實驗五、血液葡萄糖測定概論

實驗五、血液葡萄糖測定概論第一頁，共11頁。二、實驗原理磷鉬酸鉬藍（藍色）C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5COOH+Cu2O↓3Cu2O+3H3PO4·2MoO3·12H2O6CuO+3H3PO4·Mo2O3·12H2ONa2CO3＋H2O＝NaOH+NaHCO3

NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4堿性銅試劑第二頁，共11頁。鉬藍溶液顯藍色，其藍色的深淺與血濾液中葡萄糖的濃度成正比，選用顏色深淺較接近于測定管的標準管一同比色，即可求出測定管中葡萄糖的含量。血糖管的使用：血糖管下部的管徑較細，以避免還原生成的氧化亞銅被空氣中的氧再氧化，降低實際結(jié)果。第三頁，共11頁。無蛋白血濾液的制備

多生化分析要避免蛋白質(zhì)干擾，常常先將其中蛋白質(zhì)除去；分析血液中許多成分時，也常常需要除去蛋白質(zhì)，制成無蛋白質(zhì)的血濾液。制備無蛋白血濾液的方法很多，可根據(jù)不同的需要加以選擇。現(xiàn)將生化常用的無蛋白血濾液制備方法介紹如下：

第四頁，共11頁。鎢酸法

原理：血液中的蛋白質(zhì)在pH小于其等電點時，可用鎢酸來沉淀。鎢酸鈉與硫酸混合產(chǎn)生鎢酸和硫酸鈉，游離的鎢酸被，蛋白質(zhì)吸附，形成不溶性的鎢酸蛋白而沉淀，經(jīng)過濾或離心，除去沉淀即得無蛋白的血濾液。試劑：①10%鎢酸鈉溶液；②0.333mol／L硫酸溶液。儀器與器材：錐形瓶、吸管、奧氏吸管、濾紙、漏斗或離心管及離心機。第五頁，共11頁。方法與步驟：①取50ml錐形瓶1只，加入蒸餾水7份；②用奧氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，將吸管插人錐形瓶中水的底部，緩慢地放出血液。放完血液后，將吸管提高吸取上清液再吹人，反復洗管3次。充分混合，使紅細胞完全溶解；③加入0.333mol／L硫酸溶液1份，隨加隨搖，充分混勻。此時血液由鮮紅變成棕色，靜置5～10min，使其酸化完全；④加入10％鎢酸鈉溶液1份，邊加邊搖，血液由透明變成凝塊狀。當振搖到不再產(chǎn)生泡沫為止；⑤放置數(shù)分鐘后用定量濾紙過濾或離心除去沉淀，即得完全澄清的無蛋白血濾液，供測定用。用此法制得的無蛋白血濾液為10倍稀釋的血濾液。即每毫升血濾液相當于全血0.ml，適用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的測定。第六頁，共11頁。三、實驗步驟1、全血無蛋白濾液的制備抗凝血1ml蒸餾水7ml混勻1/3mol/L硫酸1ml振搖10%鎢酸鈉1ml振搖過濾放置5min無蛋白血濾液第七頁，共11頁。2、按表操作混勻，置沸水浴中煮8min。取出用流動自來水冷卻3min無蛋白血濾液蒸餾水標準葡萄糖應用液堿性銅試劑空白管標準管測定管1.01.0-1.0-----2.02.02.0血糖管試劑ml磷鉬酸試劑2.02.02.01：4磷鉬酸溶液加至混勻后放置2min12.512.512.5第八頁，共11頁。3、比色測定將各管顛倒混勻后，用空白管調(diào)零，在420nm處測定吸收度。四、操作注意1、等水沸騰后，才能放入血糖管。加熱要準確8分鐘。2、冷卻時切不可搖動血糖管，以免還原的氧化亞銅被空氣中的氧再氧化，降低實際結(jié)果。3、加入磷鉬酸后迅速比色。4、分光光度計的使用。第九頁，共11頁。分光光度計的使用1、接通電源，打開比色皿蓋，預熱20-30分鐘后，調(diào)節(jié)波長至所需波長。2、將盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其余放測定溶液。將比色皿蓋蓋上，此時空白溶液在光路上。將光點調(diào)到“T”，調(diào)節(jié)T為100%。3、將光點調(diào)到“A”，輕輕拉動比色架固定拉桿，使第二個比色皿溶液處在光路