)全部遮住，口罩應(yīng)遮住鼻孔。進(jìn)入手術(shù)室后首先進(jìn)行手、臂的清潔消毒。手術(shù)人員事先應(yīng)剪斷指甲并除去甲緣下的污垢?？捎梅试砬逑椿虬彼莺笙?，應(yīng)特別注意將指甲下緣、指間、指關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)和肘后清洗干凈。用清水沖洗時應(yīng)手朝上，使水自手向肘關(guān)節(jié)流下，直到?jīng)_洗干凈為止。手、臂清潔消毒的程序如下：肥皂清洗、消毒液浸泡法：氨水擦洗、酒精

35、浸泡法：肥皂清水（低堿肥皂，1020%）刷洗（2次，每次2min.）0.05%氨水2盆（在第一盆內(nèi)擦洗 3min.后，再在第二盆內(nèi)擦洗3min.）清水沖洗殘留肥皂無菌巾拭干無菌巾拭干0.1%新潔而滅，或0.1%消毒凈、0.02%洗必太，含1%有效碘的PVP碘浸泡（35min.）70%酒精浸泡（5min.）2%碘酊涂擦指甲緣、指間、腕部，70%酒精脫碘手、臂清潔消毒完畢后可穿戴滅菌的手術(shù)衣和手套。穿戴時應(yīng)避免手術(shù)衣和手套的外面，并遠(yuǎn)離其他人員，在空間較大的地方進(jìn)行。提起衣領(lǐng)，展開手術(shù)衣，將手術(shù)衣向空中輕擲，就勢將手臂伸入衣袖內(nèi)，由助手在身后拉緊并系扣。干戴手套時，先將滅菌滑石粉撲擦雙手，用右手提

36、起左手手套袖口并外翻，左手伸進(jìn)手套內(nèi)；用戴有手套的左手協(xié)助右手戴上手套；分別將手套翻轉(zhuǎn)部分壓住手術(shù)衣袖口，戴好手套。最后用生理鹽水沖去手套外的滑石粉。濕戴手套的方法與干戴法相似，戴前手套內(nèi)盛滿液體，戴完后用生理鹽水沖洗手套外的消毒液。 施術(shù)動物術(shù)部準(zhǔn)備：動物進(jìn)入手術(shù)室前應(yīng)去處術(shù)部及周圍的被毛。方法是用肥皂水清洗術(shù)部及周圍大面積的被毛，用毛巾拭干，之后將被毛剪斷、剃凈。使用脫毛劑除毛最好在手術(shù)前進(jìn)行。脫毛劑配方是68硫化鈉或硫化鋇水溶液或硫化鈉（硫化鋇）、氧化鋅、淀粉按122混勻，溫水調(diào)成糊狀。用棉球蘸上溶液涂擦脫毛部位，約5min.后被毛成糊狀，紗布擦去并用清水沖洗后即可。使用糊狀脫毛劑可以避

37、免脫毛劑的流散，使用時先將脫毛部位的被毛剪斷，用水濕潤后涂上脫毛劑，約10min.后擦去糊劑，用水沖洗。脫毛劑有臭味，有時可使脫毛部位充血，導(dǎo)致皮膚增厚，手術(shù)時出血增多。個別動物對除毛劑敏感。手術(shù)之前，用肥皂水洗凈術(shù)部皮膚，先用碘酊消毒，后用酒精脫碘，也可用新潔而滅、洗必太、PVP碘等消毒。消毒區(qū)域應(yīng)包括術(shù)部以外1015cm以上范圍，擦洗時從中心部位逐漸向外涂擦。術(shù)部消毒后鋪蓋創(chuàng)巾。三. 施術(shù)動物麻醉動物麻醉的方法分為局部麻醉和全身麻醉。局部麻醉由分為表面麻醉、浸潤麻醉、區(qū)域阻滯麻醉、傳導(dǎo)麻醉和硬膜外腔麻醉；全身麻醉又分為吸入麻醉和非吸入麻醉。進(jìn)行瘺管安裝手術(shù)，對羊通常實施全身麻醉，對牛通常實

38、施局部麻醉。 麻醉前用藥：麻醉前用藥（淺麻）的目的是減少全身麻醉的用藥量，增加安全范圍和減少腺體分泌、胃腸蠕動和防止嘔吐。可在麻醉前使用的藥物包括抗膽堿能藥物、鎮(zhèn)定劑、鴉片及非鴉片類鎮(zhèn)痛劑。各種麻醉前用藥的給藥途徑及參考劑量見表102。表102：麻醉前用藥的給藥途徑及參考劑量類型名稱給藥途徑參考劑量（mg/kg）牛綿羊山羊抗膽堿能阿托品IM、IV0.0040.30.3鎮(zhèn)靜劑氯丙嗪IM1.11.22.22.2氯丙嗪IV0.21.11.11.1三氟丙嗪IV1.12.22.2丙嗪IV1.1丙酰異丙嗪IV0.221.11.11.1安定IM0.551.10.551.1鎮(zhèn)痛劑龍朋IM0.10.20.10.

39、30.050.5龍朋IV0.03-0.10.05-0.10.01-0.5注：IM為肌肉注射；IV為靜脈注射。 綜合自動物實驗外科手術(shù)學(xué) 局部麻醉：常用局部麻醉劑包括酯類與酰胺類。普魯卡因、丁卡因、可卡因、氯普卡因等屬酯類；利多卡因、地布卡因、卡博卡因、布大卡因等屬酰胺類。表103：常用局部麻醉劑藥名藥效毒性使 用 濃 度作用時間（小時）別名表面麻醉浸潤麻醉傳導(dǎo)麻醉脊髓麻醉普魯卡因115以上0.25-1%25231左右奴佛卡因丁卡因102010200.50.1-0.33%0.1-0.33%23地卡因潘妥卡因的卡因四卡因利多卡因21以下與普魯卡因近似40.5-1%221.52賽洛卡因利格洛卡因表面

40、麻醉是將局麻藥直接用于粘膜表面，對粘膜產(chǎn)生麻醉作用。浸潤麻醉是將麻醉藥注射入手術(shù)部位組織，通過進(jìn)入麻醉感覺神經(jīng)，方法有直線浸潤、菱形浸潤、扇形浸潤和分層浸潤等。區(qū)域阻滯麻醉是將麻醉藥注射在手術(shù)部位的周圍及其基地部的組織內(nèi)，形成一個圓錐形、盆形或環(huán)狀包圍圈，阻滯圈內(nèi)組織痛覺的傳導(dǎo)。傳導(dǎo)麻醉則是將麻醉藥注射在神經(jīng)干周圍，麻醉該神經(jīng)干所支配的區(qū)域。硬膜外腔麻醉是將麻醉藥注射到脊髓硬膜外腔，阻滯脊神經(jīng)的傳導(dǎo)，使軀干的某一段產(chǎn)生麻醉。進(jìn)行牛的瘺管安裝手術(shù)時，可采用速眠新注射液（846合劑）按0.010.015mg/kg的劑量進(jìn)行全身淺麻醉，手術(shù)部位用0.8鹽酸普魯卡因進(jìn)行局部浸潤麻醉。 全身麻醉：全身麻

41、醉分為非吸入麻醉和吸入麻醉。非吸入麻醉是通過靜脈、皮下或肌肉注射麻醉藥物達(dá)到全麻的效果。吸入麻醉則是使動物通過呼吸道吸入揮發(fā)性麻醉劑達(dá)到全麻的效果。吸入麻醉的優(yōu)點是可以比較準(zhǔn)確地控制麻醉深度，麻醉后動物復(fù)蘇快；缺點是操作比較復(fù)雜，需要專門的麻醉裝置。可用于瘺管手術(shù)的非吸入麻醉藥包括巴比妥類藥物、龍朋、靜松靈等。巴比妥類藥物具有“葡萄糖效應(yīng)”，即給復(fù)蘇動物注射葡萄糖后會使動物再次進(jìn)入麻醉狀態(tài)。目前沒有龍朋的有效解毒藥，使用時應(yīng)特別注意劑量。靜松靈是我國合成的一種麻醉藥物，肌肉注射時牛的用量為0.20.6mg/kg，水牛為0.41mg/kg，羊為13mg/kg，馬鹿為25mg/kg，梅花鹿為13m

42、g/kg。吸入麻醉的常用麻醉劑有氟烷、甲氧氟烷、安氟醚、氧化亞氮等。氟烷的優(yōu)點是麻醉性強(qiáng)、誘導(dǎo)和復(fù)蘇快速平穩(wěn)、不刺激粘膜且具有擴(kuò)張支氣管的作用、不易燃易爆；缺點是肌松不充分、對肝臟有不良影響、過量時發(fā)生循環(huán)抑制。甲氧氟烷的麻醉效果類似于氟烷，但誘導(dǎo)和復(fù)蘇較慢，對肝、腎功能有顯著影響。安氟醚麻醉性能強(qiáng)、誘導(dǎo)復(fù)蘇平穩(wěn)、不刺激呼吸道粘膜、肌松效果良好，使用過程中禁用腎上腺素。氧化亞氮是一種毒性最小的吸入麻醉劑，單獨使用時麻醉作用弱，肌松效果差，常和其它全身麻醉劑或麻醉佐劑復(fù)合使用。四. 手術(shù)操作 手術(shù)部位：瘤胃瘺管部位在動物左側(cè)腹側(cè)部，軀干側(cè)中線稍上。十二指腸瘺管手術(shù)部位在動物右腹側(cè)部，最后肋骨后下

43、方，軀干側(cè)垂線的下三分之一段中點?；啬c瘺管手術(shù)部位在動物右腹側(cè)部，腰角前下方，軀干側(cè)垂線上三分之一段中點。 打開腹腔：在手術(shù)部位縱向切開皮膚，切口應(yīng)略大于瘺管底座直徑。在暴露的皮下筋膜上切一小口，用手術(shù)剪縱向剪開。逐層鈍性分離肌肉組織，暴露腹膜。用組織鑷或止血鉗提起腹膜，作一小切口，將食指和中指深入腹膜下，用手術(shù)剪沿指縫切開腹膜，暴露腹腔。 瘤胃瘺管安裝：打開腹腔即可暴露出瘤胃壁。選擇血管較少的區(qū)域從切口出拉出。用生理鹽水浸泡過的紗布塞緊瘤胃壁的四周，以防手術(shù)過程流出的瘤胃內(nèi)容物進(jìn)入腹腔造成腹膜炎。在擬切開胃壁的部位四周作橢圓形縫合，縫針應(yīng)穿入胃壁肌肉層，且注意不要穿透胃壁?？p合過程中不要拉緊

44、縫線，最后一針的位置與起始針基本平行，兩針之間應(yīng)預(yù)留一小缺口，以免發(fā)現(xiàn)胃壁切口過小時無法延長切口。用組織鑷或止血鉗提起胃壁，用手術(shù)刀或手術(shù)剪在胃壁上作一小切口。由助手提起胃壁，術(shù)者用手術(shù)剪沿橢圓形縫合方向切開胃壁。將瘤胃瘺管底座放入瘤胃內(nèi)，逐漸拉緊預(yù)埋縫線，拉緊時注意將胃壁切口邊緣內(nèi)翻向瘤胃內(nèi)。預(yù)埋縫線拉緊后打結(jié)，剪去線頭。沿瘺管四周胃壁再縫入一圈縫線，作荷包縫合。打開瘤胃瘺管蓋，用滅菌紗布塞住瘺管口。酒精消毒拉出的瘤胃壁，生理鹽水沖洗后將拉出的胃壁放入腹腔內(nèi)。在原切口后側(cè)相距約23cm處，相同方向作一小切口，切口大小應(yīng)略小于瘺管直管外徑。將止血鉗或持針鉗通過切口伸入腹腔，夾住瘺管壁，將瘺管從

45、小切口拉出。之后逐層縫合大切口，腹膜和肌肉層連續(xù)單純縫合，皮膚作結(jié)節(jié)或雙間斷縫合。如有必要，對小切口瘺管壁上下兩側(cè)的皮膚作結(jié)節(jié)縫合。縫合后用碘酊等消毒創(chuàng)口，大切口用四層滅菌紗布覆蓋。旋上瘺管旋套和瘺管蓋。如瘺管直徑較大，也可不作小切口，將瘺管直接在原切口處固定。 十二指腸瘺管安裝：打開腹腔，將手伸入腹腔找到真胃，沿真胃向后即可找到十二指腸。安裝瘺管部位應(yīng)距幽門5cm以上，以防瘺管底座側(cè)翼將幽門阻塞。將十二指腸一段由切口拉出，浸泡生理鹽水的滅菌紗布塞住切口。安裝“T”形瘺管時，在腸系膜附著的對側(cè)，沿腸管方向縫入一圈縫線，要求與與瘤胃瘺管相同。縱向切開腸管，置入瘺管底座，作雙層荷包縫合（同瘤胃瘺管

46、安裝）。在原切口后方作一略小于直管外徑的小切口，拉出瘺管，縫合切口，外夾片和圓形夾體外固定瘺管。作十二指腸過橋瘺管時，先安裝向心端瘺管，拉出向心端瘺管的小切口在原切口的前方，之后安裝離心端瘺管。切斷十二指腸，斷口處作內(nèi)翻荷包縫合?？p合切口，外夾片和圓形夾體外固定瘺管，過橋套管將兩側(cè)瘺管連接。 回腸瘺管安裝：回腸瘺管安裝與十二指腸基本相同。尋找回腸時，可先找到盲腸，之后沿盲腸找到回盲口?；孛た谑腔啬c與盲腸的連接處。安裝瘺管的部位應(yīng)離開回盲口。安裝十二指腸和回腸瘺管時，應(yīng)注意瘺管體外方向稍偏向地面，以方便食糜的采集。五. 瘺管動物的術(shù)后護(hù)理和維護(hù) 動物手術(shù)后應(yīng)盡快使其從麻醉狀態(tài)中恢復(fù)。術(shù)后一周內(nèi)每

47、天注射抗菌素（如青霉素、鏈霉素），并消毒創(chuàng)口。一周后可拆線。 保證充足的清潔飲水。喂給優(yōu)質(zhì)的柔軟粗飼料。尤其安裝十二指腸和回腸瘺管時，應(yīng)控制喂量。術(shù)后第一天喂量，羊50g左右，視情況每日遞增50g;牛250g左右，每日遞增250g。食欲恢復(fù)正常后開始恢復(fù)補(bǔ)飼精料。 一般術(shù)后1個月即可用于試驗。使用過程中應(yīng)定期清除瘺管四周被毛、清洗并消毒瘺管及皮膚。瘺管動物使用較多的實驗室應(yīng)配備電動毛剪（羊用或犬用剪均可），以方便維護(hù)。第三節(jié) 血管導(dǎo)管法血管導(dǎo)管法（cannulation of arteries and veins）是將很細(xì)的血管導(dǎo)管（catheters of blood vessels）一端插

48、入血管中，另一端引出體外以取得血液樣品的一種外科手術(shù)方法，廣泛應(yīng)用于各種動物，包括人的代謝研究中。與穿刺法比較，血管導(dǎo)管法對動物的刺激極小，不會導(dǎo)致穿刺采樣時通常出現(xiàn)的血糖升高、血鈣和其它血液成份的變化，因而取得的血液樣品更具代表性。對深部血管以及連續(xù)采集血樣時，必須采用血管導(dǎo)管法。一. 導(dǎo)管的材料與維護(hù) 材料：早期用聚乙烯管（polyethylene tubing）制作血管導(dǎo)管，缺點是容易扭結(jié)。之后采用醫(yī)用PVC管（polyvinyl tubing）制作。PVC管對組織的刺激較小，需用ethylenoxide消毒，且消毒后需放置至少24h以排出消毒時產(chǎn)生的有毒物質(zhì)。蒸汽消毒使PVC管的物理性

49、質(zhì)發(fā)生不利變化。特氟?。ň鬯姆蚁?，Teflon）和硅膠管也是制作血管導(dǎo)管的良好材料，其價格較高。 導(dǎo)管結(jié)構(gòu)及維護(hù)：血管導(dǎo)管一般由內(nèi)管、外套管、頂端磨平的注射針頭和單通閥組成。一端的內(nèi)管長于外套管，是插入血管內(nèi)的部分；另一段的內(nèi)管與磨平的針頭和單通閥連接，是引出體外的部分。外套管的作用是固定導(dǎo)管和防止內(nèi)管紐結(jié)。血管導(dǎo)管安裝好后，通過經(jīng)常地用11000或12000的肝素生理鹽水沖洗保持導(dǎo)管的通暢。即使如此，也經(jīng)常發(fā)生導(dǎo)管的阻塞，阻塞一般是在導(dǎo)管插入血管端的頭部形成了纖維蛋白瓣膜所致。此時可順利地由導(dǎo)管向血管內(nèi)注入液體，但因抽取血樣時形成的負(fù)壓使瓣膜蓋住導(dǎo)管頭部而不能抽出血樣。導(dǎo)管體外端的固定方法

50、有兩種。一是將導(dǎo)管用縫線固定在皮膚上，這種方法較為簡單，應(yīng)注意固定部位皮膚的消毒，以防引起感染。二是做一長方形厚布袋，將布袋用粘合劑粘在皮膚上，引出體外的導(dǎo)管至于布袋內(nèi)。該方法不易造成皮膚感染，但隨著被毛的生長，需要經(jīng)常剪除被毛，重新粘結(jié)布袋。 導(dǎo)管的種類及應(yīng)注意的問題：反芻動物營養(yǎng)研究中常用的血管導(dǎo)管包括頸靜脈導(dǎo)管、頸動脈導(dǎo)管、門靜脈導(dǎo)管、腸系膜靜脈導(dǎo)管、股動脈導(dǎo)管、股靜脈導(dǎo)管、右側(cè)瘤胃靜脈導(dǎo)管等。在安裝和使用各種血管導(dǎo)管時均需注意以下問題：3.1 可在同一側(cè)安裝股靜脈、股動脈導(dǎo)管。安裝之后很快形成側(cè)循環(huán)代償原有血液循環(huán)通道。3.2 靜脈導(dǎo)管較動脈導(dǎo)管容易發(fā)生阻塞。3.3 股動脈導(dǎo)管插入血管

51、內(nèi)的深度不應(yīng)超過腎動脈的分支處，否則導(dǎo)管頭部形成纖維蛋白膜或血凝塊并脫落時，有可能進(jìn)入腎臟導(dǎo)致梗死。3.4 為保持導(dǎo)管通暢，手術(shù)后12h內(nèi)應(yīng)用生理鹽水沖洗導(dǎo)管，之后每天沖洗一次。沖洗之后在導(dǎo)管內(nèi)注滿肝素生理鹽水。注入量以恰好注滿導(dǎo)管為宜，注意不要過量。盡管肝素在體內(nèi)僅能維持短時間的活性，過量注入有可能影響試驗結(jié)果。3.5 發(fā)生導(dǎo)管阻塞時，用細(xì)的彈性鋼絲有可能去處阻塞物，但操作時要注意嚴(yán)格消毒。3.6 導(dǎo)管的安裝手術(shù)和安裝后的維護(hù)要精心，以使導(dǎo)管維持較長的通暢時間。一般安裝后導(dǎo)管可使用數(shù)月。但即使精心手術(shù)和維護(hù)，仍有可能發(fā)生阻塞，應(yīng)準(zhǔn)備后備的試驗動物。3.7 安裝血管導(dǎo)管的試驗動物一般應(yīng)單欄飼養(yǎng)

52、，以防互相咀嚼導(dǎo)管。用導(dǎo)管向體內(nèi)灌注溶液時，應(yīng)注意保定好動物，防止動物嚼斷導(dǎo)管。3.8 安裝股動脈導(dǎo)管時應(yīng)特別注意結(jié)扎股動脈的側(cè)支血管，防止手術(shù)過程出血過多，造成術(shù)野模糊，難以安裝導(dǎo)管。二. 血管導(dǎo)管的制作血管導(dǎo)管的長短、粗細(xì)視插入的血管而定，可根據(jù)實驗室條件和可用材料制作。下面介紹Les Bruce使用的方法，制作的導(dǎo)管主要用于綿羊門靜脈、腸系膜經(jīng)脈和股動脈的導(dǎo)管安裝，初次制作導(dǎo)管時可作參考。 材料：直尺（約30cm），刀片，剪刀，注射器針頭（各種型號），小銼刀，1ml注射器，乳膠手套，鑷子，肥皂。硅膠：流體，用于粘合PVC管套和硅膠管。二甲苯：用于浸泡PVC管，使其擴(kuò)張。環(huán)己酮：用于粘合P

53、VC管套，使用時先將PVC管套好，用帶25號針頭的1ml注射器將環(huán)己酮少量注入到管間的縫隙中。強(qiáng)力萬能膠：用于粘結(jié)縫針于靜脈導(dǎo)管的內(nèi)套管上。 動脈導(dǎo)管制作：動脈導(dǎo)管式樣見圖106圖106 動脈導(dǎo)管式樣a醫(yī)用硅膠管（0.76mm i.d., 1.65mm o.d.） b1.2.0mm i.d, 3.0mm o.d. PVC管 b2.1.0mm i.d., 1.5mm o.d. PVC管 b3.1.0mm i.d., 2.0mm o.d. PVC管 c.19號針頭 d.單通閥e.縫線圖中為股動脈導(dǎo)管的尺寸，其它動脈導(dǎo)管的制作材料相同，尺寸可根據(jù)情況而定。制作時，準(zhǔn)備好單通閥、PVC管、硅膠管、各種

54、粘合劑。19號針頭截取頂端針尖、磨平備用。PVC管b2、b3剪成1cm左右小段，浸泡在盛有二甲苯的小玻璃瓶中。直尺量取114cm硅膠管和78cmPVC管b1。操作者戴乳膠手套，將硅膠管、PVC管b1用肥皂水清洗，清水沖洗并晾干。先在硅膠管上套前端的PVC管b3，再套上PVC管b1和后端PVC管b3，PVC管b1應(yīng)套住兩段PVC管b3。最后將PVC管b2套在硅膠管上， b2 與b3間留12mm的間隙。在套PVC管b2 、b3的部位事先涂少量硅膠，在PVC管b1和b3的間隙中注入少量環(huán)己酮粘合。待粘合劑凝固后，用縫針在后端PVC管b3上縫入約25cm縫線，注意縫針要穿入PVC管b3內(nèi)，但不能穿透硅膠管。將磨平的19號針頭插入硅膠管內(nèi)，單通閥與針頭連接。酒精沖洗消毒導(dǎo)管內(nèi)部，晾干后用紗布包裹并蒸汽消毒備用。 靜脈導(dǎo)管的制作：頸靜脈導(dǎo)管僅將約25cm硅膠管或1.5mm o.d.醫(yī)用PVC管與磨平針頭和單通閥連接即可，在導(dǎo)管15cm處作一標(biāo)記，為導(dǎo)管插入靜脈的長度。其它靜脈導(dǎo)管的式樣見圖107。圖107 靜脈導(dǎo)管式樣a醫(yī)用硅膠管（0.64mm i.d., 1.19mm o.d.） b1.1.5mm i.d, 2.10mm o.d. PVC管 b2.1.0mm i.d., 1.5mm o.d. PVC管 c.20號針頭 d.單通閥 e.縫線 f.9號縫針靜脈導(dǎo)管的制作方法