薄層液基細(xì)胞術(shù)(TCT)在非婦科標(biāo)本中的應(yīng)用課件

1、薄層液基細(xì)胞術(shù)在非婦科標(biāo)本中的應(yīng)用 1.前言細(xì)胞學(xué)方法是腫瘤規(guī)范化診治的第一步，具有方便、簡(jiǎn)單、可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)。常用方法：傳統(tǒng)涂片 液基薄片（液基薄片、LCT）2.傳統(tǒng)制片與液基制片比較傳統(tǒng)手工制片液基薄片20%標(biāo)本移至玻片、干固定100%標(biāo)本被收集至保存液中、濕固定制片技術(shù)不穩(wěn)定、不能重復(fù)制片技術(shù)穩(wěn)定可靠、可以重復(fù)易受血、粘液、炎性物遮蓋去除血、粘液、及大量炎性遮蓋物細(xì)胞分布不均勻,易重疊細(xì)胞分布均勻集中,不易重疊鏡下觀察費(fèi)時(shí)費(fèi)力,易漏診診鏡下觀察省時(shí)省力,不易漏診3.液基薄片在非婦科的運(yùn)用隨著液基薄片在宮頸癌及其癌前病變篩查中的廣泛應(yīng)用， 液基薄片檢查技術(shù)日趨成熟穩(wěn)定，可制出優(yōu)質(zhì)細(xì)胞薄層涂片

2、 ， 有效地提高了病變細(xì)胞的檢出率。但對(duì)于非婦科標(biāo)本，因各種液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的不同及標(biāo)本 的多樣性 ， 造成了制片質(zhì)量不穩(wěn)定，從而影響了細(xì)胞學(xué)的診斷。 我院應(yīng)用液基薄片 制作非婦科標(biāo)本，不斷摸索總結(jié)， 制出了較為滿意的液基細(xì)胞涂片。4.2129例液基薄片結(jié)果分析1044例標(biāo)本中用液基薄片檢出陽(yáng)性422例（40.4），以心包積液、尿液、胸水、腹水陽(yáng)性率為高。1085例乳腺囊液標(biāo)本中檢出陽(yáng)性134例（12.4%）液基薄片與活檢診斷的總符合率超過70分項(xiàng)統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性率，液基薄片均高于傳統(tǒng)涂片，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05 ）5.2129例液基薄片判讀結(jié)果檢驗(yàn)例數(shù)陽(yáng)性數(shù)陽(yáng)性率活檢對(duì)照數(shù)相符例數(shù)相符率尿液

3、1659457.0%412765.9%胸水33914542.8%291655.2%腹水2318135.1%282071.4%心包積液221672.7%22100%痰與支氣管刷檢物1996834.2%383078.9%腦脊液12433.3%11100.%其它761418.4%5480.0%合計(jì)104442240.4%14410069.4%乳腺108513412.4%614777.0%6.傳統(tǒng)涂片與液基薄片陽(yáng)性率比較項(xiàng)目腹水尿痰胸水腦脊液心包液乳腺涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片統(tǒng)計(jì)數(shù)1333231707165194219925373397012

4、11622135261085陽(yáng)性數(shù)16881389412768483145243516354134陽(yáng)性率12.6%35.1%5.4%57.0%6.5%34.2%19.0%42.8%2.9%33.3%30.2%72.7%2.6%12.4%p值0.050.050.050.050.050.050.057.液基標(biāo)本的采集及處理收集樣本 離心濃縮 振蕩混勻 觀察外觀 制片 8.不同類型標(biāo)本處理方法不一粘液（痰液）標(biāo)本 尿液標(biāo)本胸腹水標(biāo)本 針吸標(biāo)本細(xì)胞學(xué)標(biāo)本包埋9.粘液（痰液）標(biāo)本處理制片 痰：將樣本直接收集在保存液中。 刷出物：將收集樣本用的刷子直接放在保存液中。 如樣本含粘液較多，可加入1ml DTT

5、（二硫蘇糖醇）溶解液將保存液放在振蕩儀上，1500-2000轉(zhuǎn)振蕩10分鐘將樣本置離心機(jī)上，1500-2000轉(zhuǎn)離心5-10分鐘，棄去上清液觀察細(xì)胞團(tuán)外觀，若仍有肉眼可見粘液或血?jiǎng)t加入30ml稀釋10倍的DTT重復(fù)步驟2-3或用10%的冰醋酸將沉淀物加入保存液中，將保存液瓶靜止15分鐘后上機(jī)制片收集標(biāo)本 振蕩混勻觀察外觀 離心濃縮 10.痰標(biāo)本的采集自然咳痰法： 病人早晨咳痰之前，應(yīng)漱口、以避免食物殘?jiān)图?xì)菌污染。指導(dǎo)病人深呼吸后用力咳痰，幾次重復(fù)同樣動(dòng)作，咳出肺深部的痰液吐入標(biāo)本盒內(nèi)，立即進(jìn)行處理。超生波噴霧吸入引痰法： 不能自然咳痰的病人，霧化吸入法可以獲取較好的痰標(biāo)本。采用超生波霧化器作

6、氣溶膠方法引痰，引痰時(shí)，病人張口深吸氣，由鼻孔出氣。吸入10-15分鐘，隨時(shí)將痰咳入標(biāo)本容器中，立即送檢并進(jìn)行處理。11.男，65歲TCT診斷：（痰）考慮為小細(xì)胞癌痰12.活檢診斷：（肺）小細(xì)胞癌圖13.女，70歲液基薄片診斷：（支氣管粘膜刷檢物）考慮為腺癌支氣管粘膜刷檢物14.活檢診斷：（左支氣管）低分化腺癌。圖15.尿液標(biāo)本處理制片 將樣本置離心機(jī)上，以2000r/min,離心10分鐘倒去上清液，觀察細(xì)胞團(tuán)外觀，若有肉眼可見血液則加入30ml紅細(xì)胞處理液（10%冰醋酸）重復(fù)步驟1把沉渣轉(zhuǎn)移到保存液中，振蕩保存液5分鐘。上機(jī)制片觀察外觀 離心濃縮 16.采集注意事項(xiàng)自然排尿 通常取晨起中段尿

7、，懷疑有尿道腫瘤者，收集前段初始尿，膀胱按摩能增加細(xì)胞的脫落。輸尿管導(dǎo)尿 如懷疑有腎盂或輸尿管腫瘤，自然排尿尿內(nèi)細(xì)胞太少而不能診斷或要確定腫瘤的發(fā)生部位時(shí)，可在膀胱鏡下作輸尿管導(dǎo)尿，尿量不少于10毫升。17.女，16歲液基薄片診斷： （尿）腎透明細(xì)胞癌可能性大尿液18.活檢診斷：（腎）透明細(xì)胞癌19.男，67歲液基薄片診斷：（尿液）考慮腎源性腫瘤尿液20.活檢診斷： （左腎）中分化鱗狀細(xì)胞癌圖21.制片 收集新鮮的體液樣本棄去上清液，震蕩使細(xì)胞恢復(fù)懸浮狀態(tài)將樣本置離心機(jī)上，1500-2000轉(zhuǎn)離心5-10分鐘觀察細(xì)胞團(tuán)外觀，若仍有肉眼可見粘液或血?jiǎng)t加入30ml稀釋10倍的DTT重復(fù)步驟2-3或

8、用10%的冰醋酸將沉淀物加入保存液中，將保存液瓶靜止15分鐘后上機(jī)制片收集標(biāo)本 恢復(fù)懸浮觀察外觀 離心濃縮 胸腹水標(biāo)本處理22.漿膜腔穿刺液采集的注意事項(xiàng)（胸腹水、心包積液等）漿膜腔穿刺術(shù)常由臨床醫(yī)生操作，送檢標(biāo)本量一般為100-200毫升為宜。 抽出的標(biāo)本應(yīng)立即送檢，因積液在離體后各種細(xì)胞很快會(huì)自溶破壞。 積液內(nèi)如含有較多纖維蛋白原時(shí)，抽出后容易凝固，影響細(xì)胞學(xué)檢查，因此在抽取標(biāo)本時(shí)，可按標(biāo)本總量加入1：10的0.106MOL/L的枸櫞酸鈉溶液混勻后送檢，以防止凝固。23.男，72歲液基薄片診斷：（胸水）上皮源性惡性腫瘤（癌）胸水24.活檢診斷：（左肺）低分化腺癌圖CK（+），CK7（+），

9、TTF-1（-）25.男，67歲液基薄片診斷：（胸水）可見惡性腫瘤細(xì)胞，請(qǐng)臨床結(jié)合病史綜合分析。胸水26.活檢診斷：送檢骨髓穿刺組織考慮為髓系白血病圖27.男，67歲液基薄片診斷：（腹水）考慮淋巴造血腫瘤腹水28.活檢診斷： （骨髓穿刺）符合B細(xì)胞性淋巴瘤圖CD3（散在+）,CD20（+）,MPO-,CD10（個(gè)別+）,Tdt-,CD5-,CD23-29.制片 將樣本直接收集到離心管中，加入30ml清洗液將樣本在振蕩儀上1500-2000轉(zhuǎn)振蕩10分鐘后，再置離心機(jī)上1500-2000轉(zhuǎn)離心5-10分鐘，棄去上清液觀察細(xì)胞團(tuán)外觀，若仍有肉眼可見粘液或血?jiǎng)t加入30ml稀釋10倍的DTT重復(fù)步驟2

10、-3或用10%的冰醋酸將沉淀物加入保存液中，將保存液瓶靜止15分鐘后上機(jī)制片收集標(biāo)本 觀察外觀 振蕩離心針吸標(biāo)本處理30.針吸標(biāo)本適應(yīng)癥與禁忌證適應(yīng)癥： 乳腺囊液、腫大的淋巴結(jié)與各部位的腫塊。禁忌證 腫塊過小，直徑小于0.5CM 腫塊過深，固定性差，活動(dòng)性大 動(dòng)脈瘤和有嚴(yán)重出血性疾病的病人 腫塊鄰近為生命重要器官31.女，38歲液基薄片診斷：（右乳腫塊）乳腺惡性腫瘤乳腺32.活檢診斷：（右乳）浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌圖33.乳腺女，40歲液基薄片診斷： （右乳）梭型細(xì)胞呈中度不典型增生34.活檢診斷： （右乳腫物）送檢乳腺組織鏡下可見大量的管腔樣結(jié)構(gòu)，管腔內(nèi)壁被覆單層扁平上皮，個(gè)別管腔內(nèi)可見漿液；局灶呈叢

11、狀、乳頭狀增生，管腔內(nèi)上皮細(xì)胞個(gè)別呈釘突樣，具有輕度異型性。病變符合復(fù)雜性血管瘤（Complex Hemangioma）。35.包埋 收集適量的體液樣本將樣本置離心機(jī)上1500-2000轉(zhuǎn)離心5-10分鐘觀察細(xì)胞團(tuán)外觀，若仍有肉眼可見粘液或血?jiǎng)t加入30ml稀釋10倍的DTT重復(fù)步驟2-3或用10%的冰醋酸取細(xì)胞團(tuán)并加入適量的預(yù)糊化淀粉，攪拌成面粉團(tuán)，用包埋紙包住面粉團(tuán)，放進(jìn)包埋盒，合好并打上病理號(hào)收集標(biāo)本 觀察外觀 離心濃縮非婦科標(biāo)本包埋處理將包好的包埋盒放進(jìn)固定液里固定數(shù)小時(shí)即可固定 36.病例回顧患者，女，40歲，“頭痛嘔吐12天”尋醫(yī)，臨床以“腦膜炎，繼發(fā)癲癇”收入院。入院檢查：腰穿示腦壓、腦脊液白細(xì)胞升高；MR示腦干、小腦腦膜及C1-T4腦髓表明脊膜呈線狀、結(jié)節(jié)狀增厚強(qiáng)化，考慮腦膜、脊膜炎可能性大（見下頁(yè)圖）。行抗菌抗病毒效果不佳。 37.影像學(xué)資料38.病例回顧后抽少許腦脊液送病理科行液基薄片檢驗(yàn)，鏡下發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞（下圖），擬行免疫組化進(jìn)一步明確 39.遂將剩余腦脊液經(jīng)處理包埋成蠟塊行免疫組化檢測(cè)（見下頁(yè)圖），結(jié)合免疫組化液基薄片報(bào)告“(腦脊液）上皮源性惡性腫瘤，組織學(xué)類型及來源考慮胃腸道腺癌；建議做相應(yīng)檢查?！?病例回顧40.免疫組化結(jié)果CK陽(yáng)性CK陽(yáng)性CK20陽(yáng)性腦脊液包埋成蠟塊，箭頭示印戒樣細(xì)胞41.胃鏡和病理活檢所見胃鏡見胃竇部腫物 胃竇部活