中藥及其制劑含量測(cè)定方法課件

1、中藥及其制劑的含量測(cè)定方法徐雋佳 藥學(xué)0202 3021901009 中藥及其制劑制劑產(chǎn)生的療效不是某單一成分作用的結(jié)果，也不是某些成分簡(jiǎn)單作用的加和，是各成分之間的協(xié)同作用。用一種成份衡量其質(zhì)量?jī)?yōu)劣有失偏頗，某單一成分的含量高低并不一定與其臨床作用呈簡(jiǎn)單的線性關(guān)系。目的確定某種成分的含量高低是否符合規(guī)定以判定藥物的優(yōu)劣,確保臨床用藥的安全有效 有重要的作用.特點(diǎn)只能對(duì)某一個(gè)或幾個(gè)成分進(jìn)行測(cè)定受到對(duì)照品的限制測(cè)定藥味選擇君藥毒性藥貴重藥樣品的預(yù)處理粉碎提取分離凈化常用定量方法化學(xué)分析法：重量法、容量法分光光度法：可見(jiàn)-紫外分光光度法薄層掃描法(TLCS）：薄層吸收掃描法， 薄層熒光掃描法高效液

2、相色譜法氣相色譜法熒光分析法重量法分類(lèi)揮發(fā)法：有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)的組分的含量萃取法：被測(cè)組分在互不相容的兩相中溶解度不同 （例）沉淀法：將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物昆明山海棠片的含量測(cè)定 取本品60片 除去糖衣 精密稱定 研細(xì) 精密稱取適量（約相當(dāng)于25片） 置200ml錐形瓶中 加適量硅藻土 混勻 加乙醇70ml 加熱回流40min 放冷 濾過(guò) 濾渣再加乙醇加熱回流濾過(guò) 合并濾液 置水浴上蒸干 殘?jiān)欲}酸溶液（1 100）30ml置水浴上攪拌使溶解 放冷 濾過(guò) 殘?jiān)儆名}酸同法提取3次 合并濾液于分液漏斗中 加氨試液使溶液成堿性 用乙醚振搖提取4次 合并乙醚液 用水振搖洗滌2

3、次 乙醚液用濾紙濾過(guò) 濾液置已稱定重量的蒸發(fā)皿中 低溫水浴蒸去乙醚 殘?jiān)由倭恳掖颊舾?置100干燥至恒重 稱定重量(不得少于1.0mg/片) 返回特點(diǎn)：靈敏度高，精度高，操作簡(jiǎn)便要求：在紫外（200-400nm）或可見(jiàn)光區(qū)（400-760nm）有吸收應(yīng)用：用于最大吸收波長(zhǎng)較高，吸收較強(qiáng)的 組分一般測(cè)定前樣品須經(jīng)過(guò)提取、純化等步驟以免除干擾返回 吸收系數(shù)法（舉例) 單波長(zhǎng)光度法 對(duì)照品比較法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 雙波長(zhǎng)法 計(jì)算分光光度法 系數(shù)倍率法 無(wú)需對(duì)照品，方法簡(jiǎn)便至少做5點(diǎn)，A在0.3-0.7間為宜左金丸中小檗堿含量的測(cè)定 A*D含量（mg/ml)= W*100*L *100% (E1%1cm)

4、r樣品經(jīng)連續(xù)回流提取，柱色譜凈化后，用吸收系數(shù)法測(cè)定 照分光光度法，在345nm處測(cè)定吸收度按鹽酸小檗堿（C20H17NO4HCl）的吸收度（E1%1cm）為728計(jì)算返回以薄層色譜法為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的薄層色譜組分原位分析方法及薄層色譜的記錄方法用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中吸收紫外光或可見(jiàn)光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描. 即固定波長(zhǎng)，斑點(diǎn)移動(dòng)，測(cè)定A-l或F-l曲線 將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定返回2 1吸光度KX1.校正前的標(biāo)準(zhǔn)曲線2.校正后的標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度與物質(zhì)濃度服從Kubelka-Munk方程K為單位薄層厚度的吸光系數(shù)KX稱吸

5、收參數(shù)（相當(dāng)于斑點(diǎn)單位面積中物質(zhì)的含量）X為薄層厚度 根據(jù)散射參數(shù)SX的值將A-KX曲線校正后即可用于定量SX的值于薄層板固定相的性質(zhì)、粒度和分布有關(guān) 在一定范圍內(nèi)，峰面積與斑點(diǎn)中的物質(zhì)的量（或點(diǎn)樣量）成直線關(guān)系返回薄層熒光掃描法適用范圍 本身具有熒光或經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測(cè)定.光源用氙燈或汞燈，采用直線式掃描.專屬性強(qiáng)，靈敏度高 靈敏度比吸收法高13個(gè)數(shù)量級(jí)，最低可測(cè)到1050pg樣品，但適用范圍較窄.對(duì)于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，可直接采用熒光掃描法測(cè)定.對(duì)于有紫外吸收，而不能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，需采用熒光淬滅法測(cè)定. TLCS定量分析方法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法(外標(biāo)一點(diǎn)法 ,外標(biāo)兩點(diǎn)法 )最

6、常用 簡(jiǎn)便，但點(diǎn)樣必須準(zhǔn)確. 薄層板間差異較大，應(yīng)采用隨行標(biāo)準(zhǔn)法（即供試品與標(biāo)準(zhǔn)溶液或?qū)φ找航徊纥c(diǎn)在同一板上）.外標(biāo)一點(diǎn)法 工作曲線通過(guò)原點(diǎn)，只需點(diǎn)一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，與供試液同板展開(kāi)，對(duì)比，測(cè)定組分含量. 定量依據(jù) C =F1 A C-組分的重量或濃度; A-組分的峰面積 F1-直線的斜率或比例常數(shù)外標(biāo)二點(diǎn)法 工作曲線不通過(guò)原點(diǎn)時(shí)，需用外標(biāo)二點(diǎn)法定量. 至少需點(diǎn)二種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 (或一種濃度兩種點(diǎn)樣量)，才能決定一直線.計(jì)算 C=F1A+F2 F2-縱坐標(biāo)的截距，其值由儀器自動(dòng)算出.內(nèi)標(biāo)法(內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法,內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法)定義：選一個(gè)純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確稱取一定量?jī)?nèi)標(biāo)物加至供試液及標(biāo)準(zhǔn)液

7、中，計(jì)算供試品溶液中某組分含量的定量方法.優(yōu)點(diǎn)：定量準(zhǔn)確度與點(diǎn)樣量無(wú)關(guān).缺點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)物不易尋找,操作麻煩.較少應(yīng)用內(nèi)標(biāo)物要求：Rf合適，與被測(cè)組分及樣品中其他組分完全分離，純度高返回高效液相色譜法反相色譜法特點(diǎn) 流動(dòng)相極性大于固定相極性的分配色譜法。常用固定相 非極性固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS或C18)，辛基鍵合硅膠（C8）等常用流動(dòng)相 甲醇-水或乙腈-水。出峰先后 極性強(qiáng)的組分因K值較小先流出色譜柱，極性小的組分后流出。流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例增加，極性減小，洗脫力增強(qiáng)中藥制劑多采用反相高效液相色譜法反相離子對(duì)色譜色譜柱 C18或C8流動(dòng)相 含310mmol/L離子對(duì)試劑的反相流動(dòng)相. 被分離組分及離子對(duì)試劑的疏水性越大,所需有機(jī)溶劑比例越高.離子對(duì)選擇堿類(lèi)分離 常用烷基磺酸(鹽)，如己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉等.酸類(lèi)分離 常用烷基季銨鹽，如磷酸四丁基銨等流動(dòng)相pH 使被