魚病專題-日本國立北海道大學(xué)獸醫(yī)學(xué)部傳染病學(xué)講座4

1、魚病專題日本國立北海道大學(xué)獸醫(yī)學(xué)部傳染病學(xué)講座系列之四三、魚類細(xì)菌性疾病3.5. Red spot diseases (赤點(diǎn)病)本病正如其病名，以體表的點(diǎn)狀出血為其特徵。70年代初期首次被報(bào)告的，比較新的鰻魚細(xì)菌性疾病。本病不僅在臺灣、日本經(jīng)常發(fā)生，80年代初期在英國也有此病的發(fā)生報(bào)告。(1)病 因 此病的病原菌乃由Wakabayashi和Egusa所報(bào)告的Pseudomonas anduilliseptica。此菌屬Gram陰性的短桿菌(0.513m)。具有單鞭毛，有運(yùn)動(dòng)性。倍培養(yǎng)溫度超過25度以上時(shí)，運(yùn)動(dòng)性變?nèi)趸蛳АＪ褂闷胀ㄅ囵B(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)，細(xì)菌增長速度緩慢，20度培養(yǎng)23天後，方產(chǎn)生直徑1

2、mm左右的透明，具光澤且黏稠性的菌落。培養(yǎng)溫度范圍是530度，至適溫度1520度。培養(yǎng)pH值范圍是5.39.7，至適pH值79。培養(yǎng)食鹽濃度范圍是0.10.4，至適食鹽濃度是0.51。本菌在淡水中生存日數(shù)不超過一天以內(nèi)就死亡，但在海水或稀釋海水中可生存200天以上而不死亡。(2)癥 狀 病鰻皮膚，特別在下顎、腹部及肛門內(nèi)周圍的皮膚有顯著的點(diǎn)狀出血。因病原菌侵入表皮基底膜或在真皮繁殖，使分布在表皮基底膜及真皮組織內(nèi)的毛細(xì)血管充血，發(fā)生滲出性出血或破綻(裂)性塊狀出血病變。此外，尚可見鰭的出血，肝臟郁血，脾臟褪色萎縮，腎臟萎縮，腸管、胃變赤，腹膜點(diǎn)狀出血。有的病例可見各內(nèi)臟貧血現(xiàn)象。(3)診 斷

3、根據(jù)病鰻典型的體表點(diǎn)狀出血之病理特徵，大概可以診斷為本病。但有些病魚的癥狀和其他細(xì)菌性疾病的癥狀類似，因此尚需進(jìn)行細(xì)菌學(xué)診斷。將疑似本病的鰻魚的肝、脾、腎臟或血液，用普通培養(yǎng)基培養(yǎng)進(jìn)行細(xì)菌分離。20度2天培養(yǎng)後，如有透明感的菌落出現(xiàn)，則可進(jìn)一步鑒定是否為本病原菌。用凝集反應(yīng)和直接免疫營光法可以同定本病原菌。(4)對 策 飼養(yǎng)水溫保持在2627度，池水盡可能使用淡水等是有效的對策手段。但保持水溫必增加燃料投資。理想的預(yù)防措施是使用疫苗，但實(shí)用性的疫苗尚待開產(chǎn)。Chloramphenical等抗生素對本菌雖有較強(qiáng)的殺傷作用，但在養(yǎng)鰻場使用抗生素治療是有實(shí)際困難的。因?yàn)楸静摲谳^長，當(dāng)發(fā)病時(shí)，病魚

4、大都已失去食欲，經(jīng)口投藥效果甚差。另外，本病常發(fā)生於剛剛過冬時(shí)，此時(shí)，鰻魚尚未開始攝食，也是經(jīng)口投藥效果不佳的原因之一。因此，設(shè)備完善的養(yǎng)殖池，可將水溫提高到26度，同時(shí)投藥治療，一般都會(huì)收到較好的治療效果。3.6. Pasteureliosis (巴斯德桿菌癥)本病1969年6月在日本西部 魚養(yǎng)殖場首次流行發(fā)生過，以脾臟出現(xiàn)多數(shù)，明顯的小白點(diǎn)為特徵，隔年，日本全國都流行發(fā)生本病，而且每年均有反復(fù)發(fā)生，被害甚大。(1)病 因 病原菌首次由本村和北尾兩位專家所分離，在美國大西洋岸也分離出同一性狀的病原菌。本病原菌Pasteurella piscide屬Gram陰性短桿菌(0.61.20.82.6

5、m)。但隨著培養(yǎng)條件的變化，有的呈球狀，有的呈長桿狀。此菌無運(yùn)動(dòng)性，無芽胞。 在普通培養(yǎng)基上，本病生長不良。在血液培養(yǎng)基(含1.52.0食鹽)上，則繁殖良好。BHI培養(yǎng)基上的菌落呈圓形、無色、半透明、露滴狀，且有黏稠性，在MaConky培養(yǎng)基上增殖良好，但在SS、BTB培養(yǎng)基上不繁殖。培養(yǎng)溫度范圍是1732度，至適溫度2530度。培養(yǎng)pH值范圍6.88.8，至適pH值7.58.0。培養(yǎng)食鹽濃度范圍0.55.0，至適食鹽濃度23。(2)癥 狀 病況進(jìn)行急速，病魚先失去食欲，然後離開魚群，游入水池底部靜止不動(dòng)而死亡。體表稍變黑，除了魚鱗脫落的體表有顯著的變色外，無其他可見的變化。剖解時(shí)，可見脾、腎

6、臟上有多數(shù)的小白點(diǎn)，其他如心臟、肝臟、腸間膜、腹膜、鰾、鰓有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)較少數(shù)的小白點(diǎn)。白點(diǎn)大小自針頭大至直徑數(shù)厘米大，但大多數(shù)在1厘米左右。白點(diǎn)為一個(gè)大菌落或幾個(gè)小菌落所組成，多被纖維組織包圍形成結(jié)節(jié)樣構(gòu)造，內(nèi)部細(xì)菌則已死亡。這些菌落乃由於細(xì)菌耐過白血球，內(nèi)皮網(wǎng)狀細(xì)胞之吞食後，在病變部位繁殖起來的。在毛細(xì)血管及間質(zhì)組織內(nèi)，細(xì)菌雖然增殖快，但因不產(chǎn)生菌素，故對實(shí)質(zhì)組織沒有太大的影響。(3)診 斷 內(nèi)臟出現(xiàn)小白點(diǎn)的病變除本病以外，還有Nocardiosis，Ichthyophthyriasis。本病在肌肉中不形成結(jié)節(jié)或膿瘍，且肝臟及腎臟也不腫大，因此肉眼可以與Nocardiosis， Ichthy

7、ophthyriasis之發(fā)生區(qū)別。確切的診斷還需以細(xì)菌檢查，血液涂抹標(biāo)本及病變組織直接涂抹片等方法為輔助。如有兩端濃染的桿菌，則可判是本病。(4)對 策 因?yàn)閭魅緛碓茨吮＞~、非海水，因此預(yù)防上，重點(diǎn)要盡快地除去重癥魚及病死魚。Chloramphenical，Tetracyclin等抗生素對本病原菌有效，但磺胺劑則沒有殺菌效果。在梅雨期的易流行的季節(jié)里，應(yīng)進(jìn)行投藥預(yù)防措施，減少發(fā)病。3.7. Bacterial gill disease (細(xì)菌性鰓病)鰓組織表面上因長桿菌繁殖，刺激而引起的上皮細(xì)胞異常增生使鰓薄板愈合為本病的特徵。(1)病 因 Flavobacterium sp.是屬於Gra

8、m陰性長桿菌(0.30.5515m)，無運(yùn)動(dòng)性。分離時(shí)，一般使用cytophaga培養(yǎng)基，於18度培養(yǎng)5天後，可形成直徑0.5mm、淡黃色、半透明的微小菌落。菌落周圍圓滑，加入5仔牛血清將促進(jìn)細(xì)菌生長。培養(yǎng)溫度是1025度，食鹽濃度是00.05。(2)癥 狀 病魚食欲減退，離開魚群，浮於水面。病狀加劇後，分泌多量的黏液，將鰓蓋覆蓋使鰓郁血、腫脹。組織病理學(xué)所見，鰓組織細(xì)菌增殖，上皮細(xì)胞增生，特別是從鰓薄板先端開始，最後漸擴(kuò)散到鰓板全體，使鰓薄板完全愈者，鰓瓣變?yōu)榘魻?。以上病變，阻害血液中二氧化碳與水中氧氣的交換，使魚的呼吸受阻害，是魚死亡的原因。(3)診 斷 采集鰓瓣的一部份直接進(jìn)行顯微鏡檢查

9、，確認(rèn)有無細(xì)長的細(xì)菌存在，上皮細(xì)胞的增生，及鰓薄板的愈合，就可以初步斷定本病。菌數(shù)不多或與組織緊密附著不能直接觀察時(shí)，則將采集的組織放在載玻片上涂抹，經(jīng)固定、染色後再用顯微鏡檢查。(4)對 策 避免過密飼養(yǎng)是相當(dāng)重要的。預(yù)防措施過去常用硫酸銅，有機(jī)水銀制劑來治療，但依公共衛(wèi)生上而言現(xiàn)已廢棄不用了。目前一般可用過錳酸鉀(12ppm)，1小時(shí)藥浴。在日本用5食鹽水浸漬2分鐘的方法也是非常有效且安全的。但規(guī)模大的養(yǎng)殖池則需消耗大量的食鹽。3.8. Columnaris disease 被Flexibacter columnaris感染的魚，首先在與外界接觸的器官：鰓、鰭、皮膚上出現(xiàn)病變。隨魚的種類、

10、年齡等因素，病變常常出現(xiàn)於魚體不同的部位。因此常被稱之為gill diseases、cotton mouth等。此病不僅在日本，而且在美國、加拿大及歐洲都有發(fā)生。在美國和加拿大被稱之為summer disease。發(fā)病魚種多，危害甚大。(1)病 因 病原體是Flexibacter columnavis，屬Gram陰性長桿菌(0.50.748m)。長時(shí)間培養(yǎng)後，細(xì)菌形狀不一，有的呈細(xì)長形、波浪狀或輪狀。此菌雖無鞭毛，但具有特異的運(yùn)動(dòng)性，即菌體一端固定，另一端擺動(dòng)的屈曲運(yùn)動(dòng)和在培養(yǎng)基或載玻片上的滑走運(yùn)動(dòng)。使用Cytophaga、TY培養(yǎng)基分離時(shí)，菌落呈周圍樹根狀、黃色扁平的菌落。用液體培養(yǎng)基靜止培

11、養(yǎng)時(shí)，液表面上形成一層黃色的強(qiáng)韌膜。培養(yǎng)溫度范圍是535度，至適溫度2728度。培養(yǎng)pH值范圍是6.58.5，至適pH值7.5左右。培養(yǎng)食鹽濃度0.5時(shí)發(fā)育良好，超過2時(shí)將不發(fā)育。(2)癥 狀 癥狀隨魚種多少有些差異。首先在鰭、嘴吻、鰓板的先端或體表上出現(xiàn)黃白色的小斑點(diǎn)，然後漸次擴(kuò)大。體表的患部周圍變赤，鰭白先端裂開。鰓黏液分泌劇增，鰓葉變成帚狀，部分出現(xiàn)脫落。其他內(nèi)臟一般正常。 皮膚患部因病原菌增殖，使真皮組織內(nèi)毛細(xì)血管充血，最後破裂引起出血。真皮壞死時(shí)，魚鱗將脫落。鰓板被病原菌感染，導(dǎo)致病魚呼吸困難，是致死的原因。本病和3.7.的Bacterial gill disease不同之處是鰓組織

12、容易出現(xiàn)壞死現(xiàn)象。(3)診 斷 病變僅限於體表，易從外觀觀察病變來診斷。與霉菌感染有類似病變，但病巢表面上無霉菌感染之特異毛狀菌絲，卻附著黃色的黏液。鰓有病巢時(shí)，打開鰓蓋，也可以觀察到同樣的癥狀。從患部采集黏液，用400倍的顯微鏡，可以觀察到正在做滑走及屈曲運(yùn)動(dòng)的多數(shù)細(xì)長菌體，開始分散的菌體互相結(jié)合變成特異的圓柱狀。病原菌的分離，培養(yǎng)將從患部采集的黏液涂抹於Cytophaga或TY培養(yǎng)基上，於25度培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)。根據(jù)菌落的形態(tài)，基本上可以判斷為本菌。通常以抗血清，用凝集反應(yīng)來做輔助診斷。(4)對 策 本病乃接觸而感染，特別是鰓及皮膚有損傷時(shí)易感染，因此流行期盡可能避免撈取或移動(dòng)魚。治療使用藥

13、浴最有效。發(fā)病初期可以用磺胺劑及抗生素經(jīng)口治療。雖有疫苗的研究報(bào)告，但距實(shí)用階段尚待進(jìn)一步開發(fā)。四、4.7. 鯉魚鶪疹病毒感染癥 (Herpesirus Infection of Carp)本癥是由病毒感染所引起的表皮性腫瘍，俗稱鯉魚痘(carp poo)，雖在1964年已由Schubert以電子顯微鏡在病變組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)了病毒顆粒，但病毒的分離直到1984年始由Sano完成。(1)病 因 由Herpesvirus cypirini所感染，本病的分離以EPC、FHM等細(xì)胞株，接種腫瘍組織的過濾上清，在20經(jīng)23星期後，出現(xiàn)圓形化的病變細(xì)胞，并漸次細(xì)胞融解，在EPC細(xì)胞內(nèi)可出現(xiàn)核內(nèi)包涵體(即Cowd

14、ry type A)。(2)癥 狀 本病多發(fā)生在2公斤左右的成魚，於口吻周圍、鰭、皮膚等部位常發(fā)現(xiàn)突起腫瘤，不大引起死亡，卻對觀賞用的錦鯉魚造成觀賞價(jià)值的損失。組織病學(xué)上的病變，屬上皮乳頭腫(epithelial papilloma)，人工接種後所形成的腫瘤也有相同的組織變化。(3)診 斷 本癥病理組織變化屬epitealial papilloma的腫瘤構(gòu)造，以病理診斷非常容易，但病毒的分離率依Sano等人自19811983年間，由8個(gè)病例成功地分離來看，如果能以病毒分離來輔助診斷則更能確診。本病毒由Sano等人更證實(shí)人工感染鯉魚經(jīng)10個(gè)月有5070的再現(xiàn)率。(4)對 策 本病毒在魚體內(nèi)呈不顯

15、性的終身感染(latent infection)，去除本病毒的再傳染在目前是相當(dāng)困難的事。養(yǎng)殖池的一般衛(wèi)生管理仍是不可缺少的重要工作。4.8. 鰻魚病毒感染癥 (Viral Infection in Eel)自鰻魚已分離的病毒很多，由於其病原性及疫學(xué)多未確定，在此僅列表於表三(7月份刊出)并稍加說明。由歐洲鰻(在歐洲所捕獲的幼鰻)之腎臟所分離的EVE病毒，其特性和前述的IPN(French 21 Strain)病毒一致，而且稍後也在日本鰻(在日本、亞洲各國所擄獲的幼鰻)被分離到，EVE病毒主要引起鰻魚之腎臟充出血，腎小管內(nèi)蛋白滲出物出現(xiàn)及肝脾之壞死 ，鰓發(fā)紅、充出血等病變。由美洲鰻所分離的EV

16、A病毒已知屬Rhabdovirus，臨床癥狀與歐洲EVE病毒類似，在日本曾發(fā)生自古巴進(jìn)口的幼鰻死亡例子。4.9. 病毒性紅血球壞死癥 (Viral Erythrocytic Necrosis)本癥舊稱魚紅血球壞死癥(PEN)，現(xiàn)以VEN稱之。(1)病 因 本病毒屬Iridoviridae的DNA病毒，病毒顆粒大小，不同報(bào)告有很大的差異，Walker (1971)在鱈魚的報(bào)告是330nm，及在鶼魚的155nm，白鮭魚的230nm。但病毒的分離尚未成功。(2)癥 狀 在感染魚的紅血球細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，可見14的嗜鹼性包函體為主要病徵，感染嚴(yán)重的病魚，其紅血球90100都有包涵體。由於紅血球嚴(yán)重的被破壞，死

17、亡的魚所呈顯著貧血，病魚的紅血素值多降至210左右。在一感染魚群，各慢性至急性病程都同時(shí)可被發(fā)現(xiàn)，特別是弧菌癥混合感染時(shí)，其死亡率、型態(tài)趨於復(fù)雜。(3)診 斷 因本病的病毒尚未分離成功，故其診斷得以血液抹片來檢查，抹片以Giemza或 Wright染色，在光學(xué)顯微鏡就可發(fā)現(xiàn)紅血球的質(zhì)內(nèi)包涵體。最終的確可利用電子顯微鏡檢查出iridovirus病毒顆粒的特徵。病毒顆粒大小，直徑154300nm。(4)對 策 本病的傳播機(jī)序尚未十分明了，防治之對策只能依病毒疾病的一般措施進(jìn)行。4.10. 魚病毒學(xué)的一般實(shí)驗(yàn)技術(shù)(1)細(xì)菌之培養(yǎng) 病毒分離所用的細(xì)胞，應(yīng)正值分裂旺盛的正常細(xì)胞，且需同時(shí)使用2種細(xì)胞株供

18、分離。細(xì)胞株應(yīng)事先且定期確定未被Mycoplasma所污染。培養(yǎng)液內(nèi)添加penicillin 100 IUml和Streptomycin 100gml，或Gentamycin 100gml和Mycostatin 25 mgml。(2)病材之采取及處理(a)自5尾病魚所采的病材，同一器官組織同時(shí)一起做成一個(gè)接種乳劑。盡可能的話，應(yīng)采有上述之2個(gè)接種乳劑。(b)同時(shí)采取不同魚群的病材供比照。(c)病材之采取應(yīng)根據(jù)下列之原則：1. 孵化不久的幼魚得除去卵黃，使用全魚化驗(yàn)。2. 5cm未滿的幼魚，采取包括腎在內(nèi)的全部內(nèi)臟器官。3. 5cm以上的成魚，只要采取脾及腎。(d)為輸送及保存上的需要，可加入含倍量的抗生素的pH7.07.8緩沖液。(e)為抑制及減少供檢材料之被污染，添加含800IUml之penicillin及800gml之streptomycin，400unitsml之mycostatin緩沖液，在室溫2小時(shí)，或4一夜緩慢攪拌，或乳劑通過0.45m小大的milipone。(3)接種及培養(yǎng)依各所使用的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿大小來接種多少量的乳劑，但至少每一個(gè)乳劑應(yīng)接種2個(gè)培養(yǎng)瓶(皿)，培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)至少觀察14日以上。培養(yǎng)溫度如下：(a)IHN、IPN、VHS病毒15。(b)CCV病毒2730。(c)Herpesvirus salmonis病毒510。飼料營養(yǎng)雜志(8087)林子恩郭