噬菌體展示總結(jié)技術(shù)

1、精選公文范文噬菌體展示總結(jié)技 術(shù)各位讀友大家好，此文檔由網(wǎng)絡(luò)收集而來(lái)，歡迎您下載，謝謝 篇一：噬菌體展示技術(shù)噬菌體展示技術(shù)關(guān)鍵詞：噬菌體展示 組裝 融合 蛋白2008-07-21 00:00來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 點(diǎn) 擊次數(shù)：3662噬菌體展示技術(shù)是將外源 蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體 外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源 基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí)，外 源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬 菌體表面的生物技術(shù)。到目前為止，人 們已開發(fā)出了單鏈絲狀噬菌體展示系 統(tǒng)、2噬菌體展示系統(tǒng)、T4噬菌體展示 系統(tǒng)等數(shù)種噬菌體展示系統(tǒng)。本文主要 概述了噬菌體展示技術(shù)的基本原理、噬 菌體展示系統(tǒng)研究以及技術(shù)特

2、點(diǎn)等，并 跟蹤了目前該領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展和發(fā) 展前景。關(guān)鍵詞：噬菌體展示；組裝；融和 精選公文范文1精選公文范文蛋白1985 年，Smith G P1第一次將外 源基因插入絲狀噬菌體fi的基因ni,使 目的基因編碼的多肽以融合蛋白的形式 展示在噬菌體表面，從而創(chuàng)建了噬菌體 展示技術(shù)。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是將特定 分子的基因型和表型統(tǒng)一在同一病毒顆 粒內(nèi)，即在噬菌體表面展示特定蛋白質(zhì)， 而在噬菌體核心DNA中則含有該蛋白 的結(jié)構(gòu)基因。另外，這項(xiàng)技術(shù)把基因表達(dá)產(chǎn)物與 親和篩選結(jié)合起來(lái)，可以利用適當(dāng)?shù)陌?蛋白將目的蛋白或多肽挑選出來(lái)。近年 來(lái)，隨著噬菌體展示技術(shù)的日益完善， 該技術(shù)在眾多基礎(chǔ)和應(yīng)用研究領(lǐng)

3、域產(chǎn)生 的影響已日漸明顯。一、噬菌體展示技術(shù)的原理噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白 質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬 菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在 閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常 功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外 精選公文范文2精選公文范文 殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌 體的重新組裝而展示在噬菌體表面。思 想?yún)R報(bào)專題被展示的多肽或蛋白可以保 持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以 利于靶分子的識(shí)別和結(jié)合。肽庫(kù)與固相 上的靶蛋白分子經(jīng)過(guò)一定時(shí)間孵育后， 洗去未結(jié)合的游離噬菌體，然后以競(jìng)爭(zhēng) 受體或酸洗脫下與靶分子結(jié)合吸附的噬 菌體，洗脫的噬菌體感染宿主細(xì)胞后經(jīng) 繁殖擴(kuò)增，進(jìn)行下一輪洗脫

4、，經(jīng)過(guò)3輪 5輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”后，與靶分子特 異結(jié)合的噬菌體得到高度富集2。所得的噬菌體制劑可用來(lái)做 進(jìn)一步富集有期望結(jié)合特性的目標(biāo)噬菌 體。二、噬菌體展示系統(tǒng) 單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng) （1）Pin展示系統(tǒng)。絲狀噬菌體是單鏈DNA病毒，pn 是病毒的次要外殼蛋白，位于病毒顆粒 的尾端，是噬菌體感染大腸埃希菌所必 須的。每個(gè)病毒顆粒都有3個(gè)5個(gè)拷貝 精選公文范文3精選公文范文PIII蛋白3,其在結(jié)構(gòu)上可分為N1、N2 和CT 3個(gè)功能區(qū)域4-5,這3個(gè)功能區(qū) 域由兩段富含甘氨酸的連接肽G1和G2 連接。其中，N1和N2與噬菌體吸附大 腸埃希菌菌毛及穿透細(xì)胞膜有關(guān)6，而 CT構(gòu)成噬菌體外殼

5、蛋白結(jié)構(gòu)的一部分， 并將整個(gè)Pin蛋白的c端結(jié)構(gòu)域錨定于 噬菌體的一端。Pin有2個(gè)位點(diǎn)可供外 源序列插入，當(dāng)外源的多肽或蛋白質(zhì)融 合于Pin蛋白的信號(hào)肽(sgin)和ni之間 時(shí)，該系統(tǒng)保留了完整的Pin蛋白，噬 菌體仍有感染性；但若外源多肽或蛋白 直接與Pin蛋白的ct結(jié)構(gòu)域相連，則 噬菌體喪失感染性，這時(shí)重組噬菌體的 感染性由輔助噬菌體表達(dá)的完整Pin蛋 白來(lái)提供。Pin蛋白很容易被蛋白水解酶 水解，所以有輔助噬菌體超感染時(shí)，可 以使每個(gè)噬菌體平均展示不到一個(gè)融合 蛋白，范文TOP100即所謂“單價(jià)”噬菌 體。(2) PW及其他展示系統(tǒng)。-精選公文范文精選公文范文P而是絲狀噬菌體的主要外

6、殼蛋 白，位于噬菌體外側(cè)，C端與DNA結(jié)合， N端伸出噬菌體外，每個(gè)病毒顆粒有2 700個(gè)左右P面拷貝8-9。PW的N端附 近可融合五肽，但不能融合更長(zhǎng)的肽鏈， 因?yàn)檩^大的多肽或蛋白會(huì)造成空間障 礙，影響噬菌體裝配2, 10-11,使其失 去感染力。但有輔助噬菌體參與時(shí)，可 提供野生型PW蛋白，降低價(jià)數(shù)，此時(shí) 可融合多肽甚至抗體片段。此外，尚有 絲狀噬菌體PW展示系統(tǒng)的研究報(bào)道 12 PW蛋白的C端暴露于噬菌體表面， 可以作為外源蛋白的融合位點(diǎn)，可以用 于研究外源蛋白C端結(jié)構(gòu)區(qū)域功能。從 所掌握的文獻(xiàn)來(lái)看，該系統(tǒng)主要用于 cDNA表面展示文庫(kù)的構(gòu)建，并取得了 不錯(cuò)的篩選效果。九噬菌體展示系統(tǒng)(

7、1) PV展示系統(tǒng)。九噬菌體的PV蛋白構(gòu)成了它的尾 部管狀部分，該管狀結(jié)構(gòu)由32個(gè)盤狀結(jié) 構(gòu)組成，每個(gè)盤又由6個(gè)PV亞基組成。 精選公文范文5精選公文范文PV有兩個(gè)折疊區(qū)域，C端的折疊結(jié)構(gòu)域 （非功能區(qū)）可供外源序列插入或替換。 目前，用PV系統(tǒng)已成功展示了有活性的 大分子蛋白B-半乳糖甘酶（465 ku）和 植物外源凝血素BPA（120 ku）等13。 九噬菌體的裝配在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，故可以展 示難以分泌的肽或蛋白質(zhì)。范文寫作該 系統(tǒng)展示的外源蛋白質(zhì)的拷貝數(shù)為平均 1個(gè)分子/噬菌體，這表明外源蛋白質(zhì)或 多肽可能干擾了九噬菌體的尾部裝配。（2）D蛋白展示系統(tǒng)。D蛋白的分子質(zhì)量為11 ku，參與 野

8、生型九噬菌體頭部的裝配。低溫電鏡 分析表明，D蛋白以三聚體的形式突出 在殼粒表面13。當(dāng)突變型噬菌體基因組 小于野生型基因組的82%時(shí)，可以在缺 少D蛋白的情況下完成組裝，故D蛋白 可作為外源序列融合的載體，而且展示 的外源多肽在空間上是可以接近的。病 毒顆粒的組裝可以在體內(nèi)也可以在體 外，體外組裝即是將D融合蛋白結(jié)合到 九D-噬菌體表面，而體內(nèi)組裝是將含D融 精選公文范文6精選公文范文 合基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入AD溶源的大腸埃 希菌菌種中，從而補(bǔ)償溶源菌所缺的D 蛋白，通過(guò)熱誘導(dǎo)而組裝。該系統(tǒng)有一 個(gè)很好的特點(diǎn)，噬菌體上融合蛋白和D 蛋白的比例可以由宿主的抑制tRNA活 性加以控制，這對(duì)于展示那些

9、可以對(duì)噬 菌體裝配造成損害的蛋白質(zhì)時(shí)特別有 用。T4噬菌體展示系統(tǒng)T4噬菌體展示系統(tǒng)是20世紀(jì)90 年代中期建立起來(lái)的一種新的展示系 統(tǒng)。它的顯著特點(diǎn)是能夠?qū)煞N性質(zhì)完 全不同的外源多肽或蛋白質(zhì)，分別與T4 衣殼表面上的外殼蛋白SOC（9 ku）和 HOC（40 ku）融合而直接展示于T4噬 菌體的表面，XX因此它表達(dá)的蛋白不需 要復(fù)雜的蛋白純化，避免了因純化而引 起的蛋白質(zhì)變性和丟失。T4噬菌體是在 宿主細(xì)胞內(nèi)裝配，不需通過(guò)分泌途徑， 因而可展示各種大小的多肽或蛋白質(zhì)， 很少受到限制。吳健敏等成功地一將大小約215 aa SOC/m E2融合蛋精選公文范文精選公文范文白展示于T4噬菌體衣殼表

10、面14。令人 值得關(guān)注的是，SOC與HOC蛋白的存 在與否，并不影響T4的生存和繁殖。 SOC和HOC在噬菌體組裝時(shí)可優(yōu)于 DNA的包裝而裝配于衣殼的表面，事實(shí) 上，在DNA包裝被抑制時(shí)，T4是雙股 DNA噬菌體中唯一能夠在體內(nèi)產(chǎn)生空衣 殼的噬菌體（SOC和HOC也同時(shí)組裝）。 因此，在用重組T4做疫苗時(shí)，它能在空 衣殼表面展示目的抗原，這種缺乏DNA 的空衣殼苗，在生物安全性方面具有十 分光明的前景14。三、噬菌體展示技術(shù)的局限性（1）在噬菌體展示過(guò)程中必須經(jīng) 過(guò)細(xì)菌轉(zhuǎn)化、噬菌體包裝，有的展示系 統(tǒng)還要經(jīng)過(guò)跨膜分泌過(guò)程，這就大大限 制了所建庫(kù)的容量和分子多樣性。最全 面的范文參考寫作網(wǎng)站目前

11、，常用的噬 菌體展示文庫(kù)中含有不同序列分子的數(shù) 量一般限制在109。（2）不是所有的序列都能在噬菌 體中獲得很好的表達(dá)，因?yàn)橛行┑鞍踪|(zhì) 精選公文范文8精選公文范文 功能的實(shí)現(xiàn)需要折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)、膜插入和 絡(luò)合，導(dǎo)致在體內(nèi)篩選時(shí)需外加選擇壓 力。例如，在噬菌體展示文庫(kù)試驗(yàn)中， 由于部分未折疊的蛋白在細(xì)菌中很容易 被降解，因此，必須小心控制條件，以 保證在噬菌體表面展示的文庫(kù)沒(méi)有降 解。另外，鼠源抗體在噬菌體中表達(dá)差， 也是體內(nèi)選擇壓力的一個(gè)例子。真核細(xì) 胞蛋白在細(xì)菌中表達(dá)差是因?yàn)樗鼈兊牡?白質(zhì)合成與折疊機(jī)制不同的緣故15。（3）噬菌體展示文庫(kù)一旦建成， 很難再進(jìn)行有效的體外突變和重組，進(jìn) 而限制了文

12、庫(kù)中分子遺傳的多樣性。（4）由于噬菌體展示系統(tǒng)依賴于 細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)，所以，一些對(duì)細(xì)胞 有毒性的分子如生物毒素分子，很難得 到有效表達(dá)和展示。四、結(jié)語(yǔ)噬菌體展示技術(shù)經(jīng)過(guò)近20年的發(fā)展和完善，已成為生命科學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng) 重要技術(shù)，廣泛應(yīng)用于抗原抗體庫(kù)的建 精選公文范文精選公文范文 立、藥物設(shè)計(jì)、疫苗研究、病原檢測(cè)、 基因治療、抗原表位研究及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)研究等16生成過(guò)程，構(gòu)建高親和力抗體庫(kù)。 由于噬菌體展示技術(shù)實(shí)現(xiàn)了基因型和表 型的有效轉(zhuǎn)換，使研究者在基因分子克 隆基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)構(gòu)象體外控制， 從而為獲取具有良好生物學(xué)活性的表達(dá) 產(chǎn)物提供了強(qiáng)有力手段。另外，噬菌體 展示技術(shù)已成為不經(jīng)過(guò)免疫

13、獲取特異性 人源抗體的新途徑，為獲取對(duì)人類和動(dòng) 物疾病有診斷和治療價(jià)值的單克隆抗體 提供了重要手段篇二：噬菌體展示技術(shù)噬菌體展示技術(shù)王浩 11307110047摘要:噬菌體展示技術(shù)可以將目標(biāo) 蛋白與噬菌體衣殼蛋白結(jié)合在一起形成 融合蛋白，進(jìn)而展示于噬菌體表面。該 技術(shù)可以較好地保持被展示蛋白質(zhì)的活 性，因而在蛋白質(zhì)研究中發(fā)揮著重要的 作用。目前用于構(gòu)建噬菌體展示系統(tǒng)的 精選公文范文1精選公文范文 載體主要有絲狀噬菌體、九噬菌體、T4 噬菌體和T7噬菌體。這些系統(tǒng)不僅對(duì)構(gòu) 建cDNA文庫(kù)很有幫助，還可在隨機(jī)短 肽文庫(kù)的協(xié)助下研究蛋白質(zhì)之間的相互 作用。關(guān)鍵詞：噬菌體展示技術(shù);蛋白質(zhì); 文庫(kù)；類型

14、；原理；應(yīng)用1985年，美國(guó) Missouri大學(xué)的 Smith G P首次證實(shí)絲狀噬菌體fd基因 組能通過(guò)基因工程手段改造，他把 氏oRl內(nèi)切酶的部分基因片段與絲狀噬 菌體的次要衣殼蛋白p m(protein III)基 因融合，獲得的重組噬菌體能被抗 EcoR I內(nèi)切酶的_ 1抗體所識(shí)別，由此建立了噬菌體 展示技術(shù)(phage displaytechnology) 0 通過(guò) 近幾十年的發(fā)展，噬菌體展示技術(shù)已經(jīng)有 絲狀噬菌體、九噬菌體、T4噬菌體和T7 噬菌體等展示系統(tǒng)，這些系統(tǒng)在在新型 疫苗的研制、酶抑制劑的篩選、醫(yī)學(xué)診 斷和治療、多肽藥物的開發(fā)、蛋白質(zhì)相 精選公文范文1精選公文范文 互作

15、用的研究等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng) 用，并顯示了良好的應(yīng)用前景。.噬菌體展示系統(tǒng)類型單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是利用 了 M13噬菌體獨(dú)特的生命周期及其所表 達(dá)的幾個(gè)噬菌體蛋白質(zhì)。它的單鍵DNA 基因組由6407個(gè)核甘酸殘基組成，編碼 10種不同的蛋白質(zhì)，并被包裝于約有 27003000個(gè)拷貝數(shù)的基因編碼的蛋白 質(zhì)pW的蛋白衣殼內(nèi)。而且M13的尾部 有一種35個(gè)拷貝的基因編碼的蛋白質(zhì) pill。2III展示系統(tǒng)（35個(gè)拷貝）12pin基因主要編碼病毒的次要衣殼 尾絲蛋白。pi的可插入位點(diǎn)很多，所以 其為多價(jià)展示系統(tǒng)，但這樣就會(huì)造成蛋 白質(zhì)的異促效應(yīng)，不易篩選到高親和力 的噬菌體。為

16、了構(gòu)建單價(jià)展示系統(tǒng)，人 們將目的基因轉(zhuǎn)入到噬菌粒（噬菌粒是 由質(zhì)粒與單絲噬菌體結(jié)合而構(gòu)成的載體 系列。它既具有質(zhì)粒的特性和復(fù)制起點(diǎn)， 精選公文范文12精選公文范文 又有噬菌體的特性和復(fù)制起點(diǎn)。3）中。 由于噬菌粒沒(méi)有噬菌體蛋白而難以形成 真正的噬菌體，其需要輔助噬菌體。輔 助噬菌體能提供將該DNA復(fù)制并包裝 成完整噬菌體所需的蛋白質(zhì)。而由于該 輔助噬菌體的復(fù)制起始點(diǎn)很低效，不足 以和噬菌粒DNA抗衡，所以轉(zhuǎn)錄出的 DNA大多數(shù)仍為噬菌粒DNA。通過(guò)在 噬菌粒DNA和輔助噬菌體DNA上加上 篩選標(biāo)記，人們就可以很方便地篩選出 被感染的大腸桿菌。而且不像其他大多 數(shù)的噬菌體，M13在感染大腸桿菌后

17、， 并不引起宿主細(xì)胞的裂解，而是使宿主 細(xì)胞穩(wěn)定地分泌出噬菌體顆粒。通過(guò)不 斷地進(jìn)行免疫富集篩選，人們就能得到 高親和力克隆。4面展示系統(tǒng)（27003000個(gè)拷貝）pW基因編碼主要的衣殼蛋白。由 于其拷貝數(shù)多，可用于篩選親和力較低 的配體。相應(yīng)的，如果用該系統(tǒng)展示較 長(zhǎng)肽鏈而形成空間阻礙的話，就有可能 影響相關(guān)衣殼蛋白的合成，使得噬菌體 精選公文范文1精選公文范文 失去感染力。九噬菌體展示系統(tǒng)噬菌體九是溫和噬菌體，在其顆粒 中，DNA是線狀雙鏈分子帶有單鏈互補(bǔ) 末端。末端12個(gè)可互補(bǔ)的核昔酸，稱為 粘性末端。當(dāng)噬菌體入浸入宿主細(xì)胞后， 線狀雙鏈DNA分子借助粘性末端連結(jié) 成環(huán)狀分子。在感染早期

18、，環(huán)狀DNA分 子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。在此期間，噬菌體有兩條 復(fù)制途徑可供選擇：一是裂解生長(zhǎng)。環(huán) 狀DNA分子在宿主細(xì)胞里復(fù)制若干次， 合成了大量的噬菌體基因產(chǎn)物，形成子 代噬菌體顆粒，成熟后使細(xì)菌裂解，釋 放出許多新的有感染能力的病毒顆粒。 另一是溶源性生長(zhǎng)。噬菌體DNA整合進(jìn) 宿主菌的基因組，然后象細(xì)菌染色體上 的基因一樣進(jìn)行復(fù)制，并傳遞給下一代 細(xì)菌。5成熟的噬菌體九由頭、尾兩部分 組成。D蛋白展示系統(tǒng)D蛋白為噬菌體九頭部必需蛋白， 其可作為外源序列融合的載體，這種展 精選公文范文U精選公文范文 示一般為N端展示。由于其在噬菌體顆 粒表面呈突出狀分布，有利于配體在空 間上接近，便于之后的篩選。D蛋

19、白展 示的體外組裝途徑是將D融合蛋白結(jié)合 到噬菌體表面。體內(nèi)組裝途徑是將含D 融合基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入D蛋白缺乏放入 菌株中，從而彌補(bǔ)溶源菌所缺的D蛋白; 或?qū)⑵湔系降绞删w的基因組中。展示系統(tǒng)蛋白PV為噬菌體九主要尾部蛋 白，其C端折疊區(qū)為非必需的，所以可 供外源序列插入而不會(huì)影響其正常的生 理功能。噬菌體展示系統(tǒng)15T4噬菌體與噬菌體九較為相似， 其DNA為雙鏈線形，呈環(huán)狀排列。但其 表面包被著2種非必需外殼蛋白：SOC （主要為C端末）和HOC （主要為N端 末）。SOC位點(diǎn)展示是通過(guò)一個(gè)重組載 體，將融合有外源序列的SOC融合基因 同源整合入缺失SOC的T4基因組中， 選擇恢復(fù)溶菌酶生長(zhǎng)

20、不依賴性的噬菌 精選公文范文15精選公文范文 體，即可將外源肽或蛋白質(zhì)展示于噬菌 體表面。HOC位點(diǎn)展示則通過(guò)體外包裝 實(shí)現(xiàn)，將目的基因連接于hoc基因的C 端，構(gòu)建hoc融合基因表達(dá)載體，并在 IPTG的誘導(dǎo)下表達(dá)HOC融合蛋白。再 將其與HOC缺失的T4噬菌體結(jié)合，就 將其轉(zhuǎn)移到該噬菌體上從而得到展示。 由于這兩者的缺失方式不同，就可以在 同一噬菌體上通過(guò)不同的方式（DNA缺 失及蛋白缺失）得到表達(dá)，即可實(shí)現(xiàn) SOC、HOC雙位點(diǎn)的同時(shí)展示。此外， T4噬菌體的扁長(zhǎng)型二十面體衣殼，使其 系統(tǒng)容量大，可以體外組裝，拷貝數(shù)高。 6噬菌體展示系統(tǒng)T7噬菌體基因組為線性雙鏈 DNA，其主要有2種衣

21、殼蛋白，10A和 10B。由于10B的蛋白區(qū)在噬菌體表面， 所以將其作為展示位點(diǎn)。T7噬菌體的功 能性衣殼由10A與10B按不同比例構(gòu) 成，說(shuō)明其有一定的容錯(cuò)性，可容納變 異體。展示的蛋白會(huì)通過(guò)C端融合，這 精選公文范文*精選公文范文 樣，即使插入的片段含有終止密碼子也 不會(huì)影響該蛋白的表達(dá)。另外，T7噬菌 體展示系統(tǒng)可以以高拷貝量展示50個(gè)氨 基酸的多肽，以低拷貝量（1/噬菌體） 或以中拷貝量（515/噬菌體）展示1200 個(gè)氨基酸殘基的多肽或蛋白質(zhì)。這些多 肽或蛋白質(zhì)分別與相應(yīng)親和力區(qū)域結(jié) 合，其實(shí)用性較強(qiáng)。.噬菌體展示的原理噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白 質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬

22、 菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，在 閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常 功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外 殼蛋白融合表達(dá)，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組（來(lái)自：XX:噬菌體 展示總結(jié)技術(shù)）裝而展示在噬菌體表面。 被展示的多肽或蛋白可以保持相對(duì)獨(dú)立 的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，以利于靶分子 的識(shí)別和結(jié)合。肽庫(kù)與固相上的靶蛋白 分子經(jīng)過(guò)一定時(shí)間孵育后，洗去未結(jié)合 的游離噬菌體，然后以競(jìng)爭(zhēng)受體或酸洗 精選公文范文1精選公文范文 脫下與靶分子結(jié)合吸附的噬菌體，洗脫 的噬菌體感染宿主細(xì)胞后經(jīng)繁殖擴(kuò)增，進(jìn) 行下一輪洗脫，經(jīng)過(guò)3輪5輪的“吸附 -洗脫-擴(kuò)增”后，與靶分子特異結(jié)合的噬 菌體得到高度富集。7外源多肽

23、或蛋白質(zhì) 表達(dá)在噬菌體的表面，而其編碼基因作 為噬菌體基因組中的一部分可通過(guò)噬菌 體DNA序列測(cè)序出來(lái)。該技術(shù)的顯著特 點(diǎn)是建立了基因型和表現(xiàn)型之間的對(duì)應(yīng) 關(guān)系。篩選步驟8：略。.噬菌體展示的應(yīng)用（與蛋白結(jié)構(gòu) 與功能相關(guān)的方面）展示功能蛋白結(jié)構(gòu)域噬菌體隨機(jī)展示技術(shù)被廣泛應(yīng)用 于研究蛋白質(zhì)與其他配基的相互作用。 完整的蛋白質(zhì)或結(jié)構(gòu)域與噬菌體蛋白形 成融合噬菌體，為研究結(jié)構(gòu)與功能的相 互關(guān)系提供了一個(gè)非常有效的工具。當(dāng) 蛋白質(zhì)或功能亞基被表達(dá)于噬菌體表 面，插入蛋白質(zhì)的天然的四級(jí)結(jié)構(gòu)就提 供了一個(gè)具有廣泛突變位點(diǎn)的用來(lái)限制 精選公文范文i精選公文范文 折疊的框架（如：鋅指結(jié)構(gòu)）。即使用蛋 白質(zhì)上帶

24、有的鋅指結(jié)構(gòu)，讓其與某些 DNA作用，就可篩選出一些與其相互作 用的噬菌體。確定核酸結(jié)合蛋白及其相互作用 噬菌體隨機(jī)展示技術(shù)可以篩選出 一種有某些結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，這些結(jié)構(gòu) 域可與DNA結(jié)合而調(diào)控基因的表達(dá)。 通過(guò)這種方法，可以發(fā)現(xiàn)更多的與DNA 結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。此外，利用噬菌體展示 技術(shù)還可以篩選出DNA的模擬肽（模 擬肽是一個(gè)具有廣泛意義的術(shù)語(yǔ)，它指 任意一個(gè)被設(shè)計(jì)并執(zhí)行肽功能的化合 物。一個(gè)生物活性模擬肽，具有與激素、 細(xì)胞因子、酶底物、病毒或其他生物分 子拈抗、刺激或是調(diào)節(jié)天然配體的生理 活性的功能。9）。研究蛋白質(zhì)相互作用噬菌體展示的多肽文庫(kù)是由特定 長(zhǎng)度的隨機(jī)短肽序列組成。用靶蛋白質(zhì)

25、（如受體、抗體等）對(duì)該隨機(jī)文庫(kù)進(jìn)行 親和淘篩，就可以獲得與之結(jié)合的短肽 精選公文范文。精選公文范文 序列。對(duì)所得序列測(cè)定分析，并合成相 應(yīng)的短肽，就可用來(lái)研究?jī)蓚€(gè)蛋白質(zhì)之 間的相互作用。抗原表位分析抗原表位分析技術(shù)是以單克隆抗 體作為固相篩選分子，加入噬菌體隨機(jī) 多肽庫(kù)，使其與單抗充分反應(yīng)，經(jīng)數(shù)輪 “吸附-洗脫-擴(kuò)增”的篩選過(guò)程，且每次增 加篩選強(qiáng)度，用最后一次淘洗的噬菌體 感染宿主菌。再隨機(jī)挑選克隆，經(jīng)噬菌 體ELISA鑒定并進(jìn)行交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)和 競(jìng)爭(zhēng)抑制性實(shí)驗(yàn)，對(duì)所選的陽(yáng)性克隆通 過(guò)DNA序列分析，就可以知道該噬菌 體所攜帶的外源肽序列，從而得知該單 抗針對(duì)的特異性抗原表位。4噬菌體展示技術(shù)

26、的展望噬菌體展示技術(shù)憑借著自己獨(dú)有 的優(yōu)勢(shì)及特點(diǎn)，在生物科學(xué)研究和應(yīng)用 中的前景已經(jīng)逐漸地顯示出來(lái)。以噬菌 體展示抗原表位的優(yōu)點(diǎn)有：（1）生產(chǎn)成本 低廉。（2）有可能利用一種噬菌體展示兩 種抗原表位，這樣便可開發(fā)出能同時(shí)診 精選公文范文2精選公文范文 斷一種以上疾病的診斷抗原。（3）噬菌體 顆粒可在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定，這 一點(diǎn)對(duì)研究和應(yīng)用非常適用。（4）可模擬 天然多肽表位結(jié)構(gòu)或功能。（5）噬菌體作 為表位載體具有較好的免疫原性。10但現(xiàn)在這項(xiàng)技術(shù)的某些方面并不 完善，目前其主要的局限有：（1）受大腸 桿菌轉(zhuǎn)化效率的限制，高效轉(zhuǎn)化大腸桿 菌的轉(zhuǎn)化效率為107108,故一般肽庫(kù)的 容量只有109,高于此限制的基因難以表 達(dá)，受到庫(kù)容量的限制；（2）由于噬菌體 展示技術(shù)依賴于宿主細(xì)胞內(nèi)基因的表 達(dá)，因此難以對(duì)毒性分子進(jìn)行有效表達(dá) 和展示；（3）編碼肽的基因帶有一定的偏 愛(ài)性，決定了肽庫(kù)的多樣性受到局限； （4）氨基酸的修飾受宿主細(xì)胞的限制。不過(guò)，隨著噬菌體肽庫(kù)的不斷完 善，對(duì)噬菌體展示技術(shù)認(rèn)識(shí)地不斷加深。 這項(xiàng)技術(shù)必定會(huì)日臻完美，其應(yīng)用的范 圍肯定會(huì)越來(lái)越廣。1劉相葉，鄧洪寬，吳 秀萍等.噬菌體展示技術(shù)及其應(yīng)用J.動(dòng) 精選公文范文2精選公文范文 物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008,29(1):60戴和平，高宏, 趙新顏.噬菌體展示技術(shù)的原理和方法 J.水生生物學(xué)報(bào),2002,26