中藥及其制劑含量測(cè)定方法課件

1、中藥及其制劑的含量測(cè)定方法徐雋佳 藥學(xué)0202 3021901009 中藥及其制劑制劑產(chǎn)生的療效不是某單一成分作用的結(jié)果，也不是某些成分簡(jiǎn)單作用的加和，是各成分之間的協(xié)同作用。用一種成份衡量其質(zhì)量?jī)?yōu)劣有失偏頗，某單一成分的含量高低并不一定與其臨床作用呈簡(jiǎn)單的線性關(guān)系。目的確定某種成分的含量高低是否符合規(guī)定以判定藥物的優(yōu)劣,確保臨床用藥的安全有效 有重要的作用.特點(diǎn)只能對(duì)某一個(gè)或幾個(gè)成分進(jìn)行測(cè)定受到對(duì)照品的限制測(cè)定藥味選擇君藥毒性藥貴重藥樣品的預(yù)處理粉碎提取分離凈化常用定量方法化學(xué)分析法：重量法、容量法分光光度法：可見-紫外分光光度法薄層掃描法(TLCS）：薄層吸收掃描法， 薄層熒光掃描法高效液

2、相色譜法氣相色譜法熒光分析法重量法分類揮發(fā)法：有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)的組分的含量萃取法：被測(cè)組分在互不相容的兩相中溶解度不同 （例）沉淀法：將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物昆明山海棠片的含量測(cè)定 取本品60片 除去糖衣 精密稱定 研細(xì) 精密稱取適量（約相當(dāng)于25片） 置200ml錐形瓶中 加適量硅藻土 混勻 加乙醇70ml 加熱回流40min 放冷 濾過 濾渣再加乙醇加熱回流濾過 合并濾液 置水浴上蒸干 殘?jiān)欲}酸溶液（1 100）30ml置水浴上攪拌使溶解 放冷 濾過 殘?jiān)儆名}酸同法提取3次 合并濾液于分液漏斗中 加氨試液使溶液成堿性 用乙醚振搖提取4次 合并乙醚液 用水振搖洗滌2

3、次 乙醚液用濾紙濾過 濾液置已稱定重量的蒸發(fā)皿中 低溫水浴蒸去乙醚 殘?jiān)由倭恳掖颊舾?置100干燥至恒重 稱定重量(不得少于1.0mg/片) 返回特點(diǎn)：靈敏度高，精度高，操作簡(jiǎn)便要求：在紫外（200-400nm）或可見光區(qū)（400-760nm）有吸收應(yīng)用：用于最大吸收波長(zhǎng)較高，吸收較強(qiáng)的 組分一般測(cè)定前樣品須經(jīng)過提取、純化等步驟以免除干擾返回 吸收系數(shù)法（舉例) 單波長(zhǎng)光度法 對(duì)照品比較法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 雙波長(zhǎng)法 計(jì)算分光光度法 系數(shù)倍率法 無(wú)需對(duì)照品，方法簡(jiǎn)便至少做5點(diǎn)，A在0.3-0.7間為宜左金丸中小檗堿含量的測(cè)定 A*D含量（mg/ml)= W*100*L *100% (E1%1cm)

4、r樣品經(jīng)連續(xù)回流提取，柱色譜凈化后，用吸收系數(shù)法測(cè)定 照分光光度法，在345nm處測(cè)定吸收度按鹽酸小檗堿（C20H17NO4HCl）的吸收度（E1%1cm）為728計(jì)算返回以薄層色譜法為基礎(chǔ)發(fā)展起來的薄層色譜組分原位分析方法及薄層色譜的記錄方法用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描. 即固定波長(zhǎng)，斑點(diǎn)移動(dòng)，測(cè)定A-l或F-l曲線 將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定返回2 1吸光度KX1.校正前的標(biāo)準(zhǔn)曲線2.校正后的標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度與物質(zhì)濃度服從Kubelka-Munk方程K為單位薄層厚度的吸光系數(shù)KX稱吸

5、收參數(shù)（相當(dāng)于斑點(diǎn)單位面積中物質(zhì)的含量）X為薄層厚度 根據(jù)散射參數(shù)SX的值將A-KX曲線校正后即可用于定量SX的值于薄層板固定相的性質(zhì)、粒度和分布有關(guān) 在一定范圍內(nèi)，峰面積與斑點(diǎn)中的物質(zhì)的量（或點(diǎn)樣量）成直線關(guān)系返回薄層熒光掃描法適用范圍 本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測(cè)定.光源用氙燈或汞燈，采用直線式掃描.專屬性強(qiáng)，靈敏度高 靈敏度比吸收法高13個(gè)數(shù)量級(jí)，最低可測(cè)到1050pg樣品，但適用范圍較窄.對(duì)于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，可直接采用熒光掃描法測(cè)定.對(duì)于有紫外吸收，而不能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，需采用熒光淬滅法測(cè)定. TLCS定量分析方法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法(外標(biāo)一點(diǎn)法 ,外標(biāo)兩點(diǎn)法 )最

6、常用 簡(jiǎn)便，但點(diǎn)樣必須準(zhǔn)確. 薄層板間差異較大，應(yīng)采用隨行標(biāo)準(zhǔn)法（即供試品與標(biāo)準(zhǔn)溶液或?qū)φ找航徊纥c(diǎn)在同一板上）.外標(biāo)一點(diǎn)法 工作曲線通過原點(diǎn)，只需點(diǎn)一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，與供試液同板展開，對(duì)比，測(cè)定組分含量. 定量依據(jù) C =F1 A C-組分的重量或濃度; A-組分的峰面積 F1-直線的斜率或比例常數(shù)外標(biāo)二點(diǎn)法 工作曲線不通過原點(diǎn)時(shí)，需用外標(biāo)二點(diǎn)法定量. 至少需點(diǎn)二種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 (或一種濃度兩種點(diǎn)樣量)，才能決定一直線.計(jì)算 C=F1A+F2 F2-縱坐標(biāo)的截距，其值由儀器自動(dòng)算出.內(nèi)標(biāo)法(內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法,內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法)定義：選一個(gè)純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確稱取一定量?jī)?nèi)標(biāo)物加至供試液及標(biāo)準(zhǔn)液

7、中，計(jì)算供試品溶液中某組分含量的定量方法.優(yōu)點(diǎn)：定量準(zhǔn)確度與點(diǎn)樣量無(wú)關(guān).缺點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)物不易尋找,操作麻煩.較少應(yīng)用內(nèi)標(biāo)物要求：Rf合適，與被測(cè)組分及樣品中其他組分完全分離，純度高返回高效液相色譜法反相色譜法特點(diǎn) 流動(dòng)相極性大于固定相極性的分配色譜法。常用固定相 非極性固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS或C18)，辛基鍵合硅膠（C8）等常用流動(dòng)相 甲醇-水或乙腈-水。出峰先后 極性強(qiáng)的組分因K值較小先流出色譜柱，極性小的組分后流出。流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例增加，極性減小，洗脫力增強(qiáng)中藥制劑多采用反相高效液相色譜法反相離子對(duì)色譜色譜柱 C18或C8流動(dòng)相 含310mmol/L離子對(duì)試劑的反相流動(dòng)相. 被分離組分及離子對(duì)試劑的疏水性越大,所需有機(jī)溶劑比例越高.離子對(duì)選擇堿類分離 常用烷基磺酸(鹽)，如己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉等.酸類分離 常用烷基季銨鹽，如磷酸四丁基銨等流動(dòng)相pH 使被