菊花莖段快繁技術(shù)生物技術(shù)及應(yīng)用

1、江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文設(shè)計(jì).PAGE 12第12頁(yè)，共13頁(yè)：.；PAGE 13第13頁(yè)，共13頁(yè) 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院 畢 業(yè) 設(shè) 計(jì)論 文SNL/QR7.5.4-3 菊花莖段快繁技術(shù)專 業(yè) 生物技術(shù)及運(yùn)用 學(xué)生姓名 朱 杰 班 級(jí) 06生物技術(shù)及運(yùn)用2班 學(xué) 號(hào) 061401205 指點(diǎn)教師 宋 剛 完成日期 2021-6-4 附1：成果評(píng)議學(xué)號(hào)061401205姓名 朱 杰 標(biāo)題 菊花莖段快繁技術(shù) 指點(diǎn)教師建議成果： 評(píng)閱教師建議成果： 爭(zhēng)辯小組建議成果： 院爭(zhēng)辯委員會(huì)評(píng)閱意見及評(píng)定成果：爭(zhēng)辯委員會(huì)主任簽字蓋章： 年 月 日附2：畢業(yè)設(shè)計(jì)論文義務(wù)書姓名朱杰學(xué)號(hào)061401205班級(jí)

2、06生物技術(shù)及運(yùn)用2班標(biāo)題菊花莖段快繁技術(shù)設(shè)計(jì)(論文)主要內(nèi)容初代培育：如何選擇適當(dāng)?shù)呐嘤⑷绾翁砑舆m當(dāng)比例的激素、及如何選擇適宜的外植體(莖段)、外植體生長(zhǎng)情況叢生芽；繼代/生根培育：如何選擇適當(dāng)?shù)呐嘤?、如何添加適當(dāng)比例的激素、叢生芽生長(zhǎng)情況生根成苗等；3. 初代/繼代/生根培育過程中，能否染菌、死亡、褐變等并如何處置及分析。重點(diǎn)研討問題1. 培育基配方比例；2. 培育時(shí)，初代、繼代培育數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及其結(jié)果分析；3. 染菌、褐變等處置分析主要技術(shù)目的植體處置達(dá)標(biāo)、培育基滅菌徹底、確保無菌接種操作、合理的培育環(huán)境其它要闡明的問題指點(diǎn)教師意見 指點(diǎn)教師簽字： 年 月 日附3：指點(diǎn)教師意見 對(duì)論文

3、的簡(jiǎn)短評(píng)價(jià)：1.指出論文存在的問題及錯(cuò)誤2.對(duì)發(fā)明性任務(wù)評(píng)價(jià)3.建議成果 優(yōu) 良 中 及格 不及格 指點(diǎn)教師簽字 年 月 日評(píng)閱教師意見 對(duì)論文的簡(jiǎn)短評(píng)價(jià)：1.指出論文存在的問題及錯(cuò)誤2.對(duì)發(fā)明性任務(wù)評(píng)價(jià)3.建議成果 優(yōu) 良 中 及格 不及格 評(píng)閱教師簽字 年 月 日附4：爭(zhēng)辯小組評(píng)議意見學(xué)號(hào)姓名 標(biāo)題 爭(zhēng)辯小組意見： 1、對(duì)論文的評(píng)價(jià)2.建議成果等級(jí) 優(yōu) 良 中 及格 不及格3.需求闡明的問題 爭(zhēng)辯小組長(zhǎng)簽字 年 月 日朱杰 菊花莖段快繁技術(shù)菊花莖段快繁技術(shù)摘要：以菊花莖段作為外植體，在初代叢生芽誘導(dǎo)培育基、繼代培育基、生根培育基上先后誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織、叢生芽、根，最后完成植株再生。同時(shí)并對(duì)

4、每個(gè)環(huán)節(jié)存在問題進(jìn)展研討分析、整理，從而總結(jié)出適宜菊花莖段快繁的最正確方法。關(guān)鍵詞：菊花；外植體；快速繁衍； Abstract: As a chrysanthemum stem explants, the early generation of problems in the bud induction medium, subculture medium, the rooting medium has induced callus, multiple shoot clumps, roots, and finally the completion of plant regeneration. A

5、t the same time there are problems that each and every aspect of the analysis, sorting, and to summarize for the rapid propagation of chrysanthemum stem the best way.Key words: Chrysanthemum; Explant; Rapid Propagation目錄1.資料與方法91.1 資料及預(yù)培育91.1.1 資料91.1.2 預(yù)培育91.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和處置方法91.2.1培育基的制造與裝瓶滅菌91.2.2接種室、器械及

6、超凈任務(wù)臺(tái)滅菌91.2.3外植體的選擇與滅菌101.2.4 接種101.2.4初代叢生芽誘導(dǎo)培育101.2.5繼代培育101.2.6生根培育101.2.7試管苗的移栽102.結(jié)果與分析112.1初代、繼代培育結(jié)果處置112.2結(jié)論分析112.2.1繼代培育擴(kuò)展增殖方法112.2.2細(xì)菌、真菌污染及防治112.2.3褐變及其防治122.2.4玻璃化及其防治123.討論124.小結(jié)13參考文獻(xiàn)13致謝13 朱杰 菊花莖段快繁技術(shù) 第13頁(yè)菊花Chrysanthemum morifolium Ramat.是菊科菊屬的多年生宿根草本植物。株高20200cm，通常3090。莖色嫩綠或褐色，除懸崖菊外多為

7、直立分枝，基部半木質(zhì)化。單葉互生，卵圓至長(zhǎng)圓形，邊緣有缺刻及鋸齒。頭狀花序頂生或腋生，一朵或數(shù)朵簇生。舌狀花為雌花，筒狀花為兩性花。舌狀花分為下、匙管、畸四類，顏色豐富，有紅、黃、白、墨、紫、綠、橙、粉、棕、雪青、淡綠等。筒狀花開展成為具各種顏色的托桂瓣，花樣有紅、黃、白、紫、綠、粉紅、復(fù)色、間色等色系。花序大小和外形各有不同，有單瓣，有重瓣；有扁形，有球形；有長(zhǎng)絮，有短絮，有平絮和卷絮；有空心和實(shí)心；有挺直的和下垂的，式樣繁多，種類復(fù)雜。在我國(guó)有著悠久的栽培歷史2 。菊花主要靠扦插繁衍,也可進(jìn)展嫁接繁衍。但扦插和嫁接繁衍均需較多的母株資料,且受季節(jié)和外界環(huán)境條件的限制,繁衍速度較慢,對(duì)于一些

8、名貴菊花種類和母株來源缺乏的種類,更不能及時(shí)滿足消費(fèi)和市場(chǎng)的需求。研討和利用組織培育方法來繁衍菊花，可以在短期內(nèi)大量繁衍，使得工廠化育苗成為能夠，且利于新種類選育、脫毒復(fù)壯、種質(zhì)資源保管等。菊花利用植物組培技術(shù)，可以運(yùn)用菊花的莖尖、莖段和側(cè)芽作為主選外植體,在不同激素程度的培育基上誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織、叢生芽和根,完成植株再生。本文以在脫毒實(shí)驗(yàn)中勝利移栽上盆且長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)壯的普通欣賞菊花的帶腋芽莖段為研討資料，從菊花叢生芽誘導(dǎo)、繼代、生根培育著手研討，以期尋求低本錢、高效、穩(wěn)定的菊花莖段增殖方法，提高其商品化消費(fèi)效率，滿足菊花種苗商品化消費(fèi)的要求9。1.資料與方法1.1 資料及預(yù)培育1.1.1 資料：供

9、試資料為脫毒實(shí)驗(yàn)中勝利移栽上盆且長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)壯的普通欣賞菊花。1.1.2 預(yù)培育：將供試盆栽菊花移至室內(nèi)陽(yáng)光充足處正常恒溫培育57天。1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和處置方法1.2.1培育基的制造與裝瓶滅菌均以MS培育基為根本培育基，附加不同生長(zhǎng)激素等配置而成。根據(jù)實(shí)踐要求，培育基制造7見下表：表-1 培育基制造配比培育基配比蔗糖瓊脂pH叢生芽誘導(dǎo)MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8繼代培育MS+6-BA3.5mg/L+NAA0.5mg/L3%0.7%5.8生根培育1/2MS+NAA0.2mg/L3%0.7%5.8將已配好的培育基，趁熱分裝在培育瓶中每瓶3550ml，用公用透性膜封好

10、后放入高壓滅菌鍋中滅菌、待用。1.2.2接種室、器械及超凈任務(wù)臺(tái)滅菌6接種室的地面、墻壁要擦洗干凈，接種前用甲醛或高錳酸鉀稀溶液熏蒸，也可以采用紫外燈滅菌。所需器械先用70%酒精浸泡，待接種前在酒精燈下用火灼燒到變紅，冷卻待用。超凈任務(wù)臺(tái)啟動(dòng)前，先用70%酒精擦拭臺(tái)面，再翻開紫外燈照射20min,同時(shí)翻開風(fēng)機(jī)。接種前封鎖紫外燈，翻開日光燈。1.2.3外植體的選擇與滅菌選用菊花的帶腋芽莖段作為外植體。選取生長(zhǎng)強(qiáng)壯的嫩莖先用洗衣粉水沖洗2次，再用自來水沖洗2次，以洗去外表泥土雜質(zhì)為規(guī)范。然后移至超凈任務(wù)臺(tái)上, 用 75 %酒精處置 2030 秒, 再用無菌水沖洗 35 次, 轉(zhuǎn)入 0.1 %升汞溶

11、液浸泡 810 分鐘, 再用無菌水沖洗 46 次, 用濾紙吸干水分，最后將資料放入無菌的錐形瓶中封口待用。1.2.4 接種在超凈任務(wù)臺(tái)內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈,并在酒精燈旁邊任務(wù),留意手和衣袖與酒精燈堅(jiān)持適當(dāng)?shù)拈g隔 ,以免燒傷。在酒精燈上將操作器具燒紅,待溫度降至常溫時(shí)進(jìn)展操作。將選取用的外殖體資料切成0.51厘米左右?guī)в幸秆康男《?。用鑷子夾取切好的外殖體資料,按極性方向直立迅速接種到錐形瓶的培育基中,深約23mm,留意培育瓶口一直在火焰下方,盡量使切口接觸培育基。每個(gè)錐形瓶可接種34 塊外殖體。接種時(shí)錐形瓶應(yīng)堅(jiān)持傾斜,接種后要迅速將瓶口在酒精燈上轉(zhuǎn)動(dòng)灼燒一遍進(jìn)展消毒,然后迅速蓋上公用透性膜封好。最后在

12、瓶壁上上標(biāo)簽,注明接種資料的稱號(hào)、編號(hào)和接種日期。1.2.4初代叢生芽誘導(dǎo)培育接種完成后即轉(zhuǎn)入培育室，即進(jìn)展初代叢生芽誘導(dǎo)培育。培育溫度22281.2.5繼代培育當(dāng)叢生芽長(zhǎng)至1厘米長(zhǎng)時(shí)，在超凈任務(wù)臺(tái)上將芽從中的小芽切割開，分別轉(zhuǎn)入一樣的新穎培育基上繼代增值，每一個(gè)小芽又會(huì)以同樣的繁衍系數(shù)產(chǎn)生芽從。培育溫度22251.2.6生根培育3當(dāng)叢生芽長(zhǎng)成的小苗達(dá)23厘米時(shí)，在超凈任務(wù)臺(tái)上將其切下轉(zhuǎn)入生根培育基中誘導(dǎo)生根。培育溫度22251.2.7試管苗的移栽芽苗生根后已在生根培育基上長(zhǎng)至 5 cm 左右，可將瓶塞翻開，讓其由無菌環(huán)境轉(zhuǎn)至有菌且濕度較低的環(huán)境之中約35天后，便可進(jìn)展移栽，移栽初期留意遮光

13、。大規(guī)模的室外移栽需求在苗床上進(jìn)展 ,包括整地、 移栽、管理等環(huán)節(jié)。2.結(jié)果與分析本文實(shí)驗(yàn)因時(shí)間限制，初步完成了菊花莖段從初代到繼代的培育過程，并對(duì)生根培育進(jìn)展了實(shí)際分析，同時(shí)對(duì)初代、繼代培育的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)展了完善的統(tǒng)計(jì)。2.1初代、繼代培育結(jié)果處置：表-2 初代培育記錄表：次數(shù)接種量真菌污染細(xì)菌污染褐變玻璃化正常成活率160127623355%2601013812847%360910203965%460119313660%統(tǒng)計(jì)：240423919457%表-3 繼代培育記錄表：次數(shù)接種量真菌污染細(xì)菌污染褐變玻璃化正常成活率1992130304545%2841527004250%31171833

14、036354%41082433304844%統(tǒng)計(jì)：408781236319849%成活率=正常/接種量1002.2結(jié)論分析：2.2.1初代、繼代培育結(jié)果統(tǒng)計(jì)表-4 初代、繼代培育數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)培育類型7天生長(zhǎng)情況14天生長(zhǎng)情況21天生長(zhǎng)情況28天生長(zhǎng)情況初代培育莖段變粗，切口出現(xiàn)少量嫩綠色愈傷組織腋芽開場(chǎng)萌動(dòng)，部分已有叢生芽構(gòu)成叢生芽大量構(gòu)成，部分已長(zhǎng)成苗從苗從長(zhǎng)勢(shì)良好，可以做繼代培育繼代培育基部構(gòu)成愈傷組織，叢生芽逐漸增長(zhǎng)、增厚新的叢生芽逐漸增多，且速度加快叢生芽構(gòu)成新的苗從，部分可以繼續(xù)繼代培育苗從根本長(zhǎng)勢(shì)良好，可繼代培育或部分進(jìn)展生根培育從外植體培育到長(zhǎng)出叢生芽需求相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。但這一任務(wù)是一

15、勞永逸的,由于大量的擴(kuò)展繁衍是在叢生芽產(chǎn)生以后。菊花的繼代培育擴(kuò)展增殖可以在兩個(gè)時(shí)期進(jìn)展。其一是在叢生芽生長(zhǎng)以后,把長(zhǎng)有叢生芽的愈傷組織塊分別,分散的組織塊在細(xì)胞分裂素程度較高的培育基上培育,讓其分化出更多的芽。本實(shí)驗(yàn)采用的就是這種方法，本方法效率較高，缺陷是接種較繁瑣。其二是在長(zhǎng)成較高的無根苗以后,把無根苗切成段,用類似扦插的方法在生根培育基上培育，使其直接發(fā)育成完好幼苗。這種方法較為簡(jiǎn)單，但效率低，不建議采用。2.2.2細(xì)菌、真菌污染及防治4表-5 初代、繼代培育中的污染統(tǒng)計(jì)培育類型污染分類污染率染菌表現(xiàn)初代真菌污染18%外植體周圍有白色絨毛狀菌絲，培育基出現(xiàn)綠、白菌斑細(xì)菌污染16%培育基

16、表層呈水漬狀污染，外植體周圍滴形云霧狀污染繼代真菌污染19%培育基表層出現(xiàn)黃、白色油滴狀菌斑細(xì)菌污染30%培育基表層有粉紅色如水漬狀分布的菌斑污染率=污染統(tǒng)計(jì)總數(shù)/接種統(tǒng)計(jì)總數(shù)100%普通情況下，染菌的試管苗很難生根，即使能生根，根褐化景象明顯。假設(shè)條件允許，可以在菊花培育基中附加50150mg/L的氨芐青霉素和50mg/L的硫酸丁胺卡那霉素，可以很好地抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，而且氨芐青霉素會(huì)對(duì)菊花生根有促進(jìn)作用， 而硫酸丁胺卡那霉素那么會(huì)抑制生根。本文實(shí)驗(yàn)中，外植體預(yù)處置相當(dāng)重要，需嚴(yán)防外植體帶菌，而且在本文實(shí)驗(yàn)中，普通在一周時(shí)間內(nèi)可以發(fā)現(xiàn)染菌情況，凡細(xì)菌細(xì)微污染的，可以采取補(bǔ)救措施，詳細(xì)如下：染菌

17、的已接外植體或叢生芽采用75%的酒精浸洗35分鐘，然后再用無菌水沖洗23次，接入相應(yīng)培育基即可，然后每隔23天察看下能否還有染菌景象。2.2.3褐變及其防治培育資料會(huì)向培育基中釋放褐色物質(zhì)，即酚類物質(zhì)在多酚氧化酶的作用下，氧化構(gòu)成褐色的醌類物質(zhì)，導(dǎo)致植株中蛋白量變性、酶失活，而使培育基和培育資料逐漸變褐而死亡的景象。從表-2可以看出，第1、2次褐變較嚴(yán)重！為了防治褐變，本文菊花實(shí)驗(yàn)中，采用0.1%Vc溶液作為抗氧化劑，效果較佳。方法如下：已做滅菌處置的外植體即帶腋芽莖段，放入0.1%Vc溶液中浸泡5分鐘，不需無菌水沖洗，略微在無菌濾紙上濾干，將資料放入無菌的錐形瓶中封口待用。為驗(yàn)證運(yùn)用0.1%

18、Vc溶液能抑制褐變的可行性，做了對(duì)比接種實(shí)驗(yàn)，同時(shí)在表-2中第3、4次明顯可以看出，運(yùn)用過0.1%Vc溶液浸泡過的莖段褐變率將明顯低于未運(yùn)用Vc溶液浸泡的莖段。表-6 0.1%Vc溶液對(duì)比接種實(shí)驗(yàn)次數(shù)0.1%Vc溶液總數(shù)褐變數(shù)褐變率1浸泡3013%未浸泡30413%2浸泡3000%未浸泡30620%3浸泡3000%未浸泡30517%褐變率=褐變數(shù)/總數(shù)100%2.2.4玻璃化及其防治由于試管苗發(fā)生生理失調(diào)，而構(gòu)成發(fā)育不正常的組培苗。玻璃苗外觀顯示的共同特點(diǎn)是呈半透明狀，并且可分為外觀形狀明顯異常與根本無異常兩種類型。玻璃苗的出現(xiàn)是植物組培技術(shù)運(yùn)用于工廠化育苗的極大妨礙,因此試管苗的玻璃化是植物

19、組培過程中亟待處理的問題。本文菊花實(shí)驗(yàn)過程中，從表-2、表-3明顯看出初代培育的玻璃化程度高于繼代培育，為了防止玻璃化，繼代培育采取加強(qiáng)光照及降低每瓶接種量來防止玻璃化景象，結(jié)果效果顯著。3.討論本文實(shí)驗(yàn)采用帶腋芽莖段作為外植體，相對(duì)純粹單一運(yùn)用莖尖或莖段或側(cè)芽要簡(jiǎn)單的多，且在技術(shù)操作上更加容易上手。從實(shí)際上講,植物的任何部位均能在適宜的條件下勝利地進(jìn)展培育，但實(shí)踐上不同的植物部位,其分化和形狀發(fā)生才干各不一樣。菊花能作為外植體的部位很多，除本實(shí)驗(yàn)采用的帶側(cè)芽莖段外，尖、葉、花序梗、花序軸、花瓣和根等都能作為外植體。經(jīng)過對(duì)菊花的組織培育技術(shù)的研討,可以看出在以MS為根本培育基的條件下,菊花的生

20、長(zhǎng)依托生長(zhǎng)調(diào)理物質(zhì)來控制。經(jīng)過調(diào)理生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的濃度比例可以有效的控制菊花芽的分化、生長(zhǎng)及生根。這一新的組培技術(shù)的運(yùn)用,將對(duì)引進(jìn)的菊花優(yōu)良種類的迅速擴(kuò)繁、減少退化、節(jié)約本錢、提高勞動(dòng)消費(fèi)率以及實(shí)施工廠化育苗發(fā)揚(yáng)積極的促進(jìn)作用。4.小結(jié)本文結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆绞綄?duì)菊花莖段快繁的整體過程做了系統(tǒng)的論述和分析。主要從六個(gè)層次即培育基的制造、各項(xiàng)滅菌任務(wù)、初代叢生芽培育、繼代培育、生根培育、試管苗的移栽著手，對(duì)每一步的操作過程進(jìn)展細(xì)致論述。同時(shí)結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)容易產(chǎn)生問題的方面做了全面的分析，并提出了合理的處理方案。參考文獻(xiàn)：1 劉鵬，劉金，趙艷紅，劉慶秀，張衛(wèi)國(guó).菊花的組織培育、脫毒與快繁技術(shù)研討.內(nèi)蒙古名族大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版，2005，204：4104132 周瑞玲，吳雨龍.菊花的組織培育及