微生物真菌專題知識(shí)講座

1、微生物真菌專題知識(shí)講座微生物真菌專題知識(shí)講座第1頁2 概 念真菌(fungus)是一類含有經(jīng)典細(xì)胞核，有核膜和核仁，胞漿內(nèi)有完整細(xì)胞器，無根、莖、葉，不含葉綠素，無光合色素，細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和纖維素單細(xì)胞或多細(xì)胞異養(yǎng)真核細(xì)胞型微生物。微生物真菌專題知識(shí)講座第2頁真菌概念真菌(fungus)：真核細(xì)胞型微生物含有經(jīng)典細(xì)胞結(jié)構(gòu)（細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞壁）無根、莖、葉，不含葉綠素細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和（或）纖維素以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料能進(jìn)行有性生殖和（或）無性繁殖生長遲緩微生物真菌專題知識(shí)講座第3頁4 概 念真菌分布廣泛，種類繁多，大多數(shù)無害，甚至有利。有些真菌也是造成動(dòng)植物病害病原，與醫(yī)學(xué)相關(guān)約數(shù)百種，少

2、數(shù)真菌能夠引發(fā)人類感染性、中毒性及變態(tài)反應(yīng)性疾病。多年來，因?yàn)榭咕幤窂V泛應(yīng)用和或應(yīng)用激素、抗癌藥品造成機(jī)體免疫功效降低等原因，機(jī)會(huì)致病真菌感染也顯著增多。微生物真菌專題知識(shí)講座第4頁原核細(xì)胞型微生物與真核細(xì)胞型微生物比較 原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物 細(xì)胞核結(jié)構(gòu)核膜 無 有核仁 無 有分裂方式 主要以二分裂 有絲分裂，減數(shù)分裂細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)細(xì)胞膜 常缺乏固醇 常有固醇 細(xì)胞壁 含肽聚糖 含幾丁質(zhì)和（或）纖維素細(xì)胞器 較簡單，有中介體 復(fù)雜，有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體核糖體 70S 80S 呼吸系統(tǒng) 質(zhì)膜或中介體 線粒體 微生物真菌專題知識(shí)講座第5頁 第一節(jié) 分 類真菌分類主要依據(jù)為：有性生殖各種器官

3、 無性菌絲和孢子及菌落形態(tài)等特征 大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為真菌應(yīng)作為一個(gè)獨(dú)立界真菌界，并曾將真菌分為兩個(gè)門，即黏菌門和真菌門,真菌門又依據(jù)其生物學(xué)性狀等傳統(tǒng)地分為五個(gè)亞門。最新真菌分類是把真菌界分為四個(gè)門。微生物真菌專題知識(shí)講座第6頁分 類真菌門：5個(gè)亞門（傳統(tǒng)） 鞭毛菌亞門 接合菌亞門 子囊菌亞門 擔(dān)子菌亞門 半知菌亞門（醫(yī)學(xué)相關(guān)： 后4個(gè)亞門）最新分類：真菌界：4個(gè)門： 接合菌門 擔(dān)子菌門 子囊菌門 壺菌門微生物真菌專題知識(shí)講座第7頁第二節(jié) 基礎(chǔ)特征一、形態(tài)特征真菌比細(xì)菌大，用普通光學(xué)顯微鏡低倍或高倍鏡就可見。真菌菌體外有一層堅(jiān)硬細(xì)胞壁；其細(xì)胞膜含固醇而細(xì)菌無。按形態(tài)可將真菌分為單細(xì)胞和多細(xì)胞兩類。

4、微生物真菌專題知識(shí)講座第8頁第二節(jié) 基礎(chǔ)特征一、形態(tài)特征單細(xì)胞真菌： 圓形或卵圓形，常見于酵母菌或類酵母菌多細(xì)胞真菌： 菌絲+孢子 交織成團(tuán)菌絲體（霉菌） 二相性真菌： 37呈酵母型，25呈絲狀型真菌微生物真菌專題知識(shí)講座第9頁單細(xì)胞真菌 形態(tài)：圓形或橢圓形，如酵母型和類酵母型真菌。（1）酵母型真菌：有孢子，無菌絲 菌絲：無 繁殖方式：從母細(xì)胞芽生 菌落形態(tài)：與細(xì)菌相同 微生物真菌專題知識(shí)講座第10頁芽生孢子微生物真菌專題知識(shí)講座第11頁酵母菌在培養(yǎng)基上菌落形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第12頁單細(xì)胞真菌（2）類酵母型真菌：芽生孢子與假菌絲 菌絲：假菌絲 假 菌 絲：長芽體可伸進(jìn)培養(yǎng)基內(nèi) 繁殖方式

5、：從母細(xì)胞芽生 菌落形態(tài)：與酵母型相同，由假菌絲聯(lián)結(jié)成假菌絲體，稱為類酵母型菌落微生物真菌專題知識(shí)講座第13頁假菌絲假菌絲：類酵母菌進(jìn)行出芽生殖時(shí)，子母細(xì)胞不馬上分離而以狹小面積相連，這種藕節(jié)狀細(xì)胞串為假菌絲。 假菌絲與真菌絲顯著不一樣處在于其兩細(xì)胞間有一細(xì)腰，而不象真正菌絲橫隔處兩細(xì)胞寬度一致。 微生物真菌專題知識(shí)講座第14頁微生物真菌專題知識(shí)講座第15頁微生物真菌專題知識(shí)講座第16頁多細(xì)胞真菌 由菌絲和孢子兩大個(gè)別組成 1.菌絲 (hypha) 2.孢子 (spore)微生物真菌專題知識(shí)講座第17頁18（一）菌絲（hypha)真菌在適宜環(huán)境中，由孢子出芽長出芽管，逐步延長呈絲狀，稱為菌絲（

6、hypha）。菌絲繼續(xù)分支，交織成團(tuán)，稱菌絲體（mycelium）。菌絲分為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲中能形成孢子叫做生殖菌絲。有些真菌菌絲含有隔膜，叫有隔菌絲；有些真菌菌絲無隔膜，叫無隔菌絲。微生物真菌專題知識(shí)講座第18頁不一樣形態(tài)菌絲含有判別意義(1) 單純菌絲 細(xì)長管狀組織，有粗有細(xì)分枝或不分枝，有隔或無隔，有色或無色。(2) 球拍狀菌絲 菌絲在隔膜部位一端膨大球拍狀，排列規(guī)整。(3) 破梳狀菌絲 菌絲一側(cè)有不規(guī)則梳齒狀凸起，梳齒參差不齊如破梳狀。(4) 螺旋狀菌絲 菌絲呈彈簧狀，有規(guī)律性旋轉(zhuǎn)狀生長。(5) 結(jié)節(jié)狀菌絲 稍膨大側(cè)枝細(xì)胞、菌絲端細(xì)胞或中間性細(xì)胞彎曲成團(tuán)，互纏成結(jié)。(6)

7、鹿角狀菌絲 菌絲頂端呈不規(guī)則分枝，狀如鹿角。微生物真菌專題知識(shí)講座第19頁微生物真菌專題知識(shí)講座第20頁微生物真菌專題知識(shí)講座第21頁22（二）孢子(spore)孢子（spore）是真菌繁殖結(jié)構(gòu)。孢子分有性與無性兩類。孢子與細(xì)菌芽胞不一樣。 真菌孢子 細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，6070短時(shí)間即死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)孢子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽胞作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形狀形狀各種多樣圓形或橢圓形真菌孢子與細(xì)菌芽胞區(qū)分微生物真菌專題知識(shí)講座第22頁二相真菌：一些真菌可因寄生環(huán)境及培養(yǎng)條件（營養(yǎng)、溫度、氧氣等）不一樣而交替形成兩種形態(tài)，即在室溫中呈霉菌型，在37攝氏度或體內(nèi)呈單細(xì)

8、胞酵母型，這類真菌有雙向性，所以稱之為雙態(tài)真菌或二相真菌。如球孢子菌、組織胞漿菌及芽生菌。二相真菌微生物真菌專題知識(shí)講座第23頁二相真菌機(jī)體內(nèi)寄生37單細(xì)胞型：多細(xì)胞型：含動(dòng)物蛋白培養(yǎng)基酵母菌沙保氏培養(yǎng)基25普通培養(yǎng)基25絲狀菌微生物真菌專題知識(shí)講座第24頁孢子 (spore)孢子是生殖結(jié)構(gòu)，由生殖菌絲產(chǎn)生。是判定和分類依據(jù)。 (1) 無性孢子 不經(jīng)過兩性細(xì)胞配合而產(chǎn)生 ，菌絲上細(xì)胞分化或出芽生成，病原性真菌大多形成無性孢子。 (2) 有性孢子同一菌體或不一樣菌體上2個(gè)細(xì)胞融合經(jīng)減數(shù)分裂形成。絕大多數(shù)為非致病性真菌所含有。微生物真菌專題知識(shí)講座第25頁26無性孢子分為：分生孢子：大分生孢子小分

9、生孢子葉狀孢子：芽生孢子關(guān)節(jié)孢子厚膜孢子孢子囊孢子有性孢子分為：卵孢子、接合孢子、子囊孢子及擔(dān)孢子（二）孢子(spore)微生物真菌專題知識(shí)講座第26頁無性孢子1) 葉狀孢子 由菌絲細(xì)胞直接形成 芽生孢子 經(jīng)過發(fā)芽方式形成圓形或卵形細(xì)胞 關(guān)節(jié)孢子 由菌絲分化成長方形幾個(gè)節(jié)段，胞壁稍厚 厚膜孢子 是一個(gè)休眠細(xì)胞，條件適宜可再發(fā)芽微生物真菌專題知識(shí)講座第27頁微生物真菌專題知識(shí)講座第28頁2) 分生孢子 常見一個(gè)無性孢子形狀、大小、結(jié)構(gòu)、顏色等：分類、判定 大分生孢子 體積較大，多細(xì)胞性。孢子呈紡錘形，棍棒狀等。 小分生孢子 體積小，單細(xì)胞性，外壁薄，球形、卵形、梨形以及棍棒狀等。無性孢子微生物真

10、菌專題知識(shí)講座第29頁微生物真菌專題知識(shí)講座第30頁生殖菌絲末端細(xì)胞分裂或收縮形成；也可從菌絲側(cè)面出芽形成大分生孢子形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第31頁3) 孢 (子) 囊孢子由絲末端形成一個(gè)囊狀結(jié)構(gòu)（孢子囊），內(nèi)有許多孢囊孢子。 無性孢子微生物真菌專題知識(shí)講座第32頁多細(xì)胞真菌形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第33頁微生物真菌專題知識(shí)講座第34頁真菌孢子和細(xì)菌芽胞區(qū)分真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60-70短時(shí)間殺死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)孢子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細(xì)胞內(nèi)外形成只在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形微生物真菌專題知識(shí)

11、講座第35頁繁殖與培養(yǎng) 真菌繁殖方式依靠孢子及菌絲進(jìn)行繁殖:有性繁殖 無性繁殖無性繁殖 1.芽生: 酵母菌及酵母樣真菌 2.裂殖: 以二分裂法進(jìn)行繁殖 3.萌管: 萌發(fā)芽管，芽管伸延后形成菌絲 4.隔殖: 在分生孢子梗某一段落形成一隔膜，隨之原生質(zhì)濃縮而形成一個(gè)新孢子。孢子可再獨(dú)立繁殖。 微生物真菌專題知識(shí)講座第36頁真菌培養(yǎng)特征 真菌營養(yǎng)要求不高 常見沙保培養(yǎng)基 ：蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂。 溫度：2228，但一些深部感染真菌為37。 pH：4.06.0 生長速度:較慢“三低兩高”微生物真菌專題知識(shí)講座第37頁常見培養(yǎng)基沙氏瓊脂培養(yǎng)基Sabourauds Agar蛋白胨 10.g葡萄糖

12、40.0g瓊脂 20.0gpH值5.60.2 蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑。 微生物真菌專題知識(shí)講座第38頁馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基(分離真菌用)配方KH2PO4 1gMgSO4 7H2O 0.5g 蛋白胨 5g葡萄糖 10g瓊脂 15-20g水 1000mLpH 自然此培養(yǎng)液1000mL加1%孟加拉紅1%水溶液3.3mL.臨用時(shí)每100mL培養(yǎng)基中加入1%鏈霉素液0.3mL. 微生物真菌專題知識(shí)講座第39頁基礎(chǔ)原理葡萄糖主要作為碳源,蛋白胨主要作為氮源,KH2PO4和MgSO4 7H2O作為無機(jī)鹽,為微生物提供鉀,磷,鎂離子.而孟加拉紅和鏈霉素主要是細(xì)菌和放線

13、菌抑制劑,對(duì)真菌無抑制作用,因而真菌在這種培養(yǎng)基上能夠到達(dá)優(yōu)勢(shì)生長,從而到達(dá)分離真菌目標(biāo).微生物真菌專題知識(shí)講座第40頁察氏瓊脂Czapek Dox Agar硝酸鈉磷酸氫二鉀硫酸鎂氯化鉀硫酸亞鐵蔗糖瓊脂 3.01.00.50.50.0130.015.0 原理： 硝酸鈉提供氮源；磷酸氫二鉀是緩沖劑； 硫酸鎂、氯化鉀、硫酸亞鐵提供必須離子； 蔗糖提供碳源；瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑。用途：用于青霉,曲霉判定及保留菌種用(GB標(biāo)準(zhǔn))微生物真菌專題知識(shí)講座第41頁孟加拉紅培養(yǎng)基（虎紅培養(yǎng)基）Rose Bengal Medium蛋白胨 葡萄糖磷酸二氫鉀硫酸鎂(無水)瓊脂孟加拉紅氯霉素 5.010.01.00.5

14、20.00.0330.1 微生物真菌專題知識(shí)講座第42頁原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氫鉀為緩沖劑；硫酸鎂提供必須微量元素；瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑；氯霉素可抑制細(xì)菌生長；孟加拉紅作為選擇性抑菌劑可抑制細(xì)菌生長，并可減緩一些霉菌因生長過快而造成菌落漫延生長。 微生物真菌專題知識(shí)講座第43頁在沙保培養(yǎng)基上， 3種類型菌落： 1.酵母型菌落 ：菌落柔軟、光滑、濕潤。鏡下可見單細(xì)胞性芽生孢子，無菌絲。隱球菌菌落 2.類酵母型菌落（酵母樣菌落） ：和酵母型菌落相同，鏡下可見假菌絲。白色念珠菌菌落 3.絲狀型菌落 ：由多細(xì)胞菌絲體組成絮狀菌落（一個(gè)別向空中生長，并形成孢子）。絲狀真菌或霉菌

15、菌落。 (菌落較大)真菌培養(yǎng)特征微生物真菌專題知識(shí)講座第44頁微生物真菌專題知識(shí)講座第45頁赭曲霉微生物真菌專題知識(shí)講座第46頁鐮刀菌及其大分生孢子微生物真菌專題知識(shí)講座第47頁黃曲霉菌落形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第48頁黃曲霉鏡下特征微生物真菌專題知識(shí)講座第49頁青霉菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第50頁青霉菌鏡下形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第51頁鐮刀菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第52頁鐮刀菌鏡下特征微生物真菌專題知識(shí)講座第53頁變異與抵抗力變異性 屢次傳代或孵育過久，輕易變異（形態(tài)、結(jié)構(gòu)、菌落性狀、色素以及生理性狀 (毒力)改變。 抵抗力 熱：不強(qiáng)。孢子普通60經(jīng)1h即被殺滅（不一樣

16、于芽胞）。 干燥、日光、紫外線及各種化學(xué)藥品：耐受性較強(qiáng)。 1%3%石碳酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10甲醛液：較敏感。 微生物真菌專題知識(shí)講座第54頁55三、 致病性致病物質(zhì)： 細(xì)胞壁糖蛋白（有內(nèi)毒素樣活性）、毒素、莢膜等。致病方式： 病原性真菌感染（主要是外源性真菌感染） 條件致病性真菌感染（主要是內(nèi)源性真菌） 真菌變態(tài)反應(yīng)性疾?。ㄆぱ住⑾龋?真菌性中毒（毒素引發(fā)） 真菌毒素與腫瘤關(guān)系（黃曲霉毒素等）微生物真菌專題知識(shí)講座第55頁真菌性感染 真菌病 (mycoses)： 由真菌引發(fā)感染并表現(xiàn)臨床癥狀者 真菌致病力比細(xì)菌弱 致病性真菌、條件致病性真菌原發(fā)性感染： 球孢子菌(Cocci

17、diodes)、 皮炎芽生菌 (Blastomyoes dermatitidis)、 組織胞漿菌(Histoplasma)等繼發(fā)性感染： 機(jī)體防御機(jī)能顯著低下時(shí)。 致病機(jī)理：真菌粘附能力，對(duì)免疫系統(tǒng)功效抑制，胞壁中酶類微生物真菌專題知識(shí)講座第56頁真菌性超敏反應(yīng) 按性質(zhì)分：感染性超敏反應(yīng)：感染后, 型接觸性超敏反應(yīng)： 吸入或食入, 型按部位分: 皮膚超敏反應(yīng): 皮炎、濕疹、蕁麻疹、瘙癢癥等呼吸道超敏反應(yīng): 支氣管哮喘以及過敏性鼻炎消化道超敏反應(yīng) 微生物真菌專題知識(shí)講座第57頁真菌毒素中毒 農(nóng)作物、食物或飼料上表現(xiàn): 1. 肝、腎、神經(jīng)、造血系統(tǒng)損傷 2. 致癌性: 黃曲霉毒素,等 （原發(fā)性肝癌

18、）微生物真菌專題知識(shí)講座第58頁 免疫力不強(qiáng)，不能形成穩(wěn)固病后免疫 1. 抗體作用 2. 細(xì)胞免疫及超敏反應(yīng) 免 疫 性 微生物真菌專題知識(shí)講座第59頁微生物學(xué)檢驗(yàn)法 取材：淺部：鱗屑、病發(fā)或甲屑 深部：分泌物、排泄物、體液、 痰液及血液直接鏡檢： 粘稠或含角質(zhì)標(biāo)本:先加10%KOH，加溫后鏡檢 液體標(biāo)本：離心后鏡檢培養(yǎng)： 含抗生素沙保弱培養(yǎng)基 25 (絲狀真菌) 37 (酵母型真菌) 微生物真菌專題知識(shí)講座第60頁3.菌種判定(1)絲狀真菌：依據(jù)菌落形成所需要時(shí)間，在不一樣條件下生長情況，菌落表面及后面形態(tài)、色素，培養(yǎng)基中有沒有色素，培養(yǎng)物用乳酚棉藍(lán)染色后鏡檢找特征性標(biāo)志結(jié)構(gòu)。主要是形態(tài)學(xué)判

19、定，如直接涂片觀察，小培養(yǎng)顯微鏡判定， 微生物真菌專題知識(shí)講座第61頁毛霉 根霉 梨頭霉 微生物真菌專題知識(shí)講座第62頁微生物真菌專題知識(shí)講座第63頁微生物真菌專題知識(shí)講座第64頁微生物真菌專題知識(shí)講座第65頁微生物真菌專題知識(shí)講座第66頁曲霉結(jié)構(gòu)圖微生物真菌專題知識(shí)講座第67頁煙曲霉菌落煙曲霉,光鏡 X400微生物真菌專題知識(shí)講座第68頁黃曲霉菌落黃曲霉,光鏡 X200 微生物真菌專題知識(shí)講座第69頁黃曲霉鏡下特征微生物真菌專題知識(shí)講座第70頁黑曲霉菌落 黑曲霉,光鏡 X200微生物真菌專題知識(shí)講座第71頁土曲霉菌落 土曲霉，光鏡 X200 微生物真菌專題知識(shí)講座第72頁構(gòu)巢曲霉菌落 構(gòu)巢曲

20、霉,光鏡 X400微生物真菌專題知識(shí)講座第73頁雜色曲霉菌落雜色曲霉,光鏡 X400微生物真菌專題知識(shí)講座第74頁青霉菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第75頁青霉菌鏡下形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第76頁鐮刀菌菌落形態(tài)微生物真菌專題知識(shí)講座第77頁鐮刀菌鏡下特征微生物真菌專題知識(shí)講座第78頁2)酵母菌判定：形態(tài)學(xué)判定主要觀察有沒有假菌絲產(chǎn)生，如有則為念珠菌屬，如無則為念珠菌以外酵母菌;玉米吐溫誘導(dǎo)下特征菌絲及特征孢子檢驗(yàn)，血清芽管形成在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上還必須進(jìn)行生化判定：有標(biāo)準(zhǔn)判定，自動(dòng)儀器判定，顯色判定，其中，自動(dòng)儀器判定(如API20C，ID32C等)，顯色判定對(duì)于酵母樣真菌判定，特點(diǎn)是快速簡便;微生物真菌專題知識(shí)講座第79頁標(biāo)準(zhǔn)判定是按傳統(tǒng)雙歧表流程判定(包含糖同化試驗(yàn)，糖發(fā)酵試驗(yàn)，CAFC酚氧化酶試驗(yàn)，尿酶試驗(yàn)，KNO3同化試驗(yàn)，脂肪酸需求試驗(yàn))，是真菌判定金標(biāo)準(zhǔn)，系統(tǒng)準(zhǔn)確，缺點(diǎn)是程序繁瑣，耗時(shí)長，與臨床治療不太適應(yīng)。血清學(xué)玻片凝集試驗(yàn)，動(dòng)物致病性試驗(yàn)，微生物真菌專題知識(shí)講座第80頁血清學(xué)方法檢測(cè)真菌抗原成份 念珠菌感染和曲霉感染血清學(xué)檢測(cè)可分為抗體檢測(cè)和抗原檢測(cè)兩大類；因?yàn)榘l(fā)