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文檔簡介

專題一基因工程的原理__________,操作對象___________,操作水平________,意義___________________________2.蛋白質(zhì)工程的操作對象________,蛋白質(zhì)工程的目的獲得滿足人類生產(chǎn)和生活需求的蛋白質(zhì)思考,對天然蛋白質(zhì)進行改造,直接對蛋白質(zhì)進行操作,還是直接對基因進行操作,為什么?P26蛋白質(zhì)工程基本途徑_____________________________________________________________,蛋白質(zhì)工程概念:指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),________________________________________________________________________________蛋白質(zhì)工程利用的手段?基因修飾和基因合成蛋白質(zhì)工程與基因工程的區(qū)別?(蛋白質(zhì)工程可以獲得新的蛋白質(zhì),基因工程只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))天然蛋白質(zhì)的合成過程是按照中心法則進行的基因工程的基本工具包括_____________________________________限制酶的特點____________________________________________________________________大多數(shù)限制酶的識別序列由____個核苷酸組成,可產(chǎn)生__________兩種末端,限制酶主要是從___________分離出來的,破壞的化學(xué)鍵是______________DNA連接酶的種類有__________________________,其中從大腸桿菌中分離出來的是_____________,它連接的是_________末端,另一類是從T4噬菌體中分離的是___________,它連接的是_________末端,DNA連接酶連接的是_____________鍵,DNA連接酶是否具有特異性?_________載體的種類有____________________________,其中,最常用的運載體是________________,質(zhì)粒是__________________________________________________________________________化學(xué)本質(zhì)是__________,作為載體必備的條件?能夠在受體細胞中穩(wěn)定存在并自我復(fù)制,對受體細胞無害,有一個或多個酶切位點,具有標記基因思考:基因工程中使用的質(zhì)粒是否是天然質(zhì)粒?(不是,使用的是人工改造過的天然質(zhì)粒)基因工程的基本操作步驟是_____________________________________________________,核心步驟為第____步,不涉及堿基互補配對的為第_____步,目的基因主要是______________________________,也可以是___________________________,獲取目的基因的方法?從基因文庫中獲取,利用PCR技術(shù)擴增,人工合成,人工合成法常用的方法有反轉(zhuǎn)錄法,化學(xué)合成法?;蛭膸斓姆诸悾浚ɑ蚪M文庫和部分基因文庫(如cDNA文庫)),cDNA文庫和基因組文庫的比較(P10)PCR技術(shù)擴增目的基因PCR擴增時,需要從基因組數(shù)據(jù)庫卡中查詢目的基因的核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列合成引物用于PCR擴增。PCR的中文名稱_________________,目的_______________,原理_____________,利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提_________________________,過程:________→_______→_______,在擴增時首先要加熱到90-95度,目的是使DNA受熱變性雙鏈解旋成單鏈。在PCR過程中需要加入的物質(zhì)即原料有__________________________________________,其中引物的實質(zhì)是____________________,一般需要___種引物,引物與DNA鏈的_____端(5’端或者3’端結(jié)合,所用到的酶是_________,其實質(zhì)是____________,它與體內(nèi)DNA復(fù)制相比,沒有用到的酶是__________,為什么____________,Taq酶與DNA聚合酶相比,有什么不同?_______________________,利用PCR技術(shù)進行擴增,DNA合成的方向總是從子鏈的5’端到3’端延伸。人工合成法適用的條件是___________________________________反轉(zhuǎn)錄法是將mRNA通過_________過程得到用到的酶是______________化學(xué)合成法是指直接用脫氧核糖核苷酸合成DNA。基因工程的核心是基因表達載體的構(gòu)建,其目的是P11________________________一個基因表達載體的組成有_____________________________________________________,啟動子的本質(zhì)是DNA片段,作用________________________________,終止子本質(zhì)是DNA片段

,而起始密碼子和終止密碼子是位于mRNA上,作用是驅(qū)動翻譯的起始與終止,標記基因的作用_____________________________________________,目的基因的首尾兩端插入到_____________________之間。構(gòu)建基因表達載體的方法一般是用同一種限制酶來切割目的基因和運載體,再用DNA連接酶進行連接,易形成兩兩結(jié)合產(chǎn)物為目的基因-目的基因、運載體-運載體、目的基因-運載體,可如何防止?目的基因的兩側(cè)用不同的限制酶切割。經(jīng)兩種不同限制酶切割后的目的基因和運載體可以連接起來,原因是切割后產(chǎn)生的黏性末端相同,切割目的基因需切___次,產(chǎn)生____個黏性末端,基因工程第三步:將目的基因?qū)胧荏w細胞轉(zhuǎn)化的概念____________________________________________將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒??___________________________________,受體細胞為___________,其中最常用的方法是___________,能感染_________________植物,農(nóng)桿菌的特點?(農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移到受體細胞并整合到受體細胞染色體的DNA上),原理是___________________________________________________________________,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法使用的載體是_________,其中植物的一個細胞能培養(yǎng)再生成植株,技術(shù)是_________________________,原理是____________________,單子葉植物常用的方法是_____________,轉(zhuǎn)基因抗蟲棉所使用的方法是_______________,為什么一般不用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法?______________________________。將Bt基因?qū)氲剿炯毎麜r不宜采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法?水稻是單子葉植物,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法對單子葉植物沒有感染能力。如果將Bt基因成功整合到二倍體水稻細胞中的一條染色體上,則水稻________(填能、不能)穩(wěn)定遺傳將目的基因?qū)雱游锛毎姆椒ㄊ莀_________________常用的受體細胞是_____________為什么?____________________________________將目的基因?qū)胛⑸锛毎涸松镒鳛槭荏w細胞的原因是__________________________

,最常用的原核細胞是_____________,其轉(zhuǎn)化方法是:用Ca2+處理后成為感受態(tài)細胞,原理是Ca2+能改變細胞膜的通透性,使細胞處于感受態(tài),感受態(tài)細胞是什么?____________________________第四步:目的基因的檢測和表達目的基因能否在真核生物中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是_________________________________________1.首先要檢測目的基因是否插入轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA上,方法________________2.其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,方法是____________________前兩步的檢測探針是否相同,探針是_________________________,所依據(jù)的原理是否相同,原理是_______________,3.最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是_____________________上述的檢測是___________(分子檢測還是個體檢測),最終結(jié)果都是觀察是否出現(xiàn)_雜交帶有時還需進行個體水平的鑒定。如植物的抗蟲或抗病的接種實驗。最簡便的檢測方法是_______(分子檢測還是個體檢測)例:干擾素基因是否翻譯出蛋白質(zhì),可用(干擾素)抗體(物質(zhì))進行檢測乳腺生物反應(yīng)器的基因表達載體的構(gòu)建是將目的基因與________________啟動子重組在一起,導(dǎo)入細胞的方法是__________,導(dǎo)入的細胞是___________,導(dǎo)入個體的性別有限制嗎?____________乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)的藥用蛋白需要與天然產(chǎn)品的活性相比較,以確定其是否與天然產(chǎn)品相同。干擾素的化學(xué)本質(zhì)________,為抗________的特效藥膀胱生物反應(yīng)器與乳腺生物反應(yīng)器的比較?(目的基因表達的細胞不同,膀胱生物反應(yīng)器的外源基因在膀胱上皮細胞中表達。其優(yōu)勢體現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因動物既可以為雌性,也可以為雄性,且各個年齡段都能獲取目的產(chǎn)物)基因治療P23,概念:類型專題二細胞工程的操作水平_______________植物細胞工程有哪些技術(shù)?_______________________________相應(yīng)的原理為_________________________________________

全能性的概念?大小比較?(具有某種生物全部遺傳信息或全套遺傳物質(zhì)的細胞都具有發(fā)育成完整生物體的潛能,一般與分化程度成反比,與分裂能力成正比)(受精卵>生殖細胞>干細胞>體細胞;植物細胞>動物細胞)

在生物的生長發(fā)育過程中,細胞并沒有表現(xiàn)出全能型,而是分化成各種組織和器官,原因是基因的選擇性表達植物組織培養(yǎng)的過程?(離體的植物器官、組織或細胞(脫分化)愈傷組織(再分化)胚狀體或根、芽→植物體)

脫分化概念?(已經(jīng)分化的細胞經(jīng)誘導(dǎo)后失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能轉(zhuǎn)化為未分化細胞的過程。)

愈傷組織的特征?(排列疏松,高度液泡化,具有分生能力的薄壁組織)脫分化,再分化過程的比較?(都需要添加植物激素(生長素和細胞分裂素),但二者含量比例不同(翻書P35)。另脫分化要嚴格避光,再分化過程需要光照)思考:為什么再分化需要光照?脫分化的實質(zhì)是細胞重新獲得分裂能力,再分化的實質(zhì)是基因的選擇性表達在植物組織培養(yǎng)過程中生長素的作用,細胞分裂素的作用(翻書P42)植物胡蘿卜培養(yǎng)時,取材為形成層,原因是易形成愈傷組織,胡蘿卜的其他部分如莖葉花是否能培養(yǎng)成植株?能(課后習(xí)題)植物組織培養(yǎng)的條件是___________________________________________________________,植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基在形態(tài)上是固體還是液體_______其中需要加入蔗糖,作用是1.提供能量2.調(diào)節(jié)滲透壓植物體細胞雜交技術(shù)包括的兩個步驟是______________________________________________,相對應(yīng)的原理是_______________________________________,生殖方式為有性還是無性______,過程①:去壁。(酶解法)用纖維素酶和果膠酶去壁②:原生質(zhì)體的融合(利用了細胞膜的流動性)(兩兩融合可形成___種細胞,要進行篩選。)誘導(dǎo)融合方法:物理法包括___________________等。化學(xué)法常用______________作為誘導(dǎo)劑。融合后形成的細胞稱為雜種細胞③融合完成的標志,有新的細胞壁生成,參與此過程的細胞器有高爾基體和線粒體,可通過質(zhì)壁分離與復(fù)原實驗來判斷,注意用_______(等滲還是低滲高滲)溶液融合。④植物組織培養(yǎng)。意義:克服了遠緣雜交不親和的障礙。植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用?(微型繁殖、作物脫毒、制造人工種子、單倍體育種、細胞產(chǎn)物(培養(yǎng)到愈傷組織)的工廠化生產(chǎn)。)作物脫毒:可選________進行培養(yǎng),原因是________________________人工種子包括______________________,與天然種子相比的優(yōu)點是_______________________________________________________________________________,為了促進胚狀體的生長發(fā)育,還可以向人工種皮中加入哪些物質(zhì)?______________________單倍體育種包括哪兩個步驟__________________________________,意義________________________________________________突變體的利用:可對植物的愈傷組織進行誘變處理,原理為:____________________________細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)一般培養(yǎng)到__________階段,用液體培養(yǎng)基動物細胞工程包含哪些技術(shù)?(動物細胞培養(yǎng)(基礎(chǔ)),核移植技術(shù),動物細胞融合,生產(chǎn)單克隆抗體)動物細胞培養(yǎng)原理?____________實例:用培養(yǎng)的人細胞構(gòu)建人造皮膚(課本上的例子)動物細胞培養(yǎng)過程?(選材:取__________________________________(分裂能力強,分化程度低)→______→用__________酶或________酶處理(目的:去掉組織間蛋白質(zhì),使組織分散成單個細胞,能不能用胃蛋白酶,原因_______________)→制成細胞懸液→原代培養(yǎng)(特點:細胞貼壁和接觸抑制)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。)動物細胞培養(yǎng)的條件?(四點)____________________________________________________①__________的環(huán)境:操作:1___________________。2.在培養(yǎng)液中添加_________,原因:__________________。3.應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,目的:防止代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害。②______:合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。培養(yǎng)液在形態(tài)上是液體培養(yǎng)液,糖是指葡萄糖,④氣體環(huán)境:把培養(yǎng)瓶放在95%空氣+5%CO2。O2作用:是細胞代謝所必需的,CO2主要作用:維持培養(yǎng)液的pH。動物核移植技術(shù)原理_______________________________,動物核移植分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植,為什么體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植?___________________________________體細胞核移植過程受體細胞為MⅡ中期(不能寫成減二中期)的________細胞,并對受體細胞進行________處理,普遍去核的方法是________________,并用吸管吸出細胞核和第一極體,然后將供體細胞注入去核卵母細胞,用______________方法(如________________________________)激活受體細胞,使其完成細胞分裂和發(fā)育進程,通過____________使兩細胞融合,供體核進入受體卵母細胞,構(gòu)建重組胚胎。最后所得的動物為動物是克隆動物,生殖方式為__________,思考:在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前,為什么必須先去掉受體卵母細胞的核?_________________________________________________________________________________用于核移植的供體細胞一般是__________________________,為什么______________________ 克隆動物是對供體動物的100%的復(fù)制嗎?____________________________________________動物體細胞核移植過程中設(shè)計的技術(shù)有:______________________________________________動物細胞融合原理?(細胞膜的流動性)誘導(dǎo)動物細胞融合的方法?(物理法包括離心、振動、電刺激(字不能寫錯)等?;瘜W(xué)法:聚乙二醇(PEG)。生物法:滅活的病毒)動物細胞融合與原生質(zhì)體的融合相比,特有的方法是___動物細胞融合的意義?克服了遠緣雜交的不親和性,融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞,稱為雜交細胞單克隆抗體的制備從免疫小鼠中得到__________細胞,___________和___________兩種細胞融合,再用選擇性培養(yǎng)基進行篩選,目的:篩選出雜交瘤細胞,還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,目的:篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。最后,將雜交瘤細胞________________培養(yǎng)或____________增殖,從___________和____________提取大量的單克隆抗體。B淋巴細胞的特點:______________________骨髓瘤細胞的特點:_________________________雜交瘤細胞的特點:既能大量繁殖,又能產(chǎn)生專一的抗體。單克隆抗體的優(yōu)點:特異性強,靈敏度高,并能大量制備。單克隆抗體的作用:①

作為診斷試劑:②

用于治療疾病和運載藥物:主要用于癌癥治療,可制成“生物導(dǎo)彈”單克隆抗體最廣泛的用途是______________________專題三精細胞變形成精子?細胞核變?yōu)榫宇^部的主要部分,高爾基體發(fā)育為頭部的頂體,中心體演變?yōu)榫拥奈玻€粒體聚集在尾的基部形成線粒體鞘,其他物質(zhì)濃縮成原生質(zhì)滴最后隨精子成熟脫落,最終,細胞核和線粒體保留下來(了解)精子發(fā)生的場所是睪丸,卵子的發(fā)生的場所是卵巢和輸卵管,精子和卵子在發(fā)生上的重要區(qū)別是:哺乳動物卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的準備,是在出生前(即胎兒時期)完成的。卵子發(fā)生過程中,減數(shù)第一次分裂是在完成的,減數(shù)第二次分裂是在完成的,卵子是否受精的重要標志是_________________________排卵是指卵子從卵泡中排出,排出的細胞可能是,它不是成熟的卵子。受精包括準備階段和受精階段,準備階段包括精子獲能(在雌性動物生殖道)和卵子的準備(在輸卵管中進一步成熟,達到MⅡ中期)受精是在雌性動物的輸卵管內(nèi)完成的受精前的準備包括_____________和________________受精過程主要包括:精子穿越放射冠和透明帶,進入卵黃膜,原核形成和配子結(jié)合。受精階段:頂體反應(yīng),透明帶反應(yīng),卵細胞膜反應(yīng)。防止多精入卵的屏障?(第一道屏障:透明帶反應(yīng)、第二道屏障:卵細胞膜反應(yīng))受精的標志:受精完成的標志:胚胎發(fā)育的過程:受精卵→桑椹胚→囊胚→原腸胚→幼體,卵裂期:特點:細胞有絲分裂,細胞數(shù)量不斷增加,但胚胎的總體積并不增加,或略有縮小。

__________前的每一個細胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能,屬于全能細胞。________階段的細胞開始出現(xiàn)分化。內(nèi)細胞團將來發(fā)育胎兒的各種組織,滋養(yǎng)層細胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤。____________細胞具有發(fā)育的全能型從________個階段開始出現(xiàn)胚層分化。試管動物技術(shù)包括___________________________________________________________,發(fā)育的起點是___________,生殖方式是,克隆動物技術(shù)包括___________________________________________,發(fā)育的起點是_________,生殖方式_____________,體外受精主要包括三個步驟_________________________________________________卵母細胞的采集:對于實驗動物,一般用促性腺激素處理,方法是超數(shù)排卵。精子的獲能,體外獲能方法有培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法,對于嚙齒動物家兔豬,采用培養(yǎng)法,放入人工配制的獲能液中,對于牛羊家畜,采用化學(xué)誘導(dǎo)法,放在一定濃度的的肝素或鈣離子載體中。受精是指將獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵子,放在獲能液或?qū)S檬芫芤褐型瓿?。早期胚胎培養(yǎng)是把受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中培養(yǎng),成分包括:_____________________________________(兩鹽,兩素,兩酸,一血清),而動物細胞培養(yǎng)營養(yǎng)成分包括葡萄糖,氨基酸,促生長因子,無機鹽,微量元素,以及血清血漿。早期胚胎培養(yǎng)的目的是以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力。___________是胚胎工程其他技術(shù)的最后一道工序。它的生殖方式是________胚胎移植的優(yōu)勢是___________________________________________胚胎的來源是_____________________________________________供體的主要職能是_______

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