細(xì)菌室工作流程

1、細(xì)菌室工作流程簡(jiǎn)介一、標(biāo)本接種與涂片染色（一）標(biāo)本的接種：培育基選擇及接種方式：標(biāo)本種類(lèi)培育基組合接種方式痰、咽拭子血平皿+中國(guó)藍(lán)平皿+流感嗜血桿菌平皿三區(qū)劃線(xiàn)法尿血平皿+中國(guó)藍(lán)平皿血：直、曲線(xiàn)法，中：三區(qū)劃線(xiàn)法分泌物血平皿+中國(guó)藍(lán)平皿三區(qū)劃線(xiàn)法大便SS平皿+TCBS平皿三區(qū)劃線(xiàn)法輸液液體、腹水、一般肉湯管直接傾倒膽汁、胃液、膿液等血、腦脊液、骨髓、血培育瓶用注射器注入胸水、關(guān)節(jié)液培育類(lèi)型選擇性培育基接種方式真菌沙氏培育基直接劃線(xiàn)淋球菌巧克力淋球菌培育基直接劃線(xiàn)結(jié)核桿菌羅氏結(jié)核菌培育管直接劃線(xiàn)L型細(xì)菌高滲肉湯培育管直接接種霍亂弧菌堿性蛋白胨培育管直接接種血培育瓶選擇以下：培育瓶瓶的顏色抽血量（

2、ml）.標(biāo)準(zhǔn)需氧培育瓶藍(lán)色510標(biāo)準(zhǔn)厭氧培育瓶紫紅色510中和抗生素需氧培育瓶綠色510中和抗生素厭氧培育瓶橙黃色510小兒血培育瓶淺黃色12結(jié)核桿菌血培育瓶黑色510（二）標(biāo)本涂片和染色1、看濕片（未染色片）：正常人體的下呼吸道是無(wú)菌的，上呼吸道有正常菌群棲居。下呼吸道標(biāo)本根源有多種：痰、支氣管肺灌洗吸出液、氣管抽出液或刷子、肺穿刺或活組織等。痰標(biāo)本在接種前需涂片鏡檢，以確認(rèn)留取的標(biāo)本能否有臨床意義。在低倍鏡下計(jì)數(shù)每低倍視線(xiàn)白細(xì)胞和上皮細(xì)胞的均勻數(shù)量，依據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)判定標(biāo)本能否合適做培育：白細(xì)胞上皮細(xì)胞能否合適A：2510是B：2525是C：1025否不合格的標(biāo)本應(yīng)電話(huà)告訴臨床科室重留標(biāo)本。霍

3、亂弧菌（招標(biāo)樣動(dòng)力，運(yùn)動(dòng)似流星）2、革蘭氏染色：涂片革蘭氏染色找細(xì)菌：革蘭氏陽(yáng)性菌：球菌（G+C）、桿菌少（G+b）.革蘭氏陰性菌：桿菌（G-b）、球菌少（G-C）涂片革蘭氏染色找真菌：找菌絲、孢子菌群剖析：大便標(biāo)本球、桿菌比率。備注：加德納爾氏菌是細(xì)菌性陰道癥的主要致病菌之一，此癥有以下特點(diǎn)：1)陰道排出物過(guò)多；2)陰道PH4.5；3)陰道上皮細(xì)胞被G-小b覆蓋形成為線(xiàn)索或線(xiàn)球細(xì)胞；4)KOH試驗(yàn)陽(yáng)性：陰道分泌物滴加10%KOH后，立刻出現(xiàn)魚(yú)腥味和氨味；3、抗酸染色：查找抗酸桿菌。如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌。4、墨汁染色：查找新式隱球菌。特色：有莢膜，夾膜折光性強(qiáng)。5、看菌落形態(tài)：1.肉眼看：血平

4、皿上：有臍窩狀的可能是草綠色鏈球菌，微黃色可能是奈瑟氏菌，干燥的可能是真菌，乳白色的可能是葡萄球菌，潤(rùn)濕的可能是腸球菌。中國(guó)藍(lán)上：微黃色可能是奈瑟氏菌，有選擇性地促使革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)，發(fā)酵型革蘭氏陰性桿菌因分解乳糖能力不一樣，在此平皿上的菌落顏色不一樣。流感嗜血桿菌平皿上：微黃色可能是奈瑟氏菌，.（三）轉(zhuǎn)種：1.陽(yáng)性血培育瓶：1）涂片革蘭氏染色：找到細(xì)菌向臨床科室報(bào)告；未找到細(xì)菌暫不報(bào)告，待轉(zhuǎn)種生長(zhǎng)后再報(bào)；2）轉(zhuǎn)種：血平皿、中國(guó)藍(lán)平皿。2.肉湯管：1）培育3天后仍舊透明清明：轉(zhuǎn)種血平皿一個(gè)；2）污濁：轉(zhuǎn)種血平皿、中國(guó)藍(lán)平皿各一個(gè)。二、細(xì)菌判定（視標(biāo)本、科室而定）（一）標(biāo)本培育的菌落計(jì)數(shù)及存心義

5、菌落的挑選1、痰：（1）菌落計(jì)數(shù)1）只有第一區(qū)生長(zhǎng)，計(jì)103/ml；2）第一、二區(qū)生長(zhǎng)，第三區(qū)不長(zhǎng)，計(jì)105/ml；3）三個(gè)區(qū)均生長(zhǎng)，計(jì)107/ml；（2）菌落挑選1）103/ml：視科別而定，除ICU、CCU、急診科、老年科和呼吸科危大病號(hào)外，一般報(bào)告為：無(wú)致病菌生長(zhǎng)；2）103/ml：除非細(xì)菌生長(zhǎng)較純或可能為葡萄球菌需進(jìn)一步辦理外一般報(bào)告為：無(wú)致病菌生長(zhǎng)；3）103/ml：依據(jù)菌落形態(tài)將此中意義不大的標(biāo)本報(bào)告單發(fā)出，一般報(bào)告為：無(wú)致病菌生長(zhǎng)；微黃色報(bào)告奈瑟氏菌；血平皿上有臍窩狀可能為草綠色鏈球菌，需做以下判定：4）血平皿：草綠色鏈球菌做OPTOCHIN；.中國(guó)藍(lán)：真菌（YBC）轉(zhuǎn)沙氏、種芽

6、管。2、尿：1）菌落計(jì)數(shù)：定量接種環(huán)涂抹法：用10l定量接種環(huán)取一環(huán)尿液在血平皿上做均勻劃線(xiàn)接種，置于3524h培育，計(jì)數(shù)生長(zhǎng)的菌落數(shù)，再乘以100，即為每毫升菌落數(shù)。菌落生長(zhǎng)過(guò)多不計(jì)其數(shù)時(shí)，報(bào)告105cfu/ml。2）一般狀況下細(xì)菌數(shù)不會(huì)超出103cfu/ml，診療泌尿系感染的細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)是：菌落計(jì)數(shù)105cfu/ml。3、前列腺液：1）密集生長(zhǎng)分純（選乳白色的菌落）判定2）偶有生長(zhǎng)報(bào)告為：無(wú)致病菌生長(zhǎng)3）無(wú)菌生長(zhǎng)報(bào)告為：無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)4、大便：中國(guó)藍(lán)及SS平板：找渺小、無(wú)色、透明的菌落KIA試驗(yàn)：血清學(xué)判定：報(bào)告無(wú)致病菌生長(zhǎng)TCBS平板：黃色菌落氧化酶：+：O/F試驗(yàn)：上機(jī)藥敏：報(bào)告無(wú)致病菌生長(zhǎng)

7、：極少，可能為梅氏弧菌，報(bào)告無(wú)致病菌生長(zhǎng)5、其余標(biāo)本（血、腦脊液、靜脈管等）的細(xì)菌判定：一般不需計(jì)數(shù)，只需有細(xì)菌生長(zhǎng)（污染菌除外），就需進(jìn)行判定辦理。.三、鑒識(shí)試驗(yàn)：1、血平板（鏈球菌屬）渺小、圓形、表面圓滑、灰白色、半透明（1）選血平皿上有臍窩狀的菌落（可能是草綠色鏈球菌）：在血平皿上做OPTOCHIN（奧卜托欣）試驗(yàn)：1）：報(bào)告肺炎鏈球菌2）：報(bào)告草綠色鏈球菌（2）牛奶美藍(lán)試驗(yàn)：1）：糞腸球菌2）：手工生化反響組鑒識(shí)菌類(lèi)（3）衛(wèi)星現(xiàn)象（用金黃色葡萄球菌做）：1）血平皿：流感或付流感M-H平皿：付流感：無(wú)致病菌生長(zhǎng)：無(wú)致病菌生長(zhǎng)：流感2）細(xì)菌與生長(zhǎng)因子：血平皿上有V+X因子，（藥平皿）M-H

8、平皿上有V因子。細(xì)菌名稱(chēng)所需生長(zhǎng)因子流感嗜血桿菌+付流感嗜血桿菌杜克氏菌2、涂片：陽(yáng)性桿菌上機(jī)BAC卡陽(yáng)性球菌做觸酶（H2O2）陰性桿菌做氧化酶（OX）真菌（YBC）轉(zhuǎn)沙氏（分純）、種芽管（看是不是白色念珠菌）.可疑金黃色葡萄球菌要加做凝結(jié)酶加以確立3、用KOH（氫氧化鉀）拉絲試驗(yàn)（鑒識(shí)陰性菌仍是陽(yáng)性菌）拉絲：是陰性菌拉絲：是陽(yáng)性菌4、觸酶（H2O2）：先挑取菌落1個(gè)，加1滴H2O2，立刻出現(xiàn)氣泡的為陽(yáng)性，其次為陰性。在革蘭氏陽(yáng)性菌中，鏈球菌觸酶試驗(yàn)陰性，葡萄球菌、微球菌均陰性。5、凝結(jié)酶：可疑為金黃色葡萄球菌做凝結(jié)酶：100ul血漿300ul生理鹽水1個(gè)菌落。6、上機(jī)、藥敏：G-b做氧化酶，

9、G+C做觸酶（CAT）革蘭氏陰性菌G-b要做氧化酶（試紙片法）。中國(guó)藍(lán)上生長(zhǎng)G-b的菌落（非真菌）：氧化酶：上機(jī)GNI反響卡涂黑、革蘭氏陰性菌藥敏3板（）氧化酶：上機(jī)GNI反響卡、革藍(lán)氏陰性菌藥敏4板（）中國(guó)藍(lán)不生長(zhǎng)G+C的白色菌落做觸酶：1）凝結(jié)酶：玻片法試管法：報(bào)金黃色葡萄球菌、G藥敏葡萄球菌（OX）苯唑：上機(jī)GPI、G藥敏葡萄球菌（OX）苯唑西林：上機(jī)GPI、G藥敏鏈球菌2）：牛奶美藍(lán)1）：糞腸球菌、腸球菌藥敏.2）：手工生化反響組鑒識(shí)菌類(lèi)7、種芽管（判定是不是白色念珠菌）同時(shí)轉(zhuǎn)沙氏：種芽管：300ul血清1個(gè)真菌菌落1）：報(bào)告為白色念珠菌不用上機(jī)直接做真菌藥敏；2）：上機(jī)YBC（真菌）

10、卡室溫?cái)R置24h后放入檢測(cè)儀，如不可以判定其種屬，需再室溫?cái)R置24h后放入檢測(cè)儀判定，如仍不可以判定其種屬則需做手工生化判定真菌藥敏。四、分純平板上不純的菌落經(jīng)涂片1）一般原則是血血，中國(guó)蘭中國(guó)蘭，沙氏沙氏。2）革蘭氏陽(yáng)性菌：轉(zhuǎn)血平板；3）革蘭氏陰性菌：轉(zhuǎn)中國(guó)蘭；4）真菌：轉(zhuǎn)沙氏培育基。五、上機(jī)藥敏1、常用的幾種生化反響卡1）革蘭氏陰性菌：GNI反響卡，將菌液充入卡中直接上機(jī)；2）革蘭氏陽(yáng)性球菌：GPI反響卡，將菌液充入卡中直接上機(jī)；3）革蘭氏陽(yáng)性桿菌：BAC反響卡，將菌液充入卡中直接上機(jī)；4）真菌：YBC反響卡，將菌液充入卡中于室溫?cái)R置24h后再上機(jī)讀卡。2、上機(jī)孔標(biāo)志：1）革蘭氏陰性菌：G

11、NI反響卡，氧化酶陽(yáng)性（）.2）革蘭氏陰性菌：GNI反響卡，氧化酶陰性（）3）革蘭氏陽(yáng)性菌：GPI反響卡，觸酶陽(yáng)性（）4）革蘭氏陽(yáng)性菌：GPI反響卡，觸酶陰性（）5）BAC反響卡：不需涂黑6）YBC反響卡：室溫?cái)R置24h，讀卡，（）室溫?cái)R置48小時(shí)。3、藥敏1）革蘭氏陰性菌：氧化酶：1、2、3號(hào)革蘭氏陰性菌藥敏板：1、2、3、4號(hào)革蘭氏陰性菌藥敏板2）革蘭氏陽(yáng)性球菌：觸酶：1革蘭氏陽(yáng)性菌藥敏板、葡萄球菌藥敏板及苯唑西林（OX）：1號(hào)革蘭氏陽(yáng)性菌藥敏板、鏈球菌藥敏板3）革蘭氏陽(yáng)性桿菌：一般不做藥敏，如臨床醫(yī)生要求，則使用Etest法判讀最小抑菌濃度MIC。4）真菌：1、2號(hào)真菌藥敏板5）ESBL

12、：4、第二天丈量藥敏結(jié)果并在計(jì)算機(jī)細(xì)菌判定系統(tǒng)中查記判定出的前一天上機(jī)細(xì)菌的菌名，如非真菌類(lèi)細(xì)菌未被判定出，則須人工查閱判定手冊(cè)，如仍不可以查出，可進(jìn)行手工生化判定或從頭上機(jī)；如真菌類(lèi)細(xì)菌未被鑒定出，則須將生化反響卡再于室溫?cái)R置24h后上機(jī)讀卡即可獲取結(jié)果。六、報(bào)告結(jié)果1）將中文菌名印于原始化驗(yàn)單上；2）關(guān)于痰標(biāo)本培育，將其濕片結(jié)果及菌落計(jì)數(shù)印于化驗(yàn)單上；.關(guān)于尿標(biāo)本培育，將其菌落計(jì)數(shù)印于化驗(yàn)單上；3）打印非真菌（革蘭氏陰性、陽(yáng)性菌）藥敏單，貼于化驗(yàn)單上；4）打印真菌藥敏單，貼于化驗(yàn)單上；5）超廣譜內(nèi)酰胺酶（ESBL）陽(yáng)性的要在報(bào)告單上注明；6）將報(bào)告日期、報(bào)告者姓名印于化驗(yàn)單，而后在登記本上

13、記錄結(jié)果，最后向臨床科室發(fā)出報(bào)告單（包含化驗(yàn)單和藥敏單）。七、其余項(xiàng)目（一）接種項(xiàng)目1、淋球菌培育：3548h培育后，渺小、透明似水滴狀，突出、圓滑、圓形、無(wú)色素菌落氧化酶（1）：糖類(lèi)分解試驗(yàn)及相關(guān)試驗(yàn)：葡萄糖（）麥牙糖、乳糖、蔗果糖、硝亞硝（）多糖體合成及DNA酶（）（2）：報(bào)告為無(wú)淋球菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性的要加做紙片法藥敏。2、L型細(xì)菌：由串珠狀鏈桿菌變異而來(lái)，形態(tài)及染色性多變，最突出的特色是細(xì)胞壁缺失，確認(rèn)往常靠察看菌落形態(tài)和染色性。低倍鏡下：細(xì)胞壁缺失的細(xì)菌典型的L型：“油煎蛋”樣菌落，中心部位致密，透光度差，嵌入生長(zhǎng)，四周透明；不典型的G型：比L型菌落大，無(wú)透光度差的核心，整個(gè)菌落呈透明顆粒

14、狀；不典型的F型：菌落有時(shí)可見(jiàn)致密核心，其周邊或所有由長(zhǎng)絲組成；備注：L型細(xì)菌具“返祖”特征，利用此點(diǎn)可與支原體（不返祖）相鑒識(shí)，并且只有反祖后才能進(jìn)行種別判定，其對(duì)作用于細(xì)胞壁的抗生素.（如青霉素、頭孢霉素等）常有耐藥性，而能擾亂細(xì)菌蛋白合成的抗生素（如卡那霉素、鏈霉素、慶大霉素等）對(duì)L型細(xì)菌的克制作用較強(qiáng)。3、支原體培育專(zhuān)用肉湯管：1）紅色清明透明：報(bào)告為有尿素支原體生長(zhǎng)；2）紅色污濁：可能有其余細(xì)菌污染，報(bào)告為無(wú)支原體生長(zhǎng)；3）培育3天后不變紅、保持原色，報(bào)告為無(wú)支原體生長(zhǎng)；4）藥敏有專(zhuān)用試劑盒：判斷藥敏結(jié)果的方法與判斷有無(wú)支原體生長(zhǎng)的方法基真同樣：顏色變紅的為耐藥，即生長(zhǎng)；顏色不變的為敏感，即不長(zhǎng)；藥物濃度高的不變色，濃度低的變紅為中介，即在高濃度的藥物中不生長(zhǎng)，而在低濃度的藥物中可生長(zhǎng)。4、空氣培育（計(jì)數(shù)）：所有平板的菌落數(shù)之和平板數(shù)157報(bào)