白血病細胞的免疫表達

1、白血病細胞的免疫表達白血病細胞的免疫表達研究方法研究方法n流式細胞術流式細胞術n電鏡電鏡n熒光顯微鏡熒光顯微鏡n免疫組織化學免疫組織化學流式細胞術流式細胞術(FCM)n流式細胞術白血病免疫分型是利用流式細胞術白血病免疫分型是利用熒光素熒光素標記的單克隆抗體標記的單克隆抗體（McAb）作分子探針，）作分子探針，多參數分析白血病細胞的細胞膜和細胞漿多參數分析白血病細胞的細胞膜和細胞漿或細胞核的免疫表型，由此了解被測白血或細胞核的免疫表型，由此了解被測白血病細胞所屬細胞系列及其分化程度。病細胞所屬細胞系列及其分化程度。n白血病形成的分化阻斷學說白血病形成的分化阻斷學說 B細胞分化各時期的細胞膜表現型

2、細胞分化各時期的細胞膜表現型流式細胞儀免疫分型實驗流式細胞儀免疫分型實驗1. 樣本采集、運輸、保存和操作樣本采集、運輸、保存和操作2. 樣本制備樣本制備 單細胞懸液的制備單細胞懸液的制備 分離靶細胞群體分離靶細胞群體 估細胞懸液估細胞懸液 細胞染色細胞染色3. 抗體組合的確定抗體組合的確定4.樣本獲取樣本獲取5.數據分析數據分析6.數據解釋數據解釋電鏡電鏡(EM)n電鏡不僅可以根據細胞超微結構發(fā)育狀況電鏡不僅可以根據細胞超微結構發(fā)育狀況提示幼稚細胞來源和功能狀態(tài)進行診斷，提示幼稚細胞來源和功能狀態(tài)進行診斷，也常常通過對紅系各階段細胞結構分析判也常常通過對紅系各階段細胞結構分析判斷紅系病態(tài)造血的

3、原因。斷紅系病態(tài)造血的原因。 急性未分化或微分化型髓系白血病急性未分化或微分化型髓系白血病(MO)nA、幼稚細胞外形圓形或卵圓形，直徑10um，核質比例高，核卵圓形，異染色質較多，核仁明顯，細胞器少，8000； B、核膜MPO反應陽性，8000 急性巨核細胞白血病急性巨核細胞白血病(AMKL)nA、小巨核細胞核不規(guī)則，有深切跡，異染色質較多，胞漿中可見sER構成管道網狀系統(tǒng)，顆粒少見，6000；B、核膜和內質網PPO陽性反應，無陽性顆粒，6000。 免疫組化免疫組化(IHC)n免疫組織化學免疫組織化學(IHC)以其方法簡單、特異性以其方法簡單、特異性強、設備要求低、形態(tài)學與免疫學結合等強、設備

4、要求低、形態(tài)學與免疫學結合等優(yōu)勢，得到各級醫(yī)院尤其是基層醫(yī)院的廣優(yōu)勢，得到各級醫(yī)院尤其是基層醫(yī)院的廣泛認可，成為其它方法不可完全取代的、泛認可，成為其它方法不可完全取代的、血液系統(tǒng)腫瘤病理診斷、鑒別診斷與分型血液系統(tǒng)腫瘤病理診斷、鑒別診斷與分型的常規(guī)檢測手段。的常規(guī)檢測手段。白血病細胞的免疫表達白血病細胞的免疫表達n急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)n急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)n急性髓系白血病 (AML)n慢性淋巴細胞白血病（CLL）n慢性髓細胞性白血?。–ML） 急性急性T淋巴細胞白血病淋巴細胞白血病(T-ALL)nCD7、 CD5、CD2為全T細胞抗原，基本表達于T細胞分化的各階段

5、 n常以CD45Ro和CD3作為檢測T細胞來源腫瘤較好的抗體組合 nCD4、CD8nTCR 、TCR基因重排nT淋巴細胞來源的腫瘤浸潤性較強，預后較差，并需要多種治療 急性急性B淋巴細胞白血病淋巴細胞白血病(B-ALL)nCD10(CALLA)區(qū)別ALL和AMLn與T細胞分化相同，在淋巴干細胞階段，只表達TDT，CD34等非系抗原；到B系祖細胞，出現CD19、CD79a及胞漿CD10表達；隨著B 細胞分化發(fā)育到逐漸成熟，TDT消失，相繼出現CD10、CD22、CD45RA、CD20表達，同時出現膜免疫球蛋白；淋巴細胞發(fā)育到終末漿細胞，除表達漿細胞標記抗體外，還表達胞漿免疫球蛋白。CD19、CD

6、45RA、CD79a。 急性非淋巴細胞白血病急性非淋巴細胞白血病(AML)根據FAB分型：nMO：有低的SSC和FSC。在CD45SSC圖上出現在淋巴細胞位置上，至少表達一個特異性標志如CD13或CD116，但MPO比CD13與CD33更靈敏。一般淋系標志陰性，但也可表達CD7或CD4。一般HLADR、CD34陽性，有些研究表明CD7與CD34共表達在AML且預后差。nM1：流式上M1與M0相似不易區(qū)分，M1一般CD13、CD33、HLADR，但CD34表達少于M0，可能表達部分CD15。nM2： M0與M1的主要區(qū)別是成熟度增加，blasts減少，CD15較M1較顯著，CD34弱于M1，CD

7、13有時表達強于CD33，多數病例HLADR （-）。CD45SSC圖顯示從髓系blast區(qū)至成熟骨髓細胞區(qū)的連續(xù)細胞帶，CD45SSC圖有助于確定blasts比例。nM3、高顆粒性，具較高的SSC，但CD45較成熟C少，多數情況HLADR（-）或表達減少，CD34少于M2、一般CD13弱（），可有CD2表達。nM4 與M5：兩型表型相似，但M4較M5表達更多的CD34（），較之M0、M1，M4與M5有更大的FSS和SSC，CD45SSC圖上，成熟C出現在單核區(qū)，重要的表型為CD13、CD33、HLADR、CD14和CD15，CD33可表達強于CD13，CD33（）、CD13（）、CD34 （

8、）很可能為M5，但只出現在少數病人中，部分M5可見CD56（）。nM6： M6較少見且特征不明顯，一般HLADR，CD34、CD13、CD33陽性，CD45SSC圖顯示主要為紅系成份。nM7： 巨核細胞白血病，在AML中少于1。一般CD61（Gpa）和/或CD41（Gpb-a）陽性，而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假陽性，可以用流式雙色分析在EDTA存在下，測Gpb/a與CD34以減少激活血小板的粘附。慢性淋巴細胞白血病（慢性淋巴細胞白血?。–LL）nB系抗原為CD19、CD20、CD43、CD79a與CD5共表達nCD23、CD13、CD15表達 慢性髓細胞性白血?。运杓毎园?/p>

9、血?。–ML）n由于慢性期顯著的細胞分化，在CD45SSC圖上除了髓系細胞占主導外，只顯示一個正常骨髓像，CML可確診，CML起病與發(fā)展相對緩慢，慢性期的持續(xù)1年左右最終發(fā)展為加速期和急變期。流式細胞技術對急變期亞型的診斷具有極高價值。直接影響到治療效果。n急變期CML主要表現為髓系，偶為淋系，髓性急變可表現出多種形態(tài)包括未分化細胞。淋性急變具典型形態(tài)特征，為CD10B祖細胞ALL極少有T細胞型ALL。 流式細胞儀免疫分型實驗流式細胞儀免疫分型實驗1. 樣本采集、運輸、保存和操作樣本采集、運輸、保存和操作2. 樣本制備樣本制備 單細胞懸液的制備單細胞懸液的制備 分離靶細胞群體分離靶細胞群體 估細胞懸液估細胞懸液 細胞染色細胞染色3. 抗體組合的確定抗體組合的確定4.樣本獲取樣本獲取5.數據分析數據分析6.數據