食品微生物快速檢測技術(shù)基礎(chǔ)知識

免疫學(xué)方法一分子生物學(xué)方法二電阻抗法三測試片法四目錄頁食品微生物的常規(guī)檢驗方法，大多數(shù)是以培養(yǎng)活的細(xì)胞生長為手段來達(dá)到檢測目的，耗時、耗力比較麻煩。而現(xiàn)行有效的一些快速檢測方法應(yīng)用起來快速、簡便、準(zhǔn)確，不僅可以大大縮短檢測時間，提高檢出率，并可用于微生物計數(shù)、早期診斷、鑒定等方面。食品中微生物的各種快速檢測技術(shù)雖然不斷涌現(xiàn)，但是不管哪種情況都是為了縮短檢測微生物所用時間，達(dá)到快速檢出食品中微生物的目的。過渡頁免疫學(xué)方法一1.免疫熒光技術(shù)2.酶免疫測定技術(shù)3.免疫印跡技術(shù)（概述）免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)的定義：免疫熒光技術(shù)(ImmunofluorescenceTechnique)是用熒光素標(biāo)記的抗體檢測抗原或抗體的免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù)，又稱熒光抗體技術(shù)。免疫熒光技術(shù)在實際應(yīng)用上主要有

直接法

間接法（概述）酶免疫測定技術(shù)酶免疫測定技術(shù)的定義：酶免疫測定技術(shù)(EnzymeImmunoassay，EIA)是將抗原、抗體特異反應(yīng)和酶的高效催化作用原理有機結(jié)合的一種新穎、實用的免疫學(xué)分析技術(shù)。酶免疫測定技術(shù)分為

液相免疫測定法固相免疫測定法均相法非均相法（較常用）固相免疫測定法的代表技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(EnzymeLinkedImmunosorbentassay),ELISA)。ELISA原理使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性結(jié)合在固相載體上的酶量與撿樣中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)ELISA法可用于檢測食品中沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、軍團菌、大腸桿菌O157等致病微生物。ELISA原理圖（概述）免疫印跡技術(shù)免疫印跡(Immunoblot)技術(shù)綜合了SDS—PAGE的高分辨率及EusA的高敏感性和高特異性，是一種有效的分析手段。疫印跡法分三個步驟：第一，SDS聚丙烯酞胺凝膠電泳(SDS)第二，電轉(zhuǎn)移第三，酶免疫定位過渡頁分子生物學(xué)方法二1.PCR技術(shù)2.實時定量PCR(Real-TimePCR)技術(shù)3.基因探針技術(shù)（概述）PCR技術(shù)PCR(PolymeraseChainReaction)技術(shù)即聚合酶鏈反應(yīng)，也稱無細(xì)胞克隆系統(tǒng)。目前，該技術(shù)已成功應(yīng)用于食品中多種致病菌的快速檢測。（概述）實時定量PCR(Real-TimePCR)技術(shù)

實時定量技術(shù)是近年來發(fā)展起來的新技術(shù)，這種方法既保持了PCR技術(shù)靈敏、快速的特點，又克服了以往PCR技術(shù)中存在的假陽性污染和不能進(jìn)行準(zhǔn)確定量的缺點。另外，還有重復(fù)性好、省力、低費用等優(yōu)點。實時定量PCR技術(shù)基本原理與PCR技術(shù)相同，但定量技術(shù)原理不同。實時定量技術(shù)應(yīng)用了熒光染料和探針來保證擴增的特異性，并且熒光信號的強弱同擴增產(chǎn)物的量成正比，從而準(zhǔn)確定量。（概述）基因探針技術(shù)

基因探針技術(shù)利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補形成穩(wěn)定DNA—RNA或DNA—DNA鏈的原理，采用高度特異性基因片段制備基因探針來識別細(xì)菌。根據(jù)基因探針中核苷酸成分的不同可將其分成DNA探針和RNA探針，一般大多選用DNA探針?；蛱结槞z測技術(shù)的優(yōu)點特異性敏感性基因探針檢測技術(shù)的適用范圍用于檢測無法培養(yǎng)，不能用作生化鑒定、不可觀察的微生物產(chǎn)物以及缺乏診斷抗原等方面的檢測，如腸毒素。用于檢測同食源性感染有關(guān)的病毒病，如檢測肝炎病毒，流行病學(xué)調(diào)查研究，區(qū)分有毒和無毒菌株。檢測細(xì)菌內(nèi)抗藥基因。分析食品是否會被某些耐藥菌株污染，判定食品污染的特性。細(xì)菌分型，包括rRNA分型。過渡頁電阻抗法三（概述）電阻抗法

其原理是細(xì)菌在培養(yǎng)基內(nèi)生長繁殖的過程中，使培養(yǎng)基中的大分子電惰性物質(zhì)如碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂類等代謝為具有電活性的小分子物質(zhì)，如乳酸鹽、醋酸鹽等，這些離子態(tài)物質(zhì)能增加培養(yǎng)基的導(dǎo)電性，使培養(yǎng)基的阻抗發(fā)生變化，通過檢測培養(yǎng)基的電阻抗變化情況，判定細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長繁殖特性，即可檢測出相應(yīng)的細(xì)菌。該法目前已經(jīng)用于細(xì)菌總數(shù)、霉菌、酵母菌、大腸桿菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌等的檢測。該法具有高度的敏感性、快速反應(yīng)性、特異性強、重復(fù)性好的優(yōu)點。過渡頁測試片法四1.以濾紙為載體的測試片2.以冷水可溶性凝膠為載體的測試片3.以無紡布為載體的測試片（概述）以濾紙為載體的測試片

以濾紙作為載體的測試片，原理是細(xì)菌附著在紙片纖維上固定并生長繁殖，來測定食品中污染細(xì)菌數(shù)量的方法。通常制作的方法為：把濾紙裁切成4.0cm×5.0cm大小，以無菌操作方法均勻浸入濾紙片，干燥后分裝入滅菌的聚丙烯塑料袋后密封備用。以濾紙為載體的測試片制作工藝簡單，材料便宜，但濾孔過大，容易雙面有菌落生長而無法準(zhǔn)確計數(shù)。（概述）以冷水可溶性凝膠為載體的測試片美國3M公司生產(chǎn)的測試片是以這一類型為主的產(chǎn)品。

PetrifilmTM系列的微生物檢測測試片，它由上下兩層薄膜組成，下層的聚乙烯薄膜上印有網(wǎng)格并且覆蓋有細(xì)菌生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基，其中加入染色劑、顯色劑，增強菌落的目視效果，上層是聚丙烯薄膜并加入冷水可溶凝膠。TectaTM系列是3M公司研制的致病菌檢測測試片，TecraTM微孔板法基于酶聯(lián)免疫的技術(shù)原理而設(shè)計。使用PetrifilmTM系列微生物菌落總數(shù)測試片操作步驟（概述）以無紡布為載體的測試片

日本Chisso公司的Sanita-Kun和德國R-Biophann公司的RidaCount微生物快速測試片，分別獲得了AOAc的認(rèn)可。它