基因工程的操作步驟

1、基因工程的操作步驟第1頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二 最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒，其中常含有抗藥基因，如四環(huán)素的標(biāo)記基因。質(zhì)粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性作用，但復(fù)制只能在宿主細胞內(nèi)成。 質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細菌染色體（即擬核DNA）之外，并且具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。質(zhì)粒是基因工程最常用的運載體。第2頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，產(chǎn)生的是平末端。當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線兩側(cè)切開時，產(chǎn)生的是黏性末端。第3頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二四、基因

2、工程基本操作的四個步驟1、目的基因的獲取2、基因表達載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細胞4、目的基因的檢測與鑒定第4頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二目的基因的獲取1、目的基因主要是指_編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因，是人們所需要轉(zhuǎn)移或改造的基因。如蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因，還有植物的抗?。共《?、抗細菌）基因、種子貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因、干擾素基因等。2、獲取目的基因的常用方法有哪些?（1）從基因文庫中獲?。?）利用PCR技術(shù)擴增（3）人工合成請閱讀P9第一和二兩段第5頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二（一）從基因文庫中獲取目的基因 將含有某種生

3、物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫基因文庫 基因組文庫部分基因文庫（如:cDNA文庫）基因文庫第6頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二 概念：PCR全稱為_，是一項 在生物_復(fù)制_的核酸合成技術(shù) 條件：_、 _、_ 、 _.原理：_方式：以_方式擴增，即_（n為擴增循 環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對引物DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增(二)利用PCR技術(shù)擴增目的基因第7頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分

4、，星期二 過程高溫變性（解旋為單鏈）低溫退火（引物與單鏈互補結(jié)合）適溫延伸（在Taq酶的作用下合成 與模板互補的DNA雙鏈）重復(fù)循環(huán)第8頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二思考：PCR技術(shù)與DNA復(fù)制有何異同？第9頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二 對DNA連接酶、DNA聚合酶等的理解名 稱 作 用 生理過程DNA連接酶 限制酶DNA聚合酶RNA聚合酶解旋酶連接兩個DNA片段基因工程切割某種特定的脫氧核苷酸序列基因工程將眾多游離的脫氧核苷酸聚合成脫氧核苷酸長鏈DNA復(fù)制逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄RNA復(fù)制DNA復(fù)制轉(zhuǎn)錄使堿基間氫鍵斷裂形成脫氧核苷酸鏈將眾多游離的核糖核

5、苷酸聚合成核糖核苷酸長鏈第10頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二8.（2010廣州模擬）下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是（ ）A. B. C. D.C第11頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二第12頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢?第13頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二基因文庫的構(gòu)建方法鳥槍法：供體細胞中的DNA許多DNA片段運載體限制酶與載體連接載入受

6、體細胞產(chǎn)生特定性狀導(dǎo)入外源DNA擴增目的基因分離(直接分離法)第14頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA單鏈DNA反轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶雙鏈DNA(目的基因)第15頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的信使RNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學(xué)合成第16頁，共17頁，2022年，5月20日，12點5分，星期二上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點？優(yōu)點缺點鳥槍法反轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基酸合成DNA法操作簡便廣泛使用工作