藥學中的生物技術和方法2015-1-基因工程和干細胞技術

IV-GeneandstemcelltechnologyGenetechnologyGeneCloneGeneAnalysisandIdentificationGeneTransformationGeneEditingGenecloneGenelibraryGenomicDNAmRNADNAfragmentscDNARestrictionenzymeDNAlibcDNAlibligationligationReversetranscriptionvectorToolsforgenecloneRestrictionendonucleaseDNApolymeraseandDNAligaseVector:plasmidorl-phageHostcellsPCRandRT-PCRPCR(PolymeraseChainReaction)cDNA合成

與

RT-PCRMultipleAnnealingandLoopingBasedAmplificationCycles(MALBAC)forSinglecellgenomicsequencing

高通量DNA測序DNAanalysisI:DNAhybridizationprobeDNAlibpositiveclonesScreeningthegenomiclibraryoftrypanosomacruziDNAanalysisII:實時熒光定量PCR技術（RealTimePCR）DNA測序:基因分析的終極技術第一代第二代第三代第一代：Sanger法（DNA雙脫氧鏈終止法---末端距離分析法）第二代：合成測序法-高通量測序（堿基時序法）左起：謝曉亮、喬杰、閆麗盈、湯富酬2014年9月19日，世界首例經(jīng)MALBAC基因組擴增高通量測序進行單基因遺傳病篩查的試管嬰兒在北京大學第三醫(yī)院誕生，這標志著我國胚胎植入前遺傳診斷技術已處于世界領先水平。2代半：Single-moleculereal-time(SMRT)sequencingtechnology單分子實時測序技術第三代：單分子DNA讀序（納米孔技術）蛋白質(zhì)分析技術和蛋白組學Samplereserve蛋白序列物種轉錄后修飾蛋白質(zhì)相互作用基因?qū)胂到y(tǒng)感受態(tài)細胞：直接轉染載基因質(zhì)粒細胞模型：脂質(zhì)體、電轉染和病毒載體整體動物：病毒載體病毒載體：插入整合型：逆轉錄病毒載體。但其存在潛在的安全性風險；非整合型：慢病毒載體、腺病毒載體脂質(zhì)體轉染法慢病毒轉染法植物細胞的基因轉染基因編輯方法已克隆的基因：PCR法細胞內(nèi)基因：1

：PCR法2

：RNAi基因沉默法3

：sRNA指導定位編輯法PCR基因點突變技術RNAi基因沉默法實用中的shRNA基因沉默技術CRISPR(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats)/Cas9基因編輯技術報告基因技術I：熒光蛋白標簽錢永健，下村修，MartinChalfie報告基因技術II：信號轉導檢測Biotech.forStemcells

干細胞具有自我更新和多能分化能力，主要包括胚胎干細胞(ES)、間充質(zhì)干細