瓊脂糖凝膠電泳 原理 步驟 詳細(xì)課件

/李莉瓊脂糖凝膠電泳

AgaroseGel

Electrophoresis

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

1

瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院概述

IntroductionGelElectrophoresis：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質(zhì)作支持體的電泳。特點(diǎn)（characteristic）：1.可以制成非常均勻的凝膠，帶電質(zhì)點(diǎn)在凝膠的孔中泳動(dòng)2.電泳操作方法簡(jiǎn)便，電泳速度快3.分辨率高，重復(fù)性好，電泳圖譜清晰4.適用于生化，免疫等定性定量測(cè)定

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠（AgaroseGel）天然瓊脂（agar）:又名瓊膠、菜燕、凍粉從石花菜及其它紅藻類植物提取出來的一種線狀高聚物。瓊脂糖（agarose）瓊脂果膠（agaropectin）

AcidsulfateCarboxylicacidgroups上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

D-半乳糖3，6-脫水-L-半乳糖瓊脂糖（Agarose）半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

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瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

（一）優(yōu)點(diǎn)（advantage)1.因不含硫酸根和羧基，幾乎消除了瓊脂的電滲2.對(duì)蛋白質(zhì)吸附極微，故無拖尾現(xiàn)象3.凝膠結(jié)構(gòu)均勻，孔徑較大，可用來分離酶的復(fù)合物、核酸、病毒等大分子物質(zhì)4.透明度較好，可直接或干燥成薄膜后進(jìn)行染色5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量測(cè)定6.有熱可逆性上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

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瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

ApplicationsofAgaroseGel

Electrophoresis

1.適用于大分子的核酸、核蛋白等的分離、鑒定及純化2.臨床生化檢驗(yàn)中常用于LDH、CK等同工酶的分離與檢測(cè)3.為不同類型的高脂蛋白血癥、冠心病等提供生化指標(biāo)

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院ThegelwithUVillumination,theethidiumbromidestainedDNAglowsorange

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

1

瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院Percentagaroseandresolutionlimits上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

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瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

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影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白原理（Principle）

血清脂蛋白經(jīng)飽和蘇丹黑B預(yù)染后，以瓊脂糖凝膠為支持介質(zhì)，在pH8.6巴比妥緩沖液中電泳，根據(jù)各脂蛋白的組成、大小、形狀分離成不同區(qū)帶。

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的組成

ApoAApoBprotein：ApoproteinApoCApoDApoE

甘油三酯（TG）脂類磷脂（PL）

游離膽固醇（FC）

膽固醇酯（CE）少量糖上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（二）分類1.按電泳法分

乳糜微粒（chylomicron,CM）

-脂蛋白（-lipoprotein）

前-脂蛋白（pre

-lipoprotein）-脂蛋白（-lipoprotein）上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

pH8.6>pI，各種脂蛋白均帶負(fù)電，電泳時(shí)由負(fù)極到正極；VLDL為圓形，受阻力小，LDL形態(tài)不規(guī)則，受阻力大，所以VLDL跑在前上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

加樣槽β前βα

CMLDLVLDLHDL—+上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床應(yīng)用：高脂蛋白血癥的分型

CMβ前βα正常Ⅰ型Ⅱa型Ⅱb型Ⅲ型Ⅳ型Ⅴ型上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院操作上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院玻璃片上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)染色的標(biāo)本上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院＋上樣處玻片瓊脂糖凝膠上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

CM上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院正常參考值（百分比）α-脂蛋白30-40%前β-脂蛋白15%β-脂蛋白55%注意事項(xiàng)：①血清樣品要新鮮②為了免去離心步驟，吸取預(yù)染血清時(shí)，應(yīng)吸取上層，下層或管底可能有染料顆粒沉渣，否則應(yīng)再離心后吸預(yù)染血清上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院名詞解釋1.遷移率2.電滲3.電泳問答題1.影響電泳遷移率的因素有哪些？2.試述瓊脂糖凝膠電泳分離脂蛋白的原理。復(fù)習(xí)思考題上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院