芎冰滴丸的藥學(xué)研究

1、芎冰滴丸的藥學(xué)研究研究生姓名：888指導(dǎo)教師：888888888888芎冰滴丸的藥學(xué)研究正文川芎揮發(fā)油的提取工藝研究川芎揮發(fā)油的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性研究芎冰滴丸的研制芎冰滴丸的質(zhì)量評價(jià)研究初步穩(wěn)定性試驗(yàn)引言選題目的選題意義研究總體思路選題依據(jù)芎冰滴丸的藥學(xué)研究1引言 1.1選題目的 偏頭痛在祖國醫(yī)學(xué)中屬于“頭風(fēng)”、“腦風(fēng)”、“偏頭風(fēng)”范疇，是一種特殊類型的發(fā)作性顱內(nèi)外血管運(yùn)動(dòng)和神經(jīng)功能失調(diào)引起的慢性復(fù)發(fā)性疾病，主要表現(xiàn)為一側(cè)或雙側(cè)頭部搏動(dòng)性疼痛，并伴有惡心嘔吐等植物神經(jīng)癥狀。偏頭痛發(fā)病率較高，且反復(fù)發(fā)作、難以治愈，影響患者的正常生活和工作，所以治療該病一直是中醫(yī)學(xué)界的重要研究課題之一。芎冰滴丸的藥

2、學(xué)研究目前，中醫(yī)大多在辨證論治的基礎(chǔ)上進(jìn)行治療，取得了較好的療效，但普通劑型難于適應(yīng)現(xiàn)代社會(huì)人們較快的生活節(jié)奏。選擇川芎揮發(fā)油和冰片配伍組方，通過對該處方制劑工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及體外評價(jià)的研究，以期為臨床提供一種療效確切、服用方便的中藥復(fù)方滴丸制劑，能迅速緩解疼痛，減輕患者痛苦，更好地為人類健康服務(wù)。同時(shí)，通過對川芎揮發(fā)油及其新劑型的研究，使川芎的系列產(chǎn)品能達(dá)到整合資源，綜合利用的目的。芎冰滴丸的藥學(xué)研究1.2選題意義1.2.1臨床需要偏頭痛是一種臨床常見的多發(fā)病，因本病發(fā)病率較高，且反復(fù)發(fā)作，遷延難愈，疼痛劇烈，往往給患者帶來極大痛苦，嚴(yán)重影響其日常生活與工作，因而找尋對偏頭痛行之有效的防治方法

3、是一項(xiàng)重要的課題。芎冰滴丸的藥學(xué)研究1.2.2市場需要 近三年來，中成藥治療偏頭痛的研究有了新的發(fā)展。但很多品種開發(fā)時(shí)間較早，不時(shí)有副作用發(fā)生的報(bào)道，在臨床上的應(yīng)用受到一定的限制。本課題采用川芎揮發(fā)油和冰片所制的芎冰滴丸具有起效快、服用劑量小的優(yōu)點(diǎn)，可適應(yīng)臨床長期多次用藥的要求，具有良好的市場開發(fā)前景。芎冰滴丸的藥學(xué)研究1.2.3中藥制劑現(xiàn)代化的需要滴丸是由藥物與基質(zhì)加熱熔化后，滴入不相混溶的冷卻液中，收縮冷凝成丸的一種速效劑型，具有表面積大、溶出速度快、胃腸刺激小、服用方便等優(yōu)點(diǎn)。它可提高難溶性藥物的生物利用度，還能容納較多的液體，故易于使液體藥物轉(zhuǎn)變成固體制劑。針對本課題的目的，確定選用固

4、體分散技術(shù)將川芎揮發(fā)油與冰片制成滴丸的形式。發(fā)揮速效作用，以適應(yīng)中醫(yī)急癥治療的需要。芎冰滴丸的藥學(xué)研究1.3選題依據(jù)1.3.1中醫(yī)藥對于偏頭痛病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)歷代醫(yī)家關(guān)于偏頭痛的病因病機(jī)論述頗多，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為風(fēng)、火、痰、瘀是致病的重要因素。風(fēng)寒侵襲、脈絡(luò)瘀阻；情志不遂、氣滯血瘀；脾失健運(yùn)、痰濁阻竅；肝腎陰虛、肝火上擾為其病機(jī)。氣血陰虧，腦竅失養(yǎng)也是發(fā)病的一個(gè)關(guān)鍵。由此可以看出，偏頭痛的發(fā)病常為虛實(shí)挾雜，即有風(fēng)、火、痰、瘀作為致病要因，又有氣虛、血虧、肝腎不足作為內(nèi)在病理基礎(chǔ)。偏頭痛的病因雖有種種不同，但其發(fā)病機(jī)理確有共同之處，即所謂“不通則痛”，但其程度及性質(zhì)上又各有其特征和差異，這為臨床辨證論

5、治提供了依據(jù)。根據(jù)以上分析，確定本處方主治從外感風(fēng)邪、腦絡(luò)瘀阻型偏頭痛著手。芎冰滴丸的藥學(xué)研究1.3.2處方來源、組成及分析1.3.2.1處方來源川芎味薄氣雄，性善疏通，其祛風(fēng)散寒止痛、理氣活血通絡(luò)之功頗佳，又秉升散之性，能上行頭目，下行血海，為治諸經(jīng)頭痛之要藥。通過配伍，可用于風(fēng)寒、風(fēng)熱、風(fēng)濕、血瘀、血虛等各種頭痛。以其為主藥，治療病久風(fēng)寒入絡(luò)、寒凝血瘀之頑固性的偏正頭痛和三叉神經(jīng)痛，更能起到意想不到的療效。冰片味辛、苦，微寒，歸心、脾、肺經(jīng)。本草綱目記載：冰片具“通諸竅、散郁火”之功。中醫(yī)理論認(rèn)為，冰片“芳香走竄”，“獨(dú)行則勢弱、佐使則有功”。冰片與川芎配伍可明顯減輕缺血再灌注腦組織含水量

6、和細(xì)胞間質(zhì)水腫和神經(jīng)細(xì)胞的損傷，對腦缺血再灌注所致腦組織超微結(jié)構(gòu)的破壞也有明顯的保護(hù)作用。芎冰滴丸的藥學(xué)研究兩者配伍使用才能增強(qiáng)川芎對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。故確定了本課題的處方藥物為川芎和冰片，由于川芎揮發(fā)油體現(xiàn)了川芎辛溫芳香的性味，同時(shí)有類似川芎的祛風(fēng)活血止痛之功效，故最終確定了制劑處方為：川芎揮發(fā)油、冰片。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究1.3.3處方中藥物的現(xiàn)代研究情況1.3.3.1川芎現(xiàn)代藥理研究證明川芎揮發(fā)油中的藁本內(nèi)酯可抑制血管平滑肌收縮，降低血壓，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解痙、抗驚厥等作用，被認(rèn)為是治療偏頭痛的物質(zhì)基礎(chǔ)。1.3.3.2冰片冰片含有龍腦和異龍腦。它在胃腸道吸收迅速，極易透過血腦屏

7、障進(jìn)入腦內(nèi)，同時(shí)冰片可開放血腦屏障，促進(jìn)某些水溶性大分子物質(zhì)和藥物透過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)。（為具有“佐使之功”的物質(zhì)基礎(chǔ)？）藥理作用方式可能與通過調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量達(dá)到穩(wěn)態(tài)平衡有關(guān)。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究1.4研究總體思路以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，根據(jù)川芎揮發(fā)油和冰片主要有效成分的理化性質(zhì)和藥理作用，借鑒現(xiàn)代制劑成熟的研究方法、技術(shù)、思路與手段，進(jìn)行中藥復(fù)方滴丸的研制。其研究技術(shù)路線見下圖。芎冰滴丸的藥學(xué)研究川芎冰片制劑處方成型工藝揮發(fā)油提取工藝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)定性脫水工藝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 穩(wěn)定性 成品 芎冰滴丸的藥學(xué)研究2正文2.1川芎揮發(fā)油的提取工藝研究川芎揮發(fā)油是治療頭痛的主要有效成分，而

8、川芎揮發(fā)油中主要含有川芎總酞內(nèi)酯類成分，這些成分的含量占藥材的1%3%左右。川芎總酞內(nèi)酯類成分中以藁本內(nèi)酯和川芎內(nèi)酯為主，藁本內(nèi)酯的含量可達(dá)50%左右，因此在對川芎揮發(fā)油進(jìn)行提取工藝研究過程中以揮發(fā)油得率和藁本內(nèi)酯的含量為指標(biāo)，考察了共水蒸餾法、重蒸餾法、石油醚提取法、乙醇提取法等幾種方法，以期找到一種提取效率高、且藁本內(nèi)酯含量高的提取方法。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.1.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1.2.1藥材產(chǎn)地的確定川芎是四川的道地藥材，近年來，國內(nèi)許多地區(qū)都開展了川芎生長、撫育及引種技術(shù)的研究，造成了川芎藥材質(zhì)量參差不齊的現(xiàn)狀，為了保證成品質(zhì)量的穩(wěn)定性和均一性，對不同產(chǎn)地的川芎提取的揮發(fā)油的含量

9、進(jìn)行了測定，以確定最佳的產(chǎn)地。采用中國藥典2005年版一部附錄XD揮發(fā)油測定法第二法進(jìn)行測定。結(jié)果見表1。芎冰滴丸的藥學(xué)研究表1 不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)油含量測定結(jié)果批次產(chǎn)地藥材量（g）揮發(fā)油量（ml）藥材中揮發(fā)油含量（%）（ml/g）平均值1都江堰60.0050.61.001.052都江堰60.0020.81.333都江堰59.9980.50.834彭州60.0030.40.670.955彭州59.9990.61.006彭州60.0000.71.177崇州60.0010.30.500.728崇州59.9980.40.679崇州60.0060.61.00 根據(jù)上述測定結(jié)果，都江堰產(chǎn)地川芎藥材中揮發(fā)油含量

10、相對于崇州和彭州更高，故選擇都江堰川芎作為實(shí)驗(yàn)用藥材。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.1.2.2揮發(fā)油提取方法的比較研究（1）提取方法 共水蒸餾法 重蒸餾法 石油醚提取法 乙醇提取法（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果 對不同提取方法所得的揮發(fā)油品質(zhì)進(jìn)行比較，結(jié)果見表2。芎冰滴丸的藥學(xué)研究表2 不同提取方法所得揮發(fā)油的比較結(jié)果實(shí)驗(yàn)方法外觀性狀提取時(shí)間（h）得油率（%）藁本內(nèi)酯含量（%）共水蒸餾法金黃色的油狀物180.3858.3重蒸餾法金黃色的油狀物240.4253.8有機(jī)溶劑提取法黃褐色油狀物243.023.6中性乙醇提取法棕黃色油狀物241.032.8上述試驗(yàn)結(jié)果表明，采用共水蒸餾所得揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯含量最高，而有機(jī)溶

11、劑等提取法純度過低且有溶劑殘留等問題，故選擇共水蒸餾法進(jìn)行提取。芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.1.2.3共水蒸餾法提取川芎揮發(fā)油最佳工藝的確定以揮發(fā)油得率和藁本內(nèi)酯含量為指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)對川芎揮發(fā)油提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)選，為川芎揮發(fā)油的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。（1）實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)影響揮發(fā)油提取的因素，選取浸泡時(shí)間（A）、提取時(shí)間（B）、加水量（C）作為考察因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，以揮發(fā)油的得率和藁本內(nèi)酯含量為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)。因素水平表見表3，試驗(yàn)結(jié)果及分析見表4和表5。芎冰滴丸的藥學(xué)研究表3 因素水平表水平ABCD浸泡時(shí)間（h）提取時(shí)間（h）加水量（倍）空白16682

12、128103181012表4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果序號(hào)ABCD藁本內(nèi)酯含量（%）揮發(fā)油收得率（%）評分1111155.400.3079.62122252.100.3873.043133355.490.3573.984212353.290.4186.485223157.060.3988.66231255.490.4591.937313260.320.49100.008321354.390.4691.659332158.690.4393.48j226.62266.08263.18261.68j267.01253.29253.00264.97j285.13259.39262.58252.11R58.5

13、112.7910.1812.86芎冰滴丸的藥學(xué)研究表5 方差分析表方差來源離差平方和（SS）自由度（V）均方（MS）FPA598.122299.0620.10*B27.28213.640.92C21.75210.880.73D29.75214.88 從以上方差分析結(jié)果可以看出：A因素有顯著的影響，影響因素ABC；且A3、B1、C1為佳，即最佳工藝為：加8倍量的水，浸泡18小時(shí)，共水蒸餾提取6小時(shí)。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（3）驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為了驗(yàn)證上述結(jié)果的準(zhǔn)確性，以保證提取工藝的合理可行，稱取川芎藥材3份，每份500g，按上述確定的工藝條件，安排重復(fù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。表6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果方案試驗(yàn)號(hào)油

14、中藁本內(nèi)酯含量（%）揮發(fā)油得率（%）A3B1C1158.030.47259.210.45358.490.48 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：此共水蒸餾法工藝穩(wěn)定，具有重現(xiàn)性和可操作性。因此，最后確定實(shí)驗(yàn)方案為A3B1C1 。即：加8倍量的水，浸泡18小時(shí)，共水蒸餾提取6小時(shí)。芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.1.2.4揮發(fā)油脫水工藝的研究采用共水蒸餾法提取的川芎揮發(fā)油中含有一定量的水分，對川芎揮發(fā)油的脫水工藝進(jìn)行了研究表7 揮發(fā)油脫水工藝研究結(jié)果（n=3）處理方法含水量（%）揮發(fā)油得率（%）藁本內(nèi)酯含量（%）未處理前8.28100.0058.03冷凍分離1.0192.0361.29乙醚1.0589.3760.35石油

15、醚（3060）1.2191.5659.97醋酸乙酯0.9585.1761.98 上述試驗(yàn)結(jié)果表明，采用冷凍分離法和石油醚萃取法所得揮發(fā)油損失都較小，且藁本內(nèi)酯含量均較高。冷凍分離法為物理方法，簡便，易行，不會(huì)使有機(jī)溶劑殘留，不加熱，故最終選擇將其作為脫水方法進(jìn)行川芎揮發(fā)油的脫水處理。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.2川芎揮發(fā)油的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性研究 2.2.2.1川芎揮發(fā)油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究（1）揮發(fā)油中功能基的鑒定： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，鑒定出揮發(fā)油中含有酚類，醛類，內(nèi)酯類及不飽和化合物。（2）物理常數(shù)測定 相對密度 暫定為0.89171.0899。 折光率 暫定為1.36001.6641。 pH值 暫定為3.

16、834.67。 酸值 暫定酸值為24.830.4。 皂化值 暫定為201245。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（3）川芎揮發(fā)油的TLC鑒別 取本品10mg，加甲醇20ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材1g，加乙醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml使溶解，作為對照藥材溶液。取藁本內(nèi)酯對照品適量，加甲醇使溶解作為對照品溶液，照薄層色譜法（附錄B）試驗(yàn)，以正己烷-醋酸乙酯（9:1）和石油醚-醋酸乙酯（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見圖4和圖5。圖4 川芎揮發(fā)油

17、的TLC鑒別 圖5川芎揮發(fā)油的TLC鑒別 展開劑：石油醚-醋酸乙酯（9：1） 展開劑：正己烷-醋酸乙酯（9:1）1藁本內(nèi)酯對照品；2川芎對照藥材；3、4、5川芎揮發(fā)油 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5芎冰滴丸的藥學(xué)研究（4）川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量測定色譜條件色譜柱：Kromasil C18柱（4.6mm250mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（75：25）；流速：1ml/min；檢測波長：280nm；靈敏度：0.01AUFS。在上述色譜條件下藁本內(nèi)酯與其他組分均能達(dá)到基線分離（結(jié)果見圖6、圖7）。圖6 藁本內(nèi)酯對照品的HPLC圖圖7 川芎揮發(fā)油的HPLC圖譜芎冰滴丸的藥學(xué)研究標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取藁

18、本內(nèi)酯對照品約20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，再精密吸取1ml置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得（每1ml含32.032g藁本內(nèi)酯）。分別吸取1、2、4、6、8、10l進(jìn)樣，測定，記錄色譜圖，測定峰面積，結(jié)果見下表。并以峰面積A對進(jìn)樣量C（g）回歸得回歸方程為：A=12684557.6513C-47471.5452，r=0.9999，結(jié)果見表13和圖8。 表13 進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系 進(jìn)樣量(g)0.0320320.0640640.1281280.1921920.2562560.32032峰面積380239770058 圖8 線性關(guān)系圖 測定結(jié)果表明，藁本

19、內(nèi)酯進(jìn)樣量在0.032032g0.320320g內(nèi)呈良好線性關(guān)系。芎冰滴丸的藥學(xué)研究精密度實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明，該儀器精密度良好。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該測定方法重復(fù)性良好。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：供試品溶液峰面積值在8小時(shí)內(nèi)無顯著性變化，可滿足測定要求。加樣回收率實(shí)驗(yàn)表明該含量測定方法合理可行。 樣品含量測定表18 川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量測定結(jié)果（n=3）批次藁本內(nèi)酯含量（%）平均值（%）161.64261.9161.86362.03測定結(jié)果表明：三批樣品的測定結(jié)果表明，川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯含量穩(wěn)定，暫定其標(biāo)示量為61.86%，樣品的含量以標(biāo)示量計(jì)應(yīng)在10%以內(nèi)，即55.67%68.05%。芎冰滴丸

20、的藥學(xué)研究2.2.2.2川芎揮發(fā)油的穩(wěn)定性研究在避光、不避光、室溫、20、4、37、密閉、不密閉等條件下取揮發(fā)油進(jìn)行留樣觀察，在不同時(shí)間（1天、15天、30天、60天、90天）精密取樣，并進(jìn)行含量測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表。 表19 川芎揮發(fā)油的穩(wěn)定性測定結(jié)果（n=3） 貯存條件貯存時(shí)間（d）性狀藁本內(nèi)酯含量（%）未貯存0金黃色、澄明油狀液體61.64室溫不避光密閉1金黃色、澄明油狀液體59.1115黃棕色、渾濁油狀液體45.2830棕褐色、渾濁油狀液體39.2960棕褐色、渾濁油狀液體37.3390棕褐色、渾濁油狀液體35.25室溫避光密閉1金黃色、澄明油狀液體59.1815淺黃棕色、渾濁油狀液體5

21、2.3930黃棕色、渾濁油狀液體46.8860深黃棕色、渾濁油狀液體44.6890棕褐色、渾濁油狀液體43.304避光密閉1金黃色、澄明油狀液體59.1715金黃色、澄明油狀液體57.9830金黃色、澄明油狀液體55.3360淺黃棕色、稍有渾濁油狀液體54.0190淺黃棕色、稍有渾濁油狀液體52.64芎冰滴丸的藥學(xué)研究4避光不密閉1金黃色、澄明油狀液體59.0115黃棕色、稍有渾濁油狀液體31.1030棕褐色、渾濁油狀液體28.0560棕褐色半固體24.2190棕褐色半固體20.6537避光密閉1金黃色、澄明油狀液體59.1815棕褐色、渾濁油狀液體42.2830棕褐色、渾濁油狀液體34.51

22、60棕褐色、渾濁油狀液體31.2190棕褐色、渾濁油狀液體30.1720避光密閉1金黃色、澄明油狀液體61.1315金黃色、澄明油狀液體61.0130金黃色、澄明油狀液體60.4560金黃色、澄明油狀液體60.0890淺黃棕色、澄明油狀液體58.33 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果對川芎揮發(fā)油的不同影響因素進(jìn)行分析，結(jié)果見圖9圖11。芎冰滴丸的藥學(xué)研究圖9 光線對川芎揮發(fā)油穩(wěn)定性的影響圖10 空氣對川芎揮發(fā)油穩(wěn)定性的影響圖11 溫度對川芎揮發(fā)油穩(wěn)定性的影響由此可見，為了保證川芎揮發(fā)油的質(zhì)量和制劑臨床療效，應(yīng)將其置于-20避光、密閉條件下保存，同時(shí)可選用不透光的棕色塑料瓶進(jìn)行包裝。芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.3 芎

23、冰滴丸的研制2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.3.2.1藥物配伍劑量的確定本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了川芎與冰片配伍的三個(gè)劑量組進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)如下：（1）熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)取雌性小鼠，于給藥后15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘，分別在恒溫鎮(zhèn)痛儀上測痛閾值，如60秒仍無反應(yīng)，其痛閾值以60秒計(jì)算。結(jié)果見表20。芎冰滴丸的藥學(xué)研究表20 川芎揮發(fā)油與冰片配伍對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（熱板法）（xs）組別給藥前痛閾值（s）給藥后不同時(shí)間痛閾值（s）15min30min45min60min空白對照組12.0354.47111.8663.90712.1224.88611.7502.67311.4565.213低劑量組12.

24、7443.59014.9627.25014.8615.36216.4744.84817.4645.008中劑量組13.5865.56817.2955.02918.6876.63122.89413.52219.7518.216高劑量組12.3113.88815.9292.99717.7554.86823.0129.00923.62214.566注：與給藥前相比P0.05、P0.01。 從上表可知，川芎揮發(fā)油與冰片配伍各劑量組給藥后15min60min不同時(shí)間均可提高小鼠的痛閾值，顯示其具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（2）扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)表21 川芎揮發(fā)油與冰片配伍對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（扭體法）

25、（xs）組別動(dòng)物數(shù)（只）給藥后扭體次數(shù)（次/30min）鎮(zhèn)痛抑制率（%）P值空白對照組1047.9008.412-低劑量組1022.40019.77853.240.05中劑量組1016.0009.70766.600.05高劑量組1020.00013.92058.250.01 從上表可知，川芎揮發(fā)油與冰片配伍的各劑量組均可顯著減少小鼠的扭體次數(shù)，與對照組相比有顯著差異，提示該藥具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。 根據(jù)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇川芎、冰片的用量初步定為：川芎揮發(fā)油0.67mg/kg，冰片0. 22mg/kg，即成人（60kg）一日用量為川芎揮發(fā)油40mg、冰片13mg。芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.3.2.2

26、 滴丸的制備（1）處方中藥材的提取 采用共水蒸餾法提取川芎揮發(fā)油，再采用冷凍分離法進(jìn)行脫水處理。（2）實(shí)驗(yàn)步驟 與冰片按3：1的比例混勻后加一定量的基質(zhì)熔融后滴制。 評價(jià)方法：以滴制的難易（與基質(zhì)熔融后的粘稠度等有關(guān)），圓整度，溶散時(shí)限，丸重差異，硬度，光潔度等為指標(biāo)進(jìn)行考察，在不同的情況下選擇不同的指標(biāo)。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（3）冷卻劑的選擇 分別用植物油，液體石蠟，甲基硅油及后兩者的混合液做冷卻劑，結(jié)果見表22。 表22 冷卻劑的選擇冷卻劑圓整度（%）（n=20）丸重差異（%）（n=20）光潔度植物油77.612.1較差甲基硅油90.56.5較差液體石蠟85.77.8較差液體石蠟：甲基硅油混

27、合液（2：1）87.85.8較好液體石蠟：甲基硅油混合液（1：1）92.24.5較好液體石蠟：甲基硅油混合液（1：2）88.66.2較好結(jié)果表明，用液體石蠟與甲基硅油1：1的混合液為冷卻劑較好。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究（4）藥物與基質(zhì)比例范圍的篩選以PEG4000作基質(zhì)，將其熔融后與藥物混合均勻后，滴入80cm長的冷卻柱中，以滴丸基本能成型為依據(jù)，結(jié)果見表23。 表23 藥物與基質(zhì)比例的篩選 藥物：基質(zhì) 圓整度（%）（n=20）丸重差異（%）（n=20）溶散時(shí)限（min）1：191.98.131：1.588.37.541：294.84.84.51：394.14.75經(jīng)綜合分析，篩選出藥物與基質(zhì)的最

28、低配比為1：2 。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（5）成型處方篩選處方設(shè)計(jì)在藥物與基質(zhì)最低配比的基礎(chǔ)上，以PEG6000替換PEG4000，設(shè)計(jì)出一系列不同配比的復(fù)合基質(zhì)處方，見表24。 表24 成型處方組成組成處方號(hào)藥物PEG4000PEG60001120211.50.53111410.51.55102 按上述表稱取各處方的藥物和基質(zhì)，制成滴丸，以其圓整度，溶散時(shí)限，影響滴丸滴制時(shí)的難易程度及滴丸的硬度為考察指標(biāo)，結(jié)果見表25。表25 處方篩選結(jié)果處方號(hào)圓整度（%）溶散時(shí)限（min）滴制難易硬度192.23易較差291.63.5較易較差392.94較易較好487.36.5較難較好582.58難好由表可看

29、出，隨著PEG6000量的增加，雖硬度得到改善但其它指標(biāo)均有下降趨勢，綜合分析后選取PEG4000與PEG6000二者以1：1的比例混合。芎冰滴丸的藥學(xué)研究吸收劑的選擇 由于方中含大量揮發(fā)油，為使滴丸硬度增加加入吸收劑。所加吸收劑種類及比例見表26。 表26 吸收劑的選擇吸收劑（%）圓整度（%）滴制難易硬度磷酸氫鈣(10)89.5較易較好硫酸鈣(10)90.2較易較好碳酸鈣(10)89.6較易較好淀粉(5)91.5易較好淀粉(10)93.4易好淀粉(15)92.8較易好糊精(10)93.0易較好淀粉(5),糊精(5)92.3易好-環(huán)糊精(10)93.2較易好注：吸收劑的比例為占揮發(fā)油的比例 結(jié)

30、果表明，加入吸收劑后能提高滴丸硬度。以淀粉為吸收劑的滴丸各指標(biāo)較好，且價(jià)廉易得，最終選擇淀粉為吸收劑，加入量為10% 。芎冰滴丸的藥學(xué)研究抗氧劑的選擇因揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯在室溫條件下不穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)放置一段時(shí)間后，滴丸顏色變淺，說明有效成分已有所變化。為提高滴丸的穩(wěn)定性加入一系列抗氧劑，并對揮發(fā)油的有效成分藁本內(nèi)酯的含量變化進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表27。表27 抗氧劑的考察抗氧劑（%）外觀藁本內(nèi)酯含量（%）0淺黃色52.35Na2S205 （2）淺黃色78.26Vit E （0.1）黃色98.88Vit C （0.5）黃色85.92C9H10O5 （0.5）黃色92.35 結(jié)果表明，加入抗氧劑

31、后能有效提高藁本內(nèi)酯含量，保證滴丸的質(zhì)量。維生素E（Vit E）效果最好，故選用0.1%的Vit E為抗氧劑。 本實(shí)驗(yàn)篩選出滴丸最佳成型處方是藥物（含占揮發(fā)油10%的淀粉和0.1% Vit E）與基質(zhì)比例為1:2，基質(zhì)為PEG4000與PEG6000（1:1）的混合物。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（6）成型工藝研究藥物的加入順序?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)，藥物與基質(zhì)混合的順序?qū)Φ瓮栀|(zhì)量有一定影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表28。 表28 藥物與基質(zhì)混合順序的考察混合順序圓整度（%）(n=20)丸重差異（%）(n=20)滴制難易基質(zhì)與藥物一起熔融90.68.9較難基質(zhì)熔融后加入藥物95.33.8易 結(jié)果表明，藥物在基質(zhì)熔融后加入較理想。

32、藥物與基質(zhì)熔融溫度的考察實(shí)驗(yàn)中，對藥物與基質(zhì)混合熔融的溫度進(jìn)行了考察。結(jié)果見表29。 表29 藥物與基質(zhì)熔融溫度的考察熔融溫度（）圓整度（%）(n=20)丸重差異（%）(n=20)滴制難易7094.24.9易8092.64.5較易結(jié)果表明，藥物在70時(shí)圓整度較好，丸重差異相差不大，為避免溫度過高對藥物成分的影響，故選擇在藥物與基質(zhì)的混合熔融溫度為70。芎冰滴丸的藥學(xué)研究滴制溫度、冷卻柱長、滴口徑的選擇 經(jīng)預(yù)試，確定滴丸的滴距為5cm，滴速為/min。 30滴影響滴丸成型工藝的因素除藥物、基質(zhì)本身外，滴制溫度、冷凝柱長短、滴口徑(丸重)對成型工藝的穩(wěn)定、可控和易行有著重要影響，故用正交試驗(yàn)法L9

33、(34)，以滴制溫度(A)、冷卻柱長(B)、滴口徑(C)3因素選用表安排實(shí)驗(yàn)，滴丸的優(yōu)選方案為A3B1C1，并通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明較優(yōu)芎冰滴丸的藥學(xué)研究冷卻時(shí)間的考察 按優(yōu)選的藥物與基質(zhì)的配比及滴制條件進(jìn)行滴制，經(jīng)冷卻柱緩慢下降后冷凝成型，分別冷凝30min，60min，90min，120min后，取出，用石油醚洗去冷凝液，以圓整度、硬度、及藁本內(nèi)酯含量作為評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果見表38。表38 冷凝時(shí)間的考察冷凝時(shí)間(min)圓整度（n=20）（%）硬度藁本內(nèi)酯含量（%）30較差6098.12較好97.699098.26較好92.9212098.21較好92.22通過外觀與內(nèi)在質(zhì)量綜合分析，確定冷凝時(shí)間

34、為60min。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（7）去冷卻劑方法的選擇 滴制完成后，滴丸表面冷卻劑的去除在實(shí)驗(yàn)室中選擇了石油醚洗滌和用紙屑擦拭進(jìn)行比較。以表面光潔度和藁本內(nèi)酯含量變化作為評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果見表39。表39 滴丸去冷卻劑方法的比較方法光潔度處理后藁本內(nèi)酯含量（%）石油醚（3060）洗滌一般97.35石油醚（6090）洗滌一般97.36紙屑擦拭好99.68 結(jié)果表明，紙屑擦拭光潔度較好且對有效成分的影響較小。因此，在實(shí)驗(yàn)制備過程中選擇紙屑擦拭作為去除冷卻劑的方法，以保證滴丸的內(nèi)在質(zhì)量。芎冰滴丸的藥學(xué)研究（8）滴丸干燥方法的選擇實(shí)驗(yàn)中以光潔度及藁本內(nèi)酯含量變化作為評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行分析，以選擇最適合

35、滴丸的干燥方法，結(jié)果見表40。表40 滴丸干燥方法的選擇方法光潔度處理后藁本內(nèi)酯含量（%）40 烘干好92.1850 烘干好90.3660 烘干好85.79吸濕干燥好99.52微波干燥較好94.91結(jié)果表明吸濕干燥較理想。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.4芎冰滴丸的質(zhì)量評價(jià)研究2.4.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究（1）鑒別(對滴丸中的揮發(fā)油進(jìn)行TLC鑒別）樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上（Rf=0.7），顯相同顏色的亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。 圖9 滴丸的TLC鑒別 圖10 滴丸的TLC鑒別 展開劑：石油醚-醋酸乙酯（9：1） 展開劑：正己烷-醋酸乙酯（9:1）1藁本內(nèi)酯對照品；2川芎揮發(fā)油；3、4、5樣品 1 2

36、3 4 5 1 2 3 4 5芎冰滴丸的藥學(xué)研究（2）檢查溶出度檢查測定藁本內(nèi)酯含量，并計(jì)算相對累積溶出百分率，即得。結(jié)果見表41。表41 藁本內(nèi)酯累積溶出百分率（%）（n=3）取樣時(shí)間點(diǎn)lmin3min6min10min15min20min30min累積溶出百分率（%）17.844.169.584.892.393.193.7 以取樣時(shí)間點(diǎn)為橫坐標(biāo)，藁本內(nèi)酯累積溶出百分率為縱坐標(biāo)作圖，得藁本內(nèi)酯溶出曲線。見圖11。根據(jù)測定結(jié)果，暫定在6分鐘時(shí)，本品的累積溶出百分率不得少于65%。芎冰滴丸的藥學(xué)研究含量均勻度檢查取本品10粒，研細(xì)，分別置100ml量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，0.45m微

37、孔濾膜濾過，測定藁本內(nèi)酯含量，計(jì)算結(jié)果。結(jié)果見表42。表42 樣品均勻度測定結(jié)果（n=10）批次相對含量（%）A+1.80S1100.13.82100.33.6399.74.3結(jié)果表明，A+1.80S均小于15.0，符合規(guī)定。 (3)含量測定芎冰滴丸的藥學(xué)研究項(xiàng)目 川芎揮發(fā)油（藁本內(nèi)酯）冰片測定方法HPLC 氣相色譜法系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)樣品在各自的色譜條件下分離好，陰性無干擾。線性關(guān)系的考察藁本內(nèi)酯進(jìn)樣量在0.016213g0.16213g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。冰片進(jìn)樣量在0.044g0.265g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。供試品溶液的制備 A.溶媒的選擇 B.制備方法的選擇 C.加入溶劑量的選擇 D.

38、超聲時(shí)間的選擇制備內(nèi)標(biāo)溶液，測定校正因子精密度實(shí)驗(yàn)RSD值小于2，表明該儀器精密度良好。RSD值小于2，表明該儀器精密度良好。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明該測定方法重復(fù)性良好結(jié)果表明該測定方法重復(fù)性良好穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品溶液峰面積值在8小時(shí)內(nèi)無顯著性變化，可滿足測定要求。供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，可滿足測定要求。加樣回收率實(shí)驗(yàn) 該含量測定方法合理可行。該方法合理可行。樣品測定結(jié)果芎冰滴丸中藁本內(nèi)酯含量穩(wěn)定，暫定其標(biāo)示量為2.697mg/丸芎冰滴丸中冰片的含量穩(wěn)定，暫定其標(biāo)示量為1.05mg/丸芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.4.2 溶出度考察2.4.2.2溶出度方法學(xué)考察 溶出介質(zhì)的選擇以藁本內(nèi)酯為指標(biāo)，考察藁

39、本內(nèi)酯在水、酸水（HCl 9ml1000ml）、人工胃液中的溶出情況。測定方法：高效液相色譜法。圖20 對照品HPLC圖圖21 人工胃液HPLC圖芎冰滴丸的藥學(xué)研究圖22 芎冰滴丸HPLC圖表60 溶出介質(zhì)的考察實(shí)驗(yàn)溶出介質(zhì)水酸水人工胃液藁本內(nèi)酯溶出百分率（%）3.9325.091.8結(jié)果表明，藁本內(nèi)酯在人工胃液中的溶出率高于水和酸水，故選擇人工胃液為溶出介質(zhì)。 轉(zhuǎn)速考察結(jié)果見表61。表61 溶出度檢查轉(zhuǎn)速考察結(jié)果轉(zhuǎn)速(r/min)50100150藁本內(nèi)酯溶出百分率()89.7892.5392.65 結(jié)果表明，轉(zhuǎn)速對溶出度影響不大，選擇100r/min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。制備標(biāo)準(zhǔn)曲線精密度試驗(yàn)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

40、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)加樣回收率實(shí)驗(yàn) 芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.4.2.3溶出度實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析同法測定芎冰包合片及膠囊的溶出度。結(jié)果見表67。表67 溶出度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 取樣時(shí)間點(diǎn)（min）藁本內(nèi)酯累積溶出百分率（%）（n=3）芎冰滴丸芎冰包合片芎冰包合膠囊117.8未檢出未檢出344.1未檢出未檢出669.5未檢出7.181084.8未檢出8.261592.33.4010.82093.15.4114.13093.75.7218.545未檢驗(yàn)10.1927.360未檢驗(yàn)11.628.5以取樣時(shí)間點(diǎn)為橫坐標(biāo)，藁本內(nèi)酯累積溶出百分率為縱坐標(biāo)作圖，得芎冰滴丸、芎冰包合片及芎冰包合膠囊溶出曲線。見圖24。芎冰滴丸的藥學(xué)研究

41、圖24 溶出曲線對比分析圖項(xiàng)目芎冰滴丸芎冰包合片芎冰包合膠囊溶出達(dá)到基本完全時(shí)間（min）154545最高累積溶出百分率（%）93.711.628.5表68 溶出度實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表圖25 溶出度實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析柱形圖 以藁本內(nèi)酯達(dá)到溶出基本完全的時(shí)間和最高累積溶出百分率為指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果見表68，圖25。 由此可以看出，滴丸無論是達(dá)峰時(shí)間還是累積溶出百分率都較好。表明滴丸極大地提高了揮發(fā)油的溶出度。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芎冰滴丸與其它口服固體制劑相比，溶出速度快，累積溶出量高。 芎冰滴丸的藥學(xué)研究2.5 初步穩(wěn)定性試驗(yàn)根據(jù)中國藥典2005年版藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則，對芎冰滴丸的基本性狀、含量進(jìn)行了室

42、溫留樣考察。按芎冰滴丸制備工藝制備滴丸三批，密封包裝，置于40、RH75%恒溫恒濕條件下，分別于1、2、3、6月時(shí)取樣觀察測定，并與0月比較，結(jié)果見表69。 表69 芎冰滴丸初步穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果批次時(shí)間（月）性狀藁本內(nèi)酯含量（mg/丸）冰片含量（mg/丸）10黃色圓球型2.431.091黃色圓球型2.540.982黃色圓球型2.551.113黃色圓球型2.631.056黃色圓球型2.491.1320黃色圓球型2.781.031黃色圓球型2.530.992黃色圓球型2.571.133黃色圓球型2.651.046黃色圓球型2.661.0830黃色圓球型2.561.061黃色圓球型2.491.102黃色圓球型2.561.123黃色圓球型2.631.096黃色圓球型2.491.01 上述試驗(yàn)結(jié)果表明：在室溫條件下放置6個(gè)月，滴丸的性狀、含量均無明顯變化，表明在6個(gè)月內(nèi)，該制劑的穩(wěn)定性較好。芎冰滴丸的藥學(xué)研究3 結(jié)論與討論3.1 結(jié)論 本課題本著對中藥材“綜合利用”的宗旨，以川產(chǎn)道地大宗藥材川芎為研究對象，遵循傳統(tǒng)中醫(yī)藥基本理論，結(jié)合現(xiàn)代藥理及臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將川芎揮發(fā)油與冰片配伍，制成滴丸，以發(fā)揮快速起效的作用，減輕患者痛苦，豐富臨床劑型，更好地為人類健康服務(wù)。 (1)在進(jìn)行