標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 40254-2021 輪枝菌屬實時熒光PCR檢疫鑒定方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在提供一種科學(xué)準(zhǔn)確的方法用于檢測和鑒定輪枝菌屬（Verticillium spp.）真菌。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了利用實時熒光定量PCR技術(shù)對植物樣本中的輪枝菌進行快速、靈敏且特異性的檢測流程。

標(biāo)準(zhǔn)首先明確了適用范圍，指出其適用于各類可能被輪枝菌感染的植物材料中目標(biāo)病原體DNA的提取與后續(xù)分析。接著，在術(shù)語和定義部分，介紹了相關(guān)概念如“模板DNA”、“引物”、“探針”等專業(yè)詞匯的確切含義，為理解全文打下基礎(chǔ)。

對于實驗所需的主要儀器設(shè)備及試劑耗材，《GB/T 40254-2021》也做了具體說明，包括但不限于熱循環(huán)儀、離心機、微量移液器等實驗室常用工具以及特定的核酸提取試劑盒、dNTPs混合物等生物化學(xué)制品。同時強調(diào)了在操作過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守安全防護措施，防止交叉污染。

樣品處理方面，標(biāo)準(zhǔn)提供了詳細(xì)的步驟指導(dǎo)，從采集新鮮或干燥植物組織開始，經(jīng)過研磨、裂解細(xì)胞壁直至最終獲得純凈度較高的基因組DNA溶液。此過程需注意避免外來DNA污染，并確保樣品充分破碎以利于后續(xù)反應(yīng)順利進行。

接下來是關(guān)鍵的PCR擴增環(huán)節(jié)，《GB/T 40254-2021》推薦使用特定序列設(shè)計的引物與TaqMan探針組合來識別輪枝菌特有的保守區(qū)域。通過設(shè)置合適的退火溫度、延伸時間等因素優(yōu)化反應(yīng)條件，使得目標(biāo)片段能夠高效復(fù)制并產(chǎn)生熒光信號。此外還列出了陽性對照品的選擇標(biāo)準(zhǔn)及其應(yīng)用價值。

結(jié)果判定部分則依據(jù)Ct值大小判斷是否存在目標(biāo)病原體感染情況：當(dāng)Ct值小于等于設(shè)定閾限時視為陽性；反之則為陰性。需要注意的是，由于不同實驗室之間可能存在差異，因此建議定期參與能力驗證活動以保證檢測結(jié)果的一致性和可靠性。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2021-05-21 頒布
  • 2021-12-01 實施
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GB/T 40254-2021輪枝菌屬實時熒光PCR檢疫鑒定方法_第1頁
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文檔簡介

ICS6502001

CCSB.16.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T40254—2021

輪枝菌屬實時熒光PCR檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofVerticilliumNeesusingreal-timePCR

2021-05-21發(fā)布2021-12-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T40254—2021

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任

。。

本文件由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本文件起草單位中華人民共和國寧波海關(guān)中國科學(xué)院微生物研究所西寧市蔬菜技術(shù)服務(wù)中心

:、、、

中國檢驗檢疫科學(xué)研究院中華人民共和國烏魯木齊海關(guān)

、。

本文件主要起草人段維軍蔡磊張慧麗趙鵬張曉梅郭立新劉芳李雪蓮張永江張小菊

:、、、、、、、、、、

陳先鋒

。

Ⅰ

GB/T40254—2021

輪枝菌屬實時熒光PCR檢疫鑒定方法

1范圍

本文件描述了植物病原真菌輪枝菌屬實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢疫鑒定方法

(PCR)。

本文件適用于攜帶輪枝菌屬病菌的土壤植物及其產(chǎn)品中輪枝菌屬病菌的檢測篩查

、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

植物病原真菌檢測規(guī)范

SN/T2589

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義

。

4基本信息

中文名輪枝菌屬

:。

學(xué)名Verticillium

:Nees。

輪枝菌屬隸屬于真菌界子囊菌門盤菌亞門糞殼菌綱

(Fungi),(Ascomycota),(Pezizomycotina),

中的小不整球殼科

(Sordariomycetes)(Plectosphaerellaceae)。

傳播途徑輪枝菌屬病菌主要由種子傳播也可經(jīng)病殘體土壤風(fēng)灌溉水和昆蟲傳播

:,、、、。

5鑒定原理

根據(jù)輪枝菌屬病菌的序列特征及實時熒光原理應(yīng)用所設(shè)計引物或探針對輪枝菌屬病

DNAPCR,

菌進行檢測鑒定

。

6儀器設(shè)備和器具試劑和培養(yǎng)基

、

61儀器設(shè)備和器具

.

高壓滅菌鍋顯微鏡解剖鏡天平水浴鍋制冰機純水儀渦旋振蕩器微量紫外分光光度計高

、、、、、、、、、

速冷凍離心機冰箱超凈工作臺生化培養(yǎng)箱通風(fēng)櫥實時熒光儀微量移液器

、、、、、PCR、(0.1μL~2.5μL、

錐形瓶培養(yǎng)皿

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