大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)課件

大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)質(zhì)量管理部目錄一、細(xì)菌介紹二、大腸桿菌生物學(xué)特性三、大腸桿菌檢測儀器、設(shè)備四、檢測培養(yǎng)基及試劑五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備六、接種培養(yǎng)七、MPN單位介紹八、檢測注意事項一、細(xì)菌介紹細(xì)菌是單細(xì)胞原核微生物，個體微?。?xì)胞直徑約0.5μm,0.5-5μm），結(jié)構(gòu)簡單，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，細(xì)菌分布最廣、數(shù)量最多。1、細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌個體微小、形態(tài)各異球菌桿菌弧菌與彎曲菌螺旋菌及螺旋體不規(guī)則形弧菌2、細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、間體、細(xì)胞漿、核糖體、細(xì)胞質(zhì)。細(xì)菌的附屬結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)粒、莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞。3、細(xì)菌的繁殖細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細(xì)胞赤道附近的細(xì)胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細(xì)胞。

4、細(xì)菌的菌落單個或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長繁殖后，會形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)－菌落。細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。

細(xì)菌的菌落圖二、大腸桿菌生物學(xué)特性大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。主要包括埃希氏菌、檸檬酸細(xì)菌、腸桿菌、克雷伯氏菌等，均屬于腸桿菌。大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無芽孢，以周生鞭毛運動或不運動。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。1、大腸桿菌平板菌落照片2、大腸桿菌革蘭氏染色照片3、大腸桿菌微菌落照片4、大腸桿菌透射電鏡照片5、大腸桿菌掃描電鏡照片6、大腸桿菌分裂照片三、檢測儀器、設(shè)備

冰箱：0～4℃恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃恒溫水浴鍋：46±1℃微生物顯微鏡架盤藥物天平：0g～500g，精確至0.5g三角瓶：500ml滅菌吸管：1ml、10ml滅菌平皿：直徑90mm試管：18×180mm四、檢測培養(yǎng)基及試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管伊紅美藍(lán)瓊脂乳糖發(fā)酵管革蘭氏染色液生理鹽水乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分加倍。乳糖發(fā)酵管：大腸菌群證實試驗用。30g乳糖于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，115℃15分鐘高壓滅菌。伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。37.5g于1升蒸餾水中，搖勻，加熱煮沸，121℃15分鐘高壓滅菌。五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備檢查預(yù)先經(jīng)過滅菌處理的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基小導(dǎo)管內(nèi)是否有氣體。按產(chǎn)品品種將培養(yǎng)基分別放在試管架內(nèi)，同時將9ml0.85%滅菌鹽水管也放入相應(yīng)的試管架內(nèi)。六、接種培養(yǎng)（一）酸牛奶系列產(chǎn)品酸牛奶系列產(chǎn)品接種單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基9支管，分別接種樣品量為1ml(原濃度)3支，0.1ml(10-1濃度)3支，0.01ml(10-2濃度)3支。

1、1ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。2、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10的稀釋液1ml于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:100的稀釋液；同時分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。3、

0.01ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:100稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。4、接種過程操作錄像檢測\單料大腸檢測.MPG5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。（二）活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基3支管，單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基6支，分別接種樣品量為10ml3支，1ml3支，0.1ml3支。1、10ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時用10ml滅菌吸管分別吸取10ml樣品試液于3支雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。2、1ml接種培養(yǎng)另用1ml滅菌移液管分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。3、0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。4、接種過程操作錄像檢測\雙料大腸檢測.MPG5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。

若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。（三）證實試驗1、伊紅美藍(lán)瓊脂平板分離將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h。接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀平板分離畫線法1.斜線法2.曲線法3.方格法4.放射法5.四格法將伊紅美藍(lán)瓊脂平板從培養(yǎng)箱取出后,觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵試驗。革蘭氏染色：見《革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范》。（四）乳糖發(fā)酵試驗挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于36±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。將檢測結(jié)果填入《微生物檢測報告單》，并及時傳遞給相關(guān)部門。七、MPN單位介紹MPN=MostProbableNumber，最大可能數(shù)，是一種利用統(tǒng)計學(xué)檢測微生物的方法。食品大腸菌群是以每克或100ML中大腸菌群的最近似值，是用MPN來表示。采用9管法，對樣品選三個稀釋度，每個稀釋度接種三管相應(yīng)的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，然后根據(jù)情況做出判斷陽性和陰性，再根據(jù)不同稀釋度的陽性管數(shù)查表即可得到被測樣品相應(yīng)指標(biāo)的MPN值。八、注意事項

乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)小導(dǎo)管內(nèi)如無氣泡，需輕振試管，若有氣泡上冒，也算產(chǎn)氣。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上的菌落如為深紫色有金屬光澤，則為典型菌落，98%以上為大腸菌群。革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵時如有典型菌落，則挑取典型菌落；無典型菌落，應(yīng)挑取紅色和粉色菌落。如果只有紅色或粉色菌落，應(yīng)挑取3個進(jìn)行革蘭氏染色，并接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基。如果有紅色和粉色菌落，則各挑取3個做革蘭氏染色，各挑取3個接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基混合接種。樹立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識。7月-237月-23Saturday,July15,2023人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。19:27:3319:27:3319:277/15/20237:27:33PM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。7月-2319:27:3319:27Jul-2315-Jul-23加強(qiáng)交通建設(shè)管理，確保工程建設(shè)質(zhì)量。19:27:3319:27:3319:27Saturday,July15,2023安全在于心細(xì)，事故出在麻痹。7月-237月-2319:27:3319:27:33July15,2023踏實肯干，努力奮斗。2023年7月15日7:27下午7月-237月-23追求至善憑技術(shù)開拓市場，憑管理增創(chuàng)效益，憑服務(wù)樹立形象。15七月20237:27:33下午19:27:337月-23嚴(yán)格把控質(zhì)量關(guān)，讓生產(chǎn)更加有保障。七月237:27下午7月-2319:27July15,2023作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)記得牢，駕輕就熟除煩惱。2023/7/1519:27:3319:27:3315July2023好的事情馬上就會到來，一切都是最好的安排。7:27:33下午7:27下午19:27:337月-23一馬當(dāng)先，全員舉績，梅開二度，業(yè)績保底。7月-237月-2319:2719:27:3319:27:33Jul-23牢記安全之責(zé)，善謀安全之策，力務(wù)安全之實。2023/7/1519:27:33Saturday,July15,2023相信相信得力量。7月-232023/7/1519:27:337月-23謝謝大家！樹立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識。7月-237月-23Saturday,July15,2023人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。19:27:3319:27:3319:277/15/20237:27:33PM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。7月-2319:27:3319:27Jul-2315-Jul-23加強(qiáng)交通建設(shè)管理，確保工程建設(shè)質(zhì)量。19:27:3319:27:3319:27Saturday,July15,2023安全在于心細(xì)，事故出在麻痹。7月-237月-2319:27:3319:27:33July15,2023踏實肯干，努力奮斗。2023年7月15日7:27下午7月-237月-23追求至善憑技術(shù)開拓市場，憑管理增創(chuàng)效益，憑服務(wù)樹立形象。15七月20237:27:33下午19:27:337月-23按章操作莫亂改，合理建議提出來。七月237:27下午7月-2319:27July15,2023作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)記得牢，駕輕就熟除煩惱。2023/7/1519:27:3319:27:3315July2023好的事情馬上就會到來