幾種常見的禽流感新型疫苗綜述(2),畜牧獸醫(yī)論文

幾種常見的禽流感新型疫苗綜述(2),畜牧獸醫(yī)論文Liu等[23]利用桿狀病毒表示出系統(tǒng)表示出H5N1亞型AIV的HA蛋白，參加弗氏完全佐劑制成疫苗后免疫SPF雞、商業(yè)用雞和BALB/c小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該疫苗可誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體反響且對(duì)SPF雞和商業(yè)用雞提供完全保衛(wèi)，以2g的劑量免疫7日齡雞兩周后可產(chǎn)生保衛(wèi)性免疫，血清抗體可持續(xù)6個(gè)月，而免疫BALB/c小鼠后同樣可抵抗AIV的致死性攻擊，講明該疫苗具有成為控制禽類和哺乳動(dòng)物流感候選疫苗的潛力。Kodihalli等[24]研制的火雞H5N2亞型AIVHA和NP復(fù)合亞單位疫苗免疫火雞21d后可產(chǎn)生較高的抗體滴度，并且可檢測(cè)到T細(xì)胞增殖和遲發(fā)型過(guò)敏反響，講明該疫苗可誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，而隨后的攻毒試驗(yàn)結(jié)果表示清楚，該疫苗能夠?qū)ν春彤愒础睭6N1〕亞型AIV的攻擊提供保衛(wèi)。李賀等[25]利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)獲得H7N1亞型AIVHA蛋白后，參加弗氏完全佐劑制成疫苗，以20g/羽的劑量免疫SPF雞，兩周后進(jìn)行加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)免疫兩周后的攻毒試驗(yàn)結(jié)果表示清楚該疫苗對(duì)同源AIV攻擊的保衛(wèi)率為100%,攻毒后取咽拭子和泄殖腔拭子并未分離到病毒。張新濤等[26]將H5N1亞型AIV的M2e蛋白制成疫苗后免疫SPF雞和BALB/c小鼠，攻毒后雖可對(duì)AIV的攻擊提供一定的保衛(wèi)，但保衛(wèi)率較低，可能是由于與HA相比，M2e的免疫原性較低。傳統(tǒng)的亞單位疫苗通過(guò)分離免疫原性強(qiáng)的蛋白亞單位制備而成，該方式方法操作復(fù)雜且成本較高，制約了亞單位疫苗的大規(guī)模生產(chǎn)[27].隨著基因工程和分子克隆技術(shù)的發(fā)展，可將抗原基因連接到載體質(zhì)粒，隨后借助于各種表示出系統(tǒng)可獲得大量具有免疫原性的蛋白亞單位，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)基因工程亞單位疫苗的大規(guī)模生產(chǎn)。但由于大多亞單位疫苗提取的是單一的抗原蛋白，誘導(dǎo)的免疫反響強(qiáng)度還有待提高，這是今后的禽流感亞單位疫苗研究需要解決的問題。3DNA疫苗DNA疫苗又稱為基因疫苗或核酸疫苗，是依靠當(dāng)代分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展而產(chǎn)生的一種新型疫苗。20多年前，科學(xué)家證實(shí)，直接注射可編碼免疫相關(guān)基因的真核表達(dá)質(zhì)粒即可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答[28].其原理是利用基因工程的方式方法將病毒的保衛(wèi)性抗原基因整合至真核表示出質(zhì)粒，在靶細(xì)胞中，抗原基因得以表示出，進(jìn)而刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性的體液和細(xì)胞免疫反響[29].相比于傳統(tǒng)疫苗，DNA疫苗具有多個(gè)優(yōu)點(diǎn)：①DNA疫苗愈加安全、穩(wěn)定，且生產(chǎn)成本低、易于操作；②可同時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，且抗體持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)；③DNA疫苗具有熱穩(wěn)定性，易于保存和運(yùn)輸；④將攜帶不同抗原基因的真核表示出質(zhì)?；旌峡芍瞥蓮V譜疫苗，抵抗多種病毒的感染；⑤DNA疫苗免疫只表示出一種或幾種抗原蛋白，接種時(shí)沒有潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)[30-31].張強(qiáng)哲等[32]構(gòu)建了可表示出H5亞型AIVHA基因的重組表示出質(zhì)粒pC4H5和pCMVH5,采用電擊法免疫小鼠和SPF雞后，均能對(duì)H5亞型AIV的攻擊提供完全保衛(wèi)。有研究以為，流感病毒HA、NA、M1、NP和NS1等基因均可用于DNA疫苗的生產(chǎn)[33],但多數(shù)采用HA基因。基于M2e基因的DNA疫苗誘導(dǎo)的免疫保衛(wèi)力固然低于基于HA基因的DNA疫苗，但M2e基因具有在A型流感病毒中高度保守的序列，因而M2eDNA疫苗有可能在廣譜疫苗的研發(fā)中發(fā)揮重要作用。據(jù)此，Park等[34]構(gòu)建了攜帶H1N1亞型AIVHA和M2e基因的融合質(zhì)粒，免疫動(dòng)物后用H5N2亞型AIV進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，融合質(zhì)?？蓪?duì)H5N2亞型AIV的攻擊提供完全保衛(wèi)，且保衛(wèi)效果要高于只含有HA或M2e基因的質(zhì)粒，表示清楚用融合質(zhì)粒構(gòu)建的疫苗具有穿插保衛(wèi)性。盡管與傳統(tǒng)疫苗相比DNA疫苗具備眾多優(yōu)點(diǎn)，但曾經(jīng)有報(bào)道指出，肌肉注射免疫DNA疫苗在攻毒前并不能誘導(dǎo)產(chǎn)生可檢測(cè)到的HI抗體[35],而在Chen等[36]的研究中卻得到了不一樣的結(jié)果。其將一株H5N1亞型AIV的HA基因克隆至載體pCI上構(gòu)建了疫苗質(zhì)粒pCIHA,分別以100和50g/羽的劑量肌肉注射免疫3周齡的SPF雞，一免兩周后進(jìn)行加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)免疫兩周后以10LD50進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。結(jié)果顯示，一免兩周后的HI抗體滴度分別為25.82.0和24.72.5,加強(qiáng)免疫兩周后的HI抗體滴度分別為28.42.7和27.63.9,攻毒一周后HI抗體滴度分別為29.62.2和29.02.4,且攻毒后雞不死亡、不排毒、無(wú)臨床異常感覺和狀態(tài)，表示清楚DNA疫苗可引起高水平的HI抗體反響并誘導(dǎo)對(duì)致死性AIV攻擊的完全保衛(wèi)。4病毒樣顆粒疫苗流感病毒血清型諸多，根據(jù)HA和NA抗原性上的差異，A型流感病毒又可進(jìn)一步分為18個(gè)HA亞型和11個(gè)NA亞型，這給禽流感疫苗的研發(fā)帶來(lái)了宏大的困難，病毒樣顆?！睼LP〕疫苗為這一難題提供了解決辦法。VLP是含有某種病毒一個(gè)或多個(gè)構(gòu)造蛋白的顆粒，具有完好病毒的免疫原性而不含病毒核酸，因而可誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答但不能自主復(fù)制。VLP疫苗具有眾多優(yōu)勢(shì)：①VLP疫苗不含病毒核酸，在使用經(jīng)過(guò)中不會(huì)發(fā)生病毒的基因重組，因而具有很高的安全性；②VLP可被抗原遞呈細(xì)胞捕獲，因而可誘導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫；③VLP疫苗成本低，生產(chǎn)周期短，給疫苗的大規(guī)模生產(chǎn)提供便利；④VLP可應(yīng)用多種表示出系統(tǒng)生產(chǎn)，如桿狀病毒表示出系統(tǒng)、大腸桿菌表示出系統(tǒng)、酵母表示出系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物表示出系統(tǒng)，擺脫了傳統(tǒng)疫苗對(duì)雞胚的依靠，保證了禽流感大流行時(shí)疫苗的供給；⑤VLP疫苗愈加穩(wěn)定，不易失活[37].上述優(yōu)勢(shì)使VLP疫苗成為最近幾年研究的熱門。在上述VLP表示出系統(tǒng)中，應(yīng)用最廣的是桿狀病毒表示出系統(tǒng)。桿狀病毒表示出系統(tǒng)在表示出外源蛋白方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，易于挑選，蛋白表示出水平高，成本低，易于外源蛋白的大規(guī)模生產(chǎn)且具有很高的安全性，更重要的是，使用該系統(tǒng)表示出的蛋白保持了原有的生物活性，保存了原有的免疫活性[38].王立強(qiáng)等[39]構(gòu)建了能共表示出H5N1亞型AIVHA、NA、M1和M2蛋白的桿狀病毒，并在昆蟲細(xì)胞中組裝成病毒樣顆粒，該VLP的形態(tài)與AIV一致且具有血凝活性。黃曉媛等[40]對(duì)H5N1亞型禽流感VLP與全病毒滅活苗進(jìn)行了體液免疫和細(xì)胞免疫的比擬，免疫小鼠后發(fā)現(xiàn)，VLP和全病毒滅活苗均能使小鼠血清IgG效價(jià)升高且VLP免疫劑量達(dá)到200ng/只后可對(duì)病毒攻擊提供完全保衛(wèi)，CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例較正常小鼠均升高且與免疫劑量呈正相關(guān)，表示清楚H5N1亞型AIVVLP可誘導(dǎo)機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫。Novavax公司于2005年利用Bac-to-Bac昆蟲桿狀病毒表示出系統(tǒng)研制成含有H9N2亞型AIVHA、NA、M1蛋白的VLPs疫苗，經(jīng)比照試驗(yàn)表示清楚該疫苗具有很好的免疫原性和保護(hù)力，可作為流感大流行時(shí)的備選疫苗[41].5結(jié)束語(yǔ)進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)，全球范圍內(nèi)爆發(fā)了多起禽流感疫情，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成了極大的影響。不僅如此，AIV跨越種間障礙感染人的事件也越來(lái)越多。2020年爆發(fā)于中國(guó)的H7N9亞型禽流感在短時(shí)間內(nèi)造成了132人感染、37人死亡的嚴(yán)重后果。由此可見，防控禽流感不僅關(guān)系到養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，更是與人類的生命安全息息相關(guān)。研制快速而有效的禽流感疫苗一直都是人們關(guān)注的焦點(diǎn)，而除了疫苗本身以外，制作疫苗經(jīng)過(guò)中使用的佐劑、疫苗的接種途徑及其他可能影響免疫效果的因素同樣值得關(guān)注，只要到達(dá)最佳的組合才能獲得最好的免疫效果，這樣，在面對(duì)禽流感疫情時(shí)才能愈加沉著。以下為參考文獻(xiàn)：[1]TangDC,ZhangJ,ToroH,etal.Adenovirusasacarrierforthedevelopmentofinfluenzavirus-freeavi-aninfluenzavaccines[J].ExpertRevVaccines,2018,8〔4〕：469-481.[2]ChanPKS.OutbreakofavianinfluenzaA〔H5N1〕virusinfectioninHongKongin1997[J].ClinicalIn-fectiousDiseases,2002,34