細菌室工作流程

1、細菌室工作流程簡介一、標本接種與涂片染色（一）標本的接種：培育基選擇及接種方式：標本種類培育基組合接種方式痰、咽拭子血平皿+中國藍平皿+流感嗜血桿菌平皿三區(qū)劃線法尿血平皿+中國藍平皿血：直、曲線法，中：三區(qū)劃線法分泌物血平皿+中國藍平皿三區(qū)劃線法大便SS平皿+TCBS平皿三區(qū)劃線法輸液液體、腹水、一般肉湯管直接傾倒膽汁、胃液、膿液等血、腦脊液、骨髓、血培育瓶用注射器注入胸水、關節(jié)液培育類型選擇性培育基接種方式真菌沙氏培育基直接劃線淋球菌巧克力淋球菌培育基直接劃線結核桿菌羅氏結核菌培育管直接劃線L型細菌高滲肉湯培育管直接接種霍亂弧菌堿性蛋白胨培育管直接接種血培育瓶選擇以下：培育瓶瓶的顏色抽血量（

2、ml）.標準需氧培育瓶藍色510標準厭氧培育瓶紫紅色510中和抗生素需氧培育瓶綠色510中和抗生素厭氧培育瓶橙黃色510小兒血培育瓶淺黃色12結核桿菌血培育瓶黑色510（二）標本涂片和染色1、看濕片（未染色片）：正常人體的下呼吸道是無菌的，上呼吸道有正常菌群棲居。下呼吸道標本根源有多種：痰、支氣管肺灌洗吸出液、氣管抽出液或刷子、肺穿刺或活組織等。痰標本在接種前需涂片鏡檢，以確認留取的標本能否有臨床意義。在低倍鏡下計數每低倍視線白細胞和上皮細胞的均勻數量，依據以下標準判定標本能否合適做培育：白細胞上皮細胞能否合適A：2510是B：2525是C：1025否不合格的標本應電話告訴臨床科室重留標本?；?/p>

3、亂弧菌（招標樣動力，運動似流星）2、革蘭氏染色：涂片革蘭氏染色找細菌：革蘭氏陽性菌：球菌（G+C）、桿菌少（G+b）.革蘭氏陰性菌：桿菌（G-b）、球菌少（G-C）涂片革蘭氏染色找真菌：找菌絲、孢子菌群剖析：大便標本球、桿菌比率。備注：加德納爾氏菌是細菌性陰道癥的主要致病菌之一，此癥有以下特點：1)陰道排出物過多；2)陰道PH4.5；3)陰道上皮細胞被G-小b覆蓋形成為線索或線球細胞；4)KOH試驗陽性：陰道分泌物滴加10%KOH后，立刻出現(xiàn)魚腥味和氨味；3、抗酸染色：查找抗酸桿菌。如結核桿菌、麻風桿菌。4、墨汁染色：查找新式隱球菌。特色：有莢膜，夾膜折光性強。5、看菌落形態(tài)：1.肉眼看：血平

4、皿上：有臍窩狀的可能是草綠色鏈球菌，微黃色可能是奈瑟氏菌，干燥的可能是真菌，乳白色的可能是葡萄球菌，潤濕的可能是腸球菌。中國藍上：微黃色可能是奈瑟氏菌，有選擇性地促使革蘭氏陰性菌生長，發(fā)酵型革蘭氏陰性桿菌因分解乳糖能力不一樣，在此平皿上的菌落顏色不一樣。流感嗜血桿菌平皿上：微黃色可能是奈瑟氏菌，.（三）轉種：1.陽性血培育瓶：1）涂片革蘭氏染色：找到細菌向臨床科室報告；未找到細菌暫不報告，待轉種生長后再報；2）轉種：血平皿、中國藍平皿。2.肉湯管：1）培育3天后仍舊透明清明：轉種血平皿一個；2）污濁：轉種血平皿、中國藍平皿各一個。二、細菌判定（視標本、科室而定）（一）標本培育的菌落計數及存心義

5、菌落的挑選1、痰：（1）菌落計數1）只有第一區(qū)生長，計103/ml；2）第一、二區(qū)生長，第三區(qū)不長，計105/ml；3）三個區(qū)均生長，計107/ml；（2）菌落挑選1）103/ml：視科別而定，除ICU、CCU、急診科、老年科和呼吸科危大病號外，一般報告為：無致病菌生長；2）103/ml：除非細菌生長較純或可能為葡萄球菌需進一步辦理外一般報告為：無致病菌生長；3）103/ml：依據菌落形態(tài)將此中意義不大的標本報告單發(fā)出，一般報告為：無致病菌生長；微黃色報告奈瑟氏菌；血平皿上有臍窩狀可能為草綠色鏈球菌，需做以下判定：4）血平皿：草綠色鏈球菌做OPTOCHIN；.中國藍：真菌（YBC）轉沙氏、種芽

6、管。2、尿：1）菌落計數：定量接種環(huán)涂抹法：用10l定量接種環(huán)取一環(huán)尿液在血平皿上做均勻劃線接種，置于3524h培育，計數生長的菌落數，再乘以100，即為每毫升菌落數。菌落生長過多不計其數時，報告105cfu/ml。2）一般狀況下細菌數不會超出103cfu/ml，診療泌尿系感染的細菌學標準是：菌落計數105cfu/ml。3、前列腺液：1）密集生長分純（選乳白色的菌落）判定2）偶有生長報告為：無致病菌生長3）無菌生長報告為：無細菌生長4、大便：中國藍及SS平板：找渺小、無色、透明的菌落KIA試驗：血清學判定：報告無致病菌生長TCBS平板：黃色菌落氧化酶：+：O/F試驗：上機藥敏：報告無致病菌生長

7、：極少，可能為梅氏弧菌，報告無致病菌生長5、其余標本（血、腦脊液、靜脈管等）的細菌判定：一般不需計數，只需有細菌生長（污染菌除外），就需進行判定辦理。.三、鑒識試驗：1、血平板（鏈球菌屬）渺小、圓形、表面圓滑、灰白色、半透明（1）選血平皿上有臍窩狀的菌落（可能是草綠色鏈球菌）：在血平皿上做OPTOCHIN（奧卜托欣）試驗：1）：報告肺炎鏈球菌2）：報告草綠色鏈球菌（2）牛奶美藍試驗：1）：糞腸球菌2）：手工生化反響組鑒識菌類（3）衛(wèi)星現(xiàn)象（用金黃色葡萄球菌做）：1）血平皿：流感或付流感M-H平皿：付流感：無致病菌生長：無致病菌生長：流感2）細菌與生長因子：血平皿上有V+X因子，（藥平皿）M-H

8、平皿上有V因子。細菌名稱所需生長因子流感嗜血桿菌+付流感嗜血桿菌杜克氏菌2、涂片：陽性桿菌上機BAC卡陽性球菌做觸酶（H2O2）陰性桿菌做氧化酶（OX）真菌（YBC）轉沙氏（分純）、種芽管（看是不是白色念珠菌）.可疑金黃色葡萄球菌要加做凝結酶加以確立3、用KOH（氫氧化鉀）拉絲試驗（鑒識陰性菌仍是陽性菌）拉絲：是陰性菌拉絲：是陽性菌4、觸酶（H2O2）：先挑取菌落1個，加1滴H2O2，立刻出現(xiàn)氣泡的為陽性，其次為陰性。在革蘭氏陽性菌中，鏈球菌觸酶試驗陰性，葡萄球菌、微球菌均陰性。5、凝結酶：可疑為金黃色葡萄球菌做凝結酶：100ul血漿300ul生理鹽水1個菌落。6、上機、藥敏：G-b做氧化酶，

9、G+C做觸酶（CAT）革蘭氏陰性菌G-b要做氧化酶（試紙片法）。中國藍上生長G-b的菌落（非真菌）：氧化酶：上機GNI反響卡涂黑、革蘭氏陰性菌藥敏3板（）氧化酶：上機GNI反響卡、革藍氏陰性菌藥敏4板（）中國藍不生長G+C的白色菌落做觸酶：1）凝結酶：玻片法試管法：報金黃色葡萄球菌、G藥敏葡萄球菌（OX）苯唑：上機GPI、G藥敏葡萄球菌（OX）苯唑西林：上機GPI、G藥敏鏈球菌2）：牛奶美藍1）：糞腸球菌、腸球菌藥敏.2）：手工生化反響組鑒識菌類7、種芽管（判定是不是白色念珠菌）同時轉沙氏：種芽管：300ul血清1個真菌菌落1）：報告為白色念珠菌不用上機直接做真菌藥敏；2）：上機YBC（真菌）

10、卡室溫擱置24h后放入檢測儀，如不可以判定其種屬，需再室溫擱置24h后放入檢測儀判定，如仍不可以判定其種屬則需做手工生化判定真菌藥敏。四、分純平板上不純的菌落經涂片1）一般原則是血血，中國蘭中國蘭，沙氏沙氏。2）革蘭氏陽性菌：轉血平板；3）革蘭氏陰性菌：轉中國蘭；4）真菌：轉沙氏培育基。五、上機藥敏1、常用的幾種生化反響卡1）革蘭氏陰性菌：GNI反響卡，將菌液充入卡中直接上機；2）革蘭氏陽性球菌：GPI反響卡，將菌液充入卡中直接上機；3）革蘭氏陽性桿菌：BAC反響卡，將菌液充入卡中直接上機；4）真菌：YBC反響卡，將菌液充入卡中于室溫擱置24h后再上機讀卡。2、上機孔標志：1）革蘭氏陰性菌：G

11、NI反響卡，氧化酶陽性（）.2）革蘭氏陰性菌：GNI反響卡，氧化酶陰性（）3）革蘭氏陽性菌：GPI反響卡，觸酶陽性（）4）革蘭氏陽性菌：GPI反響卡，觸酶陰性（）5）BAC反響卡：不需涂黑6）YBC反響卡：室溫擱置24h，讀卡，（）室溫擱置48小時。3、藥敏1）革蘭氏陰性菌：氧化酶：1、2、3號革蘭氏陰性菌藥敏板：1、2、3、4號革蘭氏陰性菌藥敏板2）革蘭氏陽性球菌：觸酶：1革蘭氏陽性菌藥敏板、葡萄球菌藥敏板及苯唑西林（OX）：1號革蘭氏陽性菌藥敏板、鏈球菌藥敏板3）革蘭氏陽性桿菌：一般不做藥敏，如臨床醫(yī)生要求，則使用Etest法判讀最小抑菌濃度MIC。4）真菌：1、2號真菌藥敏板5）ESBL

12、：4、第二天丈量藥敏結果并在計算機細菌判定系統(tǒng)中查記判定出的前一天上機細菌的菌名，如非真菌類細菌未被判定出，則須人工查閱判定手冊，如仍不可以查出，可進行手工生化判定或從頭上機；如真菌類細菌未被鑒定出，則須將生化反響卡再于室溫擱置24h后上機讀卡即可獲取結果。六、報告結果1）將中文菌名印于原始化驗單上；2）關于痰標本培育，將其濕片結果及菌落計數印于化驗單上；.關于尿標本培育，將其菌落計數印于化驗單上；3）打印非真菌（革蘭氏陰性、陽性菌）藥敏單，貼于化驗單上；4）打印真菌藥敏單，貼于化驗單上；5）超廣譜內酰胺酶（ESBL）陽性的要在報告單上注明；6）將報告日期、報告者姓名印于化驗單，而后在登記本上

13、記錄結果，最后向臨床科室發(fā)出報告單（包含化驗單和藥敏單）。七、其余項目（一）接種項目1、淋球菌培育：3548h培育后，渺小、透明似水滴狀，突出、圓滑、圓形、無色素菌落氧化酶（1）：糖類分解試驗及相關試驗：葡萄糖（）麥牙糖、乳糖、蔗果糖、硝亞硝（）多糖體合成及DNA酶（）（2）：報告為無淋球菌生長，陽性的要加做紙片法藥敏。2、L型細菌：由串珠狀鏈桿菌變異而來，形態(tài)及染色性多變，最突出的特色是細胞壁缺失，確認往?？坎炜淳湫螒B(tài)和染色性。低倍鏡下：細胞壁缺失的細菌典型的L型：“油煎蛋”樣菌落，中心部位致密，透光度差，嵌入生長，四周透明；不典型的G型：比L型菌落大，無透光度差的核心，整個菌落呈透明顆粒

14、狀；不典型的F型：菌落有時可見致密核心，其周邊或所有由長絲組成；備注：L型細菌具“返祖”特征，利用此點可與支原體（不返祖）相鑒識，并且只有反祖后才能進行種別判定，其對作用于細胞壁的抗生素.（如青霉素、頭孢霉素等）常有耐藥性，而能擾亂細菌蛋白合成的抗生素（如卡那霉素、鏈霉素、慶大霉素等）對L型細菌的克制作用較強。3、支原體培育專用肉湯管：1）紅色清明透明：報告為有尿素支原體生長；2）紅色污濁：可能有其余細菌污染，報告為無支原體生長；3）培育3天后不變紅、保持原色，報告為無支原體生長；4）藥敏有專用試劑盒：判斷藥敏結果的方法與判斷有無支原體生長的方法基真同樣：顏色變紅的為耐藥，即生長；顏色不變的為敏感，即不長；藥物濃度高的不變色，濃度低的變紅為中介，即在高濃度的藥物中不生長，而在低濃度的藥物中可生長。4、空氣培育（計數）：所有平板的菌落數之和平板數157報