臨床參考資料生化常用的色原及檢測波長

PAGEPAGE6臨床生化常用的色原及檢測波長Toos545nm苯酚（對氯苯酚）505nmNAD（P）H340nm，項目：ALT、AST、GLUCCK、UREA、LDH等。苯衍生物類，波長400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。過氧化物酶指示系統(tǒng)，項目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。（630～m、橙色0m、黃色0m、綠色0m、藍色5m、紫色0m。★540nm：雙縮脲測蛋白：所有蛋白質(zhì)分子都含有肽鍵。在堿性溶液中，肽鍵與銅離子540nm計算蛋白質(zhì)含量。Y燃料離解成陰離子型，染料的黃色消退，使試劑空白吸光度降低；另外，蛋白質(zhì)多肽鏈中的精氨酸、組氨酸、賴氨酸和色氨酸殘基，離解生成帶－NH3+540nm處吸光度大小與蛋白質(zhì)濃度呈比例?！?28nm：1.PH4.2的緩沖液中，白蛋白分子帶正電荷，與帶負電荷的溴甲酚綠（BCG）628nm復(fù)合物的吸光度與白蛋白濃度成正比?！?03nm：1.溴甲酚紫法（BCP）測血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸緩沖液中，呈黃色。當(dāng)它與白蛋白結(jié)合后轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色的符合物，在波長603出有最大吸收峰?！?50nm：0.6mol/L米吐爾直接顯色法測血清無機磷：利用無機磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸銨復(fù)合物，用還原劑對甲氨基酚硫酸鹽（米吐爾）劑中加入吐溫－80以抑制蛋白質(zhì)的干擾。★604nm：1.鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法測腦脊液總蛋白：鄰苯三酚紅與鉬酸絡(luò)合形成紅色復(fù)合物（m604nm。用比色法求蛋白質(zhì)含量?！?30nm：1.比濁法測腦脊液蛋白：腦脊液中蛋白質(zhì)與磺基水楊酸－硫酸鈉試劑作用產(chǎn)生530nm得蛋白含量?！?15nm：1.HbA1cHb的親和層析凝膠柱，是交聯(lián)Hb分子上葡萄糖的順位二醇基反應(yīng)，形成可逆的五環(huán)化合物，致使樣品中的糖化HbHb則被洗脫。然后用ftHb415nm分Hb的百分率。★550nm：1.N末端的氨1－脫氧－1550nm處進行比色?！?40nm：PAPAPA340nmPAPA含量。尿微量白蛋白測定：尿液中的白蛋白與抗人白蛋白特異性抗體在緩沖液中反340nm中的白蛋白濃度。己糖激酶法測血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，GluATP發(fā)生磷酸化反應(yīng)，生成葡萄糖－6－磷酸（G-6-P）ADPG－6－D6（6－GNADPH。反應(yīng)式如下：葡萄糖+ATP—HK—>G6P+ADPG6P+NADP—G6PD—>6PG+NADPH+H+NADPHNADPH340nm有吸收峰，檢測吸光度升高速率，計算血清葡萄糖濃度。葡萄糖脫氫酶法測血清葡萄糖：葡萄糖脫氫酶（GDH）化生成葡萄糖酸（D－葡萄糖酸－&－內(nèi)酯。B－D－葡萄糖+NAD+—GDH—>D－葡萄糖酸內(nèi)酯+NADHNADH萄糖濃度成正比關(guān)系。NADNADH：L－乳酸NAD+—LDH—>丙酮酸NADHH+PH9.8340nm，監(jiān)測吸光度的升高速率，計算乳酸含量。NAD+存在下，LDHNADH340nmNADH的生成量，計算乳酸的含量。NADHH+—LDHL－乳酸NAD+NADH本法適用于各種任選式自動分析儀。PH7.5條件下利于上述反應(yīng)（成乳酸方向）血清測定：在有NADB脫氫酶（B－HBDH）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc）NADH340nmB－羥丁酸的濃度。B－HB+NAD—B-HBDH—>AcAc+NADH+H+鉀的酶法測定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）與二磷酸腺苷（ADP）在鉀依賴性丙酮酸激酶（K）催化下，生成丙酮酸和三磷酸腺苷（。再在乳酸脫氫酶NADHNADNADH的消340nm以計算鉀離子含量。反應(yīng)式如下：PEP+ADP—K+,PK—>丙酮酸+ATP丙酮酸+NADH+H+—LDH—>乳酸+NAD+酶法測定血漿（血清）碳酸氫根及總二氧化碳：血漿（清）磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶催化下和磷酸烯醇式丙酮酸反應(yīng)，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶（MDH）催化下，生成蘋果酸，NADHNAD+340nm處，吸光度下降速率與樣品HCO3-含量成正比。反應(yīng)式如下。磷酸烯醇式丙酮酸+HCO3-—PEPC—>草酰乙酸+磷酸草酰乙酸+NADH+H+—MDH—>蘋果酸+NAD+340nm325nm波長處測定吸光度。ALT速率法測定中，酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：丙氨酸+a-酮戊二酸—>丙酮酸谷氨酸丙酮酸+NADH+H+—LDH—>L-乳酸+NAD+上述偶聯(lián)反應(yīng)中，NADH340nm波長處檢測吸光度下降速率（△nT的活力單位?！?00nm：SephadexG-50凝膠過濾，除BPB經(jīng)與同樣顯色的白蛋白標準液比較，可求得尿中白蛋白含量。甲基麝香草酚蘭比色法測血清鎂：血清中鎂、鈣離子在堿性溶液中能與甲基麝香草酚蘭染料結(jié)合，生成藍紫色的復(fù)合物，加入乙二醇雙-N,N,N,N-可掩蓋鈣離子的干擾?！?05nm：1.葡萄糖氧化酶法測血清葡萄糖：葡萄糖氧化酶（GOD）萄糖酸D－葡萄糖酸內(nèi)酯，并產(chǎn)生過氧化氫：Glu2H2OO2—GOD—>2H2O2在色原性氧受體（如聯(lián)大茴香胺、4－氨基安替比林偶氮酚）的存在下，過氧化505nm的葡萄糖濃度。★405nm：1.鈉的酶法測定：鄰硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG）B-半乳糖苷酶405nm度，計算鈉的濃度。★460nm：1.硫氰酸汞比色法測血清氯化物：標本中的氯離子與硫氰酸汞反應(yīng)，生成極難色澤很深的橙紅色硫氰酸鐵，吸收峰在460nm，色澤強度與氯化物的含量成正比。Hg（SCN）22Cl-——>HgCl2+2SCN-3CNFe3Fe（SCN）3（橙紅色）★610nm蘭結(jié)合，聲稱藍色的絡(luò)合物。加入適量的8-羥基喹啉，可消除鎂離子對測定的干擾，與同樣處理的鈣標準液進行比較，以求得血清總鈣的含量?！?75nm8-羥基喹啉以消除標本中鎂離子的干擾?！?40nm（鉬藍進行比色測定?！?10nmCalmagite染料比色法測定血清鎂：血清中鎂在堿性條件下與Calmagite染料生成紫紅色絡(luò)合物，顏色的深淺與鎂的濃度成正比。溶液中的EGTA可消除鈣的干擾，使用表面活性劑可使蛋白膠體穩(wěn)定，不必去除血清中蛋白質(zhì)而直接測定鎂?！?62nm解離出來，再被還原劑還原成二價鐵，后者與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在562nm處有吸收峰，可作比色測定。直接測定法應(yīng)糾正血清本身的色度，故應(yīng)設(shè)血清空白?？傝F結(jié)合力（TIBC）是指血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白能與鐵結(jié)