分光光度法血糖實習

1、 p31實驗四 分光光度技術與 葡萄糖氧化酶法測定血糖第一頁，共二十四頁。一、分光光度法 分光光度法是根據(jù)不同物質對于不同波長的光波具有選擇性吸收的光學特性，建立起來的分析方法。一分光光度法的依據(jù)第二頁，共二十四頁。I0It溶液 當一定波長的光線通過某種透明介質時，其中一局部光可透過，一局部光被吸收，這種某種溶液對一定波長的光的吸收特性可用于該物質的定性和定量分析。第三頁，共二十四頁。分光光度計可獲得單色光 分光光度計利用棱鏡或光柵取得波長范圍為幾個nm甚至更窄的單色光。第四頁，共二十四頁。測定的時候需選擇不同物質最大吸收峰所對應的波長波長nm 光吸收值最大吸收峰第五頁，共二十四頁。分光光度計

2、的優(yōu)點 分光光度法的靈敏度、準確度及選擇性都很高，是一種最常用的靈敏、精確、快速和簡便的分析方法。第六頁，共二十四頁。不同分光光度計的波長范圍紫外光(200-400nm)可見光(400-760nm)紅外光(760nm-30m)第七頁，共二十四頁。二分光光度法原理 Lambert-beer定律，該定律說明了溶液對單色光吸收的多少與溶液濃度及液層厚度的乘積成正比關系。I0Itlg=KCL第八頁，共二十四頁。I0Itlg：光密度O.D.，或稱吸光度AI0：入射光強度It：透過光強度K：吸光系數(shù)，它與該物質吸收光能力有關I0Itlg=KCLC：溶液濃度(mol/L)L：液層厚度(cm)第九頁，共二十四

3、頁。三分光光度法計算待測溶液濃度的方法1、利用標準溶液測定溶液的濃度A標= KC標LA樣= KC樣LA標A樣C標C樣第十頁，共二十四頁。2、利用標準曲線求得待測溶液的濃度標準曲線的制作： 先配制一系列能看出不同濃度的測定物標準溶液，按測定管顯色，分別讀取各管光密度，以各管光密度為縱坐標，各管濃度為橫坐標，作圖得標準曲線。第十一頁，共二十四頁。濃度吸光度以測定管的光密度從標準曲線上可求得測定物濃度第十二頁，共二十四頁。四分光光度計的根本結構1、光源2、單色光器3、吸收杯比色杯4、檢流計測光系統(tǒng)第十三頁，共二十四頁。752型分光光度計1A/T/C/F切換鍵2SD鍵具2個功能。傳輸數(shù)據(jù)；確認當前的F

4、值。3/0%調T為000.0。4)/100%調T 為100.0。轉換至A時，按鍵后顯示0.000。第十四頁，共二十四頁。五操作規(guī)程1.插上電源，翻開電源開關預熱30min。2.將波長旋鈕旋至所需波長。3.將樣品倒入比色皿放入比色皿架，空白管進入光路，按A/T/C/F鍵至光標于T位，開蓋按/0%鍵使讀數(shù)顯示000.0。關蓋，再按/100%鍵使讀數(shù)顯示100.0。按A/T/C/F鍵至光標于A位，再按/100%顯示0.000。拉出樣品管進入光路讀A。4.測定結束翻開樣品室蓋。5.取出比色皿清洗干凈后用蒸餾水沖洗并倒扣在粗濾紙上晾干。 第十五頁，共二十四頁。實驗目的了解葡萄糖氧化酶法測定血糖的根本原理

5、。掌握酶法測定血糖的實驗方法熟悉分光光度計的使用。 P57二、葡萄糖氧化酶法測定血糖第十六頁，共二十四頁。實驗原理：葡萄糖O2+H2O GOD 葡萄糖酸內酯2O222O2 + 4-氨基安替比林+酚 POD 紅色醌類化合物 + 2O +O2 用分光光度法將待測溶液與同樣處理的葡萄糖標準液比色，求待測血糖濃度。第十七頁，共二十四頁。儀器和藥品：血清、血糖試劑盒752可見紫外分光光度計。 第十八頁，共二十四頁。根本操作取三支試管，編號，下表加樣計算血糖濃度 編號試劑ml空白管標準管測定管血清0.02葡萄糖標準液(100mg/dl)0.02酚試劑1.51.51.5酶試劑1,51.51.5混勻后37度保

6、溫15分鐘,在505nm波長處比色，顯色后2小時穩(wěn)定。第十九頁，共二十四頁。吸量管的使用拿吸量管正確姿勢取液姿勢卸放姿勢第二十頁，共二十四頁。微量取樣器的操作調至所需體積值；吸：垂直持取樣器用大拇指按至第一檔；將吸頭插入溶液松開大拇指，液面上升； 放：移出液面，按至第一檔繼續(xù)按至第二檔以排空液體。注意：移取另一樣品時， 更換新吸頭。第二十一頁，共二十四頁。計算公式測定管吸光度值標準管吸光度值葡萄糖含量(mg/dL)=100參考數(shù)據(jù)： A測=0.217，A標=0.258， 葡萄糖含量=84mg/dl 第二十二頁，共二十四頁。思考題試分析影響本試驗的因素有哪些？操作分光光度計時要注意哪些關鍵點？第二十三頁，共二十四頁。內容總結p31實驗四 分光光度技術與。分光光度法是根據(jù)不同物質對于不同。波長的光波具有選擇性吸收的光學特性，建立起來的分析方法。都很高，是一種最常用的靈敏、精確、。Lambert-beer定律，該定律說明了溶液對單色光吸收的多