流式細胞的原理及臨床應用課件

流式細胞儀原理介紹流式細胞儀原理介紹1流式細胞儀基本原理示意圖流式細胞儀基本原理示意圖2流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束3通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度

通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞4流式細胞儀標本準備染色的一般原則及方法流式細胞儀標本準備5標本來源：

外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其他。以及血清或各類體液樣本。標本來源：外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其6抗體染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）紅細胞分析：1ul全血（根據(jù)樣本中紅細胞數(shù)稀釋后使用）骨髓：100ul其他樣本，計數(shù)后決定使用體積目標細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml抗體染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血目標細胞數(shù)量7通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度CD3+/CD4+：輔助性T細胞Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。3、FACSLysingSolution巨細胞病毒感染通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預后，監(jiān)測、指導臨床治療方案。NK細胞增高常見于：某些病毒感染性疾病的早期；強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風濕性關節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學、流行病學和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風濕性關節(jié)炎的獨立疾病。以及血清或各類體液樣本。就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。乙肝（急性期/慢性肝炎）HLA-B27流式細胞儀檢測CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應答中發(fā)揮重要功能。其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE膜型腎小球腎炎其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE流式細胞儀分析報告及圖譜以及血清或各類體液樣本。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。CD3+/CD4+：輔助性T細胞孵育、溶血、固定抗體孵育：室溫下避光15分鐘（某些情況下如：細胞內(nèi)因子檢測需冰育）溶血：如樣本含中有紅細胞需溶血樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞8流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應細胞內(nèi)物質(zhì)的多少FS（前向散射光）--反應細胞大小流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應細胞內(nèi)物質(zhì)9設門：選擇要分析的細胞群體設定陰性、陽性范圍設門：選擇要分析的細胞群體設定陰性、陽性范圍10目前流式細胞儀臨床檢測項目目前流式細胞儀臨床檢測項目11流式細胞儀的臨床應用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細胞計數(shù)細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數(shù)殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關疾病流式細胞儀的臨床應用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)121、

HLA-B27的檢測1、HLA-B27的檢測13強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis）意為彎曲的脊柱。它是和種慢性、進行性和炎性疾病，主要累及骶骼關節(jié)、脊柱、脊柱骨軟組織及四肢關節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤維環(huán)和纖維環(huán)附近結締組織的骨化，椎間動關節(jié)和四肢關節(jié)滑膜的炎癥和增生，嚴重者可失去勞動能力。強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風濕性關節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學、流行病學和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風濕性關節(jié)炎的獨立疾病。

就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。

B27與強直性脊柱炎強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis14HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的強直性脊柱炎患者HLA－B27為陽性。但是HLA-B27陽性的人群中只有8－20％是強直性脊柱炎。瑞特綜合征－65－90％瑞特綜合癥患者HLA-B27為陽性。如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。HLA－B27不是該疾病發(fā)生的必要條件，但是卻與病程發(fā)展有緊密聯(lián)系?！胺磻躁P節(jié)炎”－是一種自身限制的少關節(jié)型關節(jié)炎伴隨著革蘭氏陰性細菌如桿菌性痢疾，沙門氏菌，弧形桿菌，耶爾森氏菌和至賀氏菌引起的胃腸感染。銀屑病關節(jié)炎

-

90%的銀屑病關節(jié)炎聯(lián)合薦腸關節(jié)炎和脊椎炎患者HLAB27陽性。急性前葡萄膜炎－通常表現(xiàn)為疼痛，畏光和流淚?？赡苁呛缒じ腥净蚪Y合了睫狀體或視網(wǎng)膜萎縮。青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。相反，青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎I，同樣也是少關節(jié)性的，但是更常見于女孩，與慢性虹膜睫狀體炎(30%)，陽性的ANA(80%)和HLADR5關聯(lián)，卻不是B27。HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的15HLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因?；旧媳磉_在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。使用熒光定量標準微球，校正HLA-B27實驗條件后，測定樣本中T淋巴細胞HLA-B27表達水平。若HLA-B27表達水平大于標準微球設定MARK，則為陽性結果；若HLA-B27表達水平低于標準微球設定MARK，則為陰性結果。Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；CAT:340183)，其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE

2、HLA-B27Calibrationbeads3、FACSLysingSolutionHLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因?；?6HLA-B27流式細胞儀檢測HLA-B27流式細胞儀檢測172、淋巴細胞亞群分析2、淋巴細胞亞群分析182、HLA-B27Calibrationbeads流式細胞儀基本原理示意圖瘧疾乙肝（急性期/慢性肝炎）強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風濕性關節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學、流行病學和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風濕性關節(jié)炎的獨立疾病。傳染性單核細胞增多癥（急性期）青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。瘧疾流式細胞儀分析報告及圖譜流式細胞儀檢測什么信號？青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。2、HLA-B27CalibrationbeadsB-淋巴細胞上升多見于：多發(fā)性骨髓瘤；3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）CD3+/CD4+：輔助性T細胞BD四色淋巴亞群檢測試劑盒：

MultiTESTCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC

MultiTESTCD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCP/CD19APCFS（前向散射光）--反應細胞大小以及血清或各類體液樣本。長期使用干擾素或使用干擾素的誘導物；接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑淋巴細胞亞群基礎知識T淋巴細胞：主要殺傷病原體感染細胞及腫瘤細胞。表面標志物：CD3，與TCR形成復合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導信號的主要單位。CD3+/CD4+：輔助性T細胞CD3+/CD8+：殺傷性T細胞2、HLA-B27Calibrationbeads淋巴細19CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應答中發(fā)揮重要功能。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免20B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。1，產(chǎn)生的抗體可與抗原起特異性的結合，如中和細菌的外毒素使其失去毒性作用；2，抗體與抗原結合后形成的復合物易被吞噬細胞清除；3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。B細胞特異性標志物：CD19B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。21NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應配體，NK細胞一經(jīng)識別病毒感染細胞后即對之施加殺傷作用。NK細胞表面標志物：CD3-/CD16+CD56+NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應配體22通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預后，監(jiān)測、指導臨床治療方案。淋巴細胞亞群的臨床檢測通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔23總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多見于：慢性活動性肝炎或慢性遷延性肝炎；器官移植排斥反應；重癥肌無力；甲亢與甲狀腺炎患者；何杰金病T-淋巴細胞下降多見于：惡性腫瘤；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕關節(jié)炎等；原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋??；接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑B-淋巴細胞上升多見于：多發(fā)性骨髓瘤；巨球蛋白血癥；淋巴瘤；艾滋病B-淋巴細胞下降多見于：原發(fā)性免疫缺陷病，如性聯(lián)無丙種球蛋白血癥等、惡性腫瘤T-淋巴細胞與B-淋巴細胞同時下降多見于：聯(lián)合免疫缺陷病，如重癥狀聯(lián)合免疫缺陷病等總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多24CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾病（如SCID、AIDS的病人體內(nèi)CD4+細胞亞群的百分率相對降低，而CD8+群體的百分率相對升高），自身免疫性疾?。ㄈ缭赟LE病人中，CD8+淋巴細胞的相對百分比往往會降低，但當使用類固醇藥物治療時，也可能上升。在急性GVHD和移植排斥中，CD8+淋巴細胞所占的比例有可能在正常人的范圍之外）

Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾?。?5CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫失調(diào)或已知患有免疫缺陷的病人的免疫狀態(tài)，此外，這一比值還可用來監(jiān)測骨髓移植病人以免受到急性GVHD的攻擊

CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風濕性關節(jié)炎、SLE。

CD4/CD8降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血等。Th/Ts比值CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫26自然殺傷細胞（NK）

NK細胞增高常見于：某些病毒感染性疾病的早期；長期使用干擾素或使用干擾素的誘導物；骨髓移植后；習慣性流產(chǎn)。

NK細胞降低常見于：惡性腫瘤，特別是中晚期或伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤；免疫缺陷病及使用腎上腺激素等免疫抑制劑。部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；某些白血病及白血病前期。自然殺傷細胞（NK）NK細胞增高常見于：某些27惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·

342·

中國醫(yī)科大學學報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭128惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·342·中國醫(yī)科大學學報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；HLA-B27流式細胞儀檢測其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PEAnti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；某些白血病及白血病前期。CD3+/CD4+：輔助性T細胞部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。巨細胞病毒感染以及血清或各類體液樣本。血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋??；淋巴細胞亞群的臨床檢測3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。瘧疾膜型腎小球腎炎惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·342·中國醫(yī)科大學學報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月B細胞特異性標志物：CD19類風關（活動期）接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋??；通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度AIDS基本上表達在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。自身溶血性貧血1、HLA-B27的檢測接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）流式細胞儀分析報告及圖譜原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋?。籋LA-B27流式細胞儀檢測巨細胞病毒感染腫瘤的細胞周期和倍體分析某些白血病及白血病前期。血吸蟲病NK細胞降低常見于：惡性腫瘤，特別是中晚期或伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤；通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度FS（前向散射光）--反應細胞大小疾病T細胞亞群

CD4+/CD8+CD4+CD8+類風關（活動期）

SLE-或（活動期）

Sjogren綜合癥

多發(fā)性硬化癥

重癥肌無力

膜型腎小球腎炎

胰島素依賴性糖尿病

乙型肝炎自身溶血性貧血

上呼吸道感染

傳染性單核細胞增多癥（急性期）惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭129巨細胞病毒感染

乙肝（急性期/慢性肝炎）

結核（胸水/重癥外周血）麻風

瘧疾

血吸蟲病

AIDS

CD4+/CD8+CD3+CD4+CD8+腫瘤

再障及粒細胞減少癥

巨細胞病毒感染

血小板減少

活動性特應性皮炎

過敏性皮炎

巨細胞病毒感染30BD四色淋巴亞群檢測試劑盒：

MultiTESTCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC

MultiTESTCD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCP/CD19APCBD四色淋巴亞群檢測試劑盒：

MultiTESTCD3F31Q&AQ&A32通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度

通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞33強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis）意為彎曲的脊柱。它是和種慢性、進行性和炎性疾病，主要累及骶骼關節(jié)、脊柱、脊柱骨軟組織及四肢關節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤維環(huán)和纖維環(huán)附近結締組織的骨化，椎間動關節(jié)和四肢關節(jié)滑膜的炎癥和增生，嚴重者可失去勞動能力。強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風濕性關節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學、流行病學和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風濕性關節(jié)炎的獨立疾病。

就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。

B27與強直性脊柱炎強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis34HLA-B27流式細胞儀檢測HLA-B27流式細胞儀檢測35CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應答中發(fā)揮重要功能。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免36通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預后，監(jiān)測、指導臨床治療方案。淋巴細胞亞群的臨床檢測通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔37HLA-B27診斷的臨床意義通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預后，監(jiān)測、指導臨床治療方案。HLA-B27診斷的臨床意義流式細胞儀分析報告及圖譜淋巴細胞亞群的臨床檢測就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。流式細胞儀分析報告及圖譜外周血白細胞分析：100ul全血接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應配體，NK細胞一經(jīng)識別病毒感染細胞后即對之施加殺傷作用。腫瘤的細胞周期和倍體分析目標細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/mlT-淋巴細胞上升多見于：慢性活動性肝炎或慢性遷延性肝炎；1、HLA-B27的檢測疾病T細胞亞群表面標志物：CD3，與TCR形成復合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導信號的主要單位。細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）自身溶血性貧血部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；2，抗體與抗原結合后形成的復合物易被吞噬細胞清除；惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·342·中國醫(yī)科大學學報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月類風關（活動期）長期使用干擾素或使用干擾素的誘導物；重癥肌無力樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其他。樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病表面標志物：CD3，與TCR形成復合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導信號的主要單位。但是HLA-B27陽性的人群中只有8－20％是強直性脊柱炎。麻風血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度但是HLA-B27陽性的人群中只有8－20％是強直性脊柱炎。外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其他。目標細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml相反，青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎I，同樣也是少關節(jié)性的，但是更常見于女孩，與慢性虹膜睫狀體炎(30%)，陽性的ANA(80%)和HLADR5關聯(lián)，卻不是B27。CD3+/CD4+：輔助性T細胞Q&AHLA-B27診斷的臨床意義部分病毒感染、細菌感染及真菌感染38流式細胞儀原理介紹流式細胞儀原理介紹39流式細胞儀基本原理示意圖流式細胞儀基本原理示意圖40流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束41通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度

通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞42流式細胞儀標本準備染色的一般原則及方法流式細胞儀標本準備43標本來源：

外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其他。以及血清或各類體液樣本。標本來源：外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其44抗體染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）紅細胞分析：1ul全血（根據(jù)樣本中紅細胞數(shù)稀釋后使用）骨髓：100ul其他樣本，計數(shù)后決定使用體積目標細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml抗體染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血目標細胞數(shù)量45通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度CD3+/CD4+：輔助性T細胞Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。3、FACSLysingSolution巨細胞病毒感染通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預后，監(jiān)測、指導臨床治療方案。NK細胞增高常見于：某些病毒感染性疾病的早期；強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風濕性關節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學、流行病學和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風濕性關節(jié)炎的獨立疾病。以及血清或各類體液樣本。就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。乙肝（急性期/慢性肝炎）HLA-B27流式細胞儀檢測CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應答中發(fā)揮重要功能。其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE膜型腎小球腎炎其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE流式細胞儀分析報告及圖譜以及血清或各類體液樣本。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。CD3+/CD4+：輔助性T細胞孵育、溶血、固定抗體孵育：室溫下避光15分鐘（某些情況下如：細胞內(nèi)因子檢測需冰育）溶血：如樣本含中有紅細胞需溶血樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞46流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應細胞內(nèi)物質(zhì)的多少FS（前向散射光）--反應細胞大小流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應細胞內(nèi)物質(zhì)47設門：選擇要分析的細胞群體設定陰性、陽性范圍設門：選擇要分析的細胞群體設定陰性、陽性范圍48目前流式細胞儀臨床檢測項目目前流式細胞儀臨床檢測項目49流式細胞儀的臨床應用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細胞計數(shù)細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數(shù)殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關疾病流式細胞儀的臨床應用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)501、

HLA-B27的檢測1、HLA-B27的檢測51強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis）意為彎曲的脊柱。它是和種慢性、進行性和炎性疾病，主要累及骶骼關節(jié)、脊柱、脊柱骨軟組織及四肢關節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤維環(huán)和纖維環(huán)附近結締組織的骨化，椎間動關節(jié)和四肢關節(jié)滑膜的炎癥和增生，嚴重者可失去勞動能力。強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風濕性關節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學、流行病學和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風濕性關節(jié)炎的獨立疾病。

就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。

B27與強直性脊柱炎強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis52HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的強直性脊柱炎患者HLA－B27為陽性。但是HLA-B27陽性的人群中只有8－20％是強直性脊柱炎。瑞特綜合征－65－90％瑞特綜合癥患者HLA-B27為陽性。如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。HLA－B27不是該疾病發(fā)生的必要條件，但是卻與病程發(fā)展有緊密聯(lián)系?！胺磻躁P節(jié)炎”－是一種自身限制的少關節(jié)型關節(jié)炎伴隨著革蘭氏陰性細菌如桿菌性痢疾，沙門氏菌，弧形桿菌，耶爾森氏菌和至賀氏菌引起的胃腸感染。銀屑病關節(jié)炎

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90%的銀屑病關節(jié)炎聯(lián)合薦腸關節(jié)炎和脊椎炎患者HLAB27陽性。急性前葡萄膜炎－通常表現(xiàn)為疼痛，畏光和流淚?？赡苁呛缒じ腥净蚪Y合了睫狀體或視網(wǎng)膜萎縮。青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。相反，青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎I，同樣也是少關節(jié)性的，但是更常見于女孩，與慢性虹膜睫狀體炎(30%)，陽性的ANA(80%)和HLADR5關聯(lián)，卻不是B27。HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的53HLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因?；旧媳磉_在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。使用熒光定量標準微球，校正HLA-B27實驗條件后，測定樣本中T淋巴細胞HLA-B27表達水平。若HLA-B27表達水平大于標準微球設定MARK，則為陽性結果；若HLA-B27表達水平低于標準微球設定MARK，則為陰性結果。Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；CAT:340183)，其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE

2、HLA-B27Calibrationbeads3、FACSLysingSolutionHLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因?；?4HLA-B27流式細胞儀檢測HLA-B27流式細胞儀檢測552、淋巴細胞亞群分析2、淋巴細胞亞群分析562、HLA-B27Calibrationbeads流式細胞儀基本原理示意圖瘧疾乙肝（急性期/慢性肝炎）強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風濕性關節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學、流行病學和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風濕性關節(jié)炎的獨立疾病。傳染性單核細胞增多癥（急性期）青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。瘧疾流式細胞儀分析報告及圖譜流式細胞儀檢測什么信號？青少年風濕癥/慢性關節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。2、HLA-B27CalibrationbeadsB-淋巴細胞上升多見于：多發(fā)性骨髓瘤；3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）CD3+/CD4+：輔助性T細胞BD四色淋巴亞群檢測試劑盒：

MultiTESTCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC

MultiTESTCD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCP/CD19APCFS（前向散射光）--反應細胞大小以及血清或各類體液樣本。長期使用干擾素或使用干擾素的誘導物；接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑淋巴細胞亞群基礎知識T淋巴細胞：主要殺傷病原體感染細胞及腫瘤細胞。表面標志物：CD3，與TCR形成復合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導信號的主要單位。CD3+/CD4+：輔助性T細胞CD3+/CD8+：殺傷性T細胞2、HLA-B27Calibrationbeads淋巴細57CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應答中發(fā)揮重要功能。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免58B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。1，產(chǎn)生的抗體可與抗原起特異性的結合，如中和細菌的外毒素使其失去毒性作用；2，抗體與抗原結合后形成的復合物易被吞噬細胞清除；3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。B細胞特異性標志物：CD19B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。59NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應配體，NK細胞一經(jīng)識別病毒感染細胞后即對之施加殺傷作用。NK細胞表面標志物：CD3-/CD16+CD56+NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應配體60通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預后，監(jiān)測、指導臨床治療方案。淋巴細胞亞群的臨床檢測通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔61總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多見于：慢性活動性肝炎或慢性遷延性肝炎；器官移植排斥反應；重癥肌無力；甲亢與甲狀腺炎患者；何杰金病T-淋巴細胞下降多見于：惡性腫瘤；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕關節(jié)炎等；原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋病；接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑B-淋巴細胞上升多見于：多發(fā)性骨髓瘤；巨球蛋白血癥；淋巴瘤；艾滋病B-淋巴細胞下降多見于：原發(fā)性免疫缺陷病，如性聯(lián)無丙種球蛋白血癥等、惡性腫瘤T-淋巴細胞與B-淋巴細胞同時下降多見于：聯(lián)合免疫缺陷病，如重癥狀聯(lián)合免疫缺陷病等總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多62CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾?。ㄈ鏢CID、AIDS的病人體內(nèi)CD4+細胞亞群的百分率相對降低，而CD8+群體的百分率相對升高），自身免疫性疾病（如在SLE病人中，CD8+淋巴細胞的相對百分比往往會降低，但當使用類固醇藥物治療時，也可能上升。在急性GVHD和移植排斥中，CD8+淋巴細胞所占的比例有可能在正常人的范圍之外）

Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾?。?3CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫失調(diào)或已知患有免疫缺陷的病人的免疫狀態(tài)，此外，這一比值還可用來監(jiān)測骨髓移植病人以免受到急性GVHD的攻擊

CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風濕性關節(jié)炎、SLE。

CD4/CD8降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血等。Th/Ts比值CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫64自然殺傷細胞（NK）

NK細胞增高常見于：某些病毒感染性疾病的早期；長期使用干擾素或使用干擾素的誘導物；骨髓移植后；習慣性流產(chǎn)。

NK細胞降低常見于：惡性腫瘤，特別是中晚期或伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤；免疫缺陷病及使用腎上腺激素等免疫抑制劑。部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；某些白血病及白血病前期。自然殺傷細胞（NK）NK細胞增高常見于：某些65惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·

342·

中國醫(yī)科大學學報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭166惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·342·中國醫(yī)科大學學報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；HLA-B27流式細胞儀檢測其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PEAnti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；某些白血病及白血病前期。CD3+/CD4+：輔助性T細胞部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。巨細胞病毒感染以及血清或各類體液樣本。血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋病；淋巴細胞亞群的臨床檢測3，抗體與抗原結合后再結合補體清除病原體。瘧疾膜型腎小球腎炎惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·342·中國醫(yī)科大學學報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月B細胞特異性標志物：CD19類風關（活動期）接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋病；通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度AIDS基本上表達在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。自身溶血性貧血1、HLA-B27的檢測接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）流式細胞儀分析報告及圖譜原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋?。籋LA-B27流式細胞儀檢測巨細胞病毒感染腫瘤的細胞周期和倍體分析某些白血病及白血病前期。血吸蟲病NK細胞降低常見于：惡性腫瘤，特別是中晚期或伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤；通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度FS（前向散射光）--反應細胞大小疾病T細胞亞群

CD4+/CD8+CD4+CD8+類風關（活動期）

SLE-或（活動期）

Sjogren綜合癥

多發(fā)性硬化癥

重癥肌無力

膜型腎小球腎炎

胰島素依賴性糖尿病

乙型肝炎自身溶血性貧血

上呼吸道感染

傳染性單核細胞增多癥（急性期）惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭167巨細胞病毒感染

乙肝（急性期/慢性肝炎）

結核（胸水/重癥外周血）麻風

瘧疾

血吸蟲病

AIDS

CD4+/CD8+CD3+CD4+CD8+腫瘤

再障及粒細胞減少癥

巨細胞病毒感染

血小板減少

活動性特應性皮炎

過敏性皮炎

巨細胞病毒感染68BD四色淋巴亞群檢測試劑盒：

MultiTESTCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC

MultiTESTCD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCP/CD19APCBD四色淋巴亞群檢測試劑