革蘭氏陰性球菌.課件

第七章革蘭陰性球菌奈瑟菌屬Neisseria醫(yī)學(xué)檢驗系

腦膜炎奈瑟菌N.meningitismeningococcus奈瑟菌屬（Neisseria）奈瑟氏菌屬是一群革蘭陰性球菌，常成雙排列，無鞭毛，無芽胞，有菌毛人類為奈瑟氏菌屬的自然宿主，對人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，兩種細(xì)菌DNA序列有70％的同源性主要區(qū)別點為，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系統(tǒng)疾??；而腦膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。腦膜炎奈瑟菌有多糖成分腦膜炎雙球菌形態(tài)與染色G-，0.6-0.8μm腎形或豆形，成雙排列，凹面相對；病人腦脊液（CSF）中典型，多位于中性粒細(xì)胞內(nèi)；無鞭毛和芽胞；新分離株具有莢膜和菌毛培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)培養(yǎng)特性專性需氧。營養(yǎng)要求高。最常用的培養(yǎng)基是巧克力色培養(yǎng)基生化反應(yīng)可產(chǎn)生自溶酶，人工培養(yǎng)時若不及時移種，數(shù)日后菌體自溶抗原構(gòu)造、抵抗力腦膜炎奈瑟菌鼻咽腔繁殖繁殖入血菌/敗血癥中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要侵犯蛛網(wǎng)膜暴發(fā)型腦膜炎微循環(huán)衰竭、內(nèi)毒素休克、DIC兒童和成人的腦膜炎癥狀微生物學(xué)檢查法標(biāo)本直接涂片鏡檢如鏡下見到中性粒細(xì)胞內(nèi)、外有革蘭陰性雙球菌，即可作出初步診斷分離培養(yǎng)與鑒定巧克力色血瓊脂平板快速診斷法對流免疫電泳SPA協(xié)同凝集試驗?zāi)X膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)革蘭陰性雙球菌,腎形或豆形生物學(xué)性狀形態(tài)染色：G-，呈腎型，成雙排列（凹面相對，凸面相背），有莢膜及菌毛

培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求較高，血平板或巧克力平板或卵黃雙抗平板，形成光滑透明“露滴樣”菌落專性需氧，5~10%CO2，35-37℃（＞40℃＜30℃均不生長）pH7.4~7.6易產(chǎn)生自溶酶生物學(xué)性狀生化反應(yīng)：氧化酶及觸酶（+），分解葡萄糖和麥芽糖抗原和分類：根據(jù)莢膜多糖群特異性抗原的不同可分為13個血清群，根據(jù)膜蛋白不同，各血清群又可分為若干血清型抵抗力：很弱，對熱、冷、干燥和消毒劑極度敏感腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)氧化酶試驗

陽性：紫紅色

陰性：無色生化鑒定（光滑露珠樣菌落）

腦膜炎奈瑟菌的鑒定氧化酶：+DNA酶：-營養(yǎng)瓊脂生長：-葡萄糖：+麥芽糖：+防治原則綜合性預(yù)防措施隔離病人、檢查帶菌者、預(yù)防性投藥，室內(nèi)通風(fēng)流腦疫苗：6個月-2歲接種兩次，間隔1月A群腦膜炎球菌多糖抗原。制備疫苗青霉素、磺胺大劑量治療腦膜炎接種淋病奈瑟菌，淋球菌Gonococcus腦膜炎奈瑟菌

淋病奈瑟菌相似點：生物學(xué)性狀差異：莢膜：有莢膜（腦），分離初期有莢膜（淋）質(zhì)粒：很少有質(zhì)粒（腦），有質(zhì)粒（淋）；所致疾?。阂鹉X膜炎（腦），引起泌尿生殖系統(tǒng)疾?。埽?。感染部位不同，標(biāo)本取材部位不同兩者關(guān)系形態(tài)與染色革蘭染色陰性，0.6-0.8μm腎形、成雙排列有菌毛，無芽胞和鞭毛，新分離株有莢膜男性急性淋病患者尿道分泌物涂片（革蘭染色）男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革蘭染色）女性急性淋病患者陰道分泌物涂片（革蘭染色）培養(yǎng)特性生化反應(yīng)培養(yǎng)特性需氧，營養(yǎng)要求高。常用的培養(yǎng)基為巧克力色血液瓊脂平板生化反應(yīng)除葡萄糖外，不分解其它糖類與腦膜炎奈瑟菌相似，營養(yǎng)要求更高，只能在巧克力平板及專用培養(yǎng)基上生長，形成灰白色細(xì)小S型呈滴露樣菌落主要菌體表面抗原構(gòu)造菌毛與粘附有關(guān)，免疫原性不強脂多糖抗原經(jīng)常變異，相應(yīng)抗體不能防止再感染外膜蛋白PI：主要外膜蛋白，將淋病奈瑟菌分為18個血清型PII：吸附易感細(xì)菌的蛋白致病物質(zhì)菌毛脂多糖（內(nèi)毒素）IgA1蛋白酶所致疾病淋病人類是淋球菌唯一的天然宿主成人淋病絕大多數(shù)通過性接觸感染，是重要的性傳播疾?。╯exuallytransmitteddisease，STD）新生兒淋球菌性結(jié)膜炎“膿漏眼”微生物學(xué)檢查法標(biāo)本保暖（運送時35oC保溫）、保濕、立即送檢直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定巧克力色培養(yǎng)基快速診斷法ELISA法、核酸雜交、PCR技術(shù)

生物學(xué)特性形態(tài)染色：與腦膜炎奈瑟菌相似，G—，雙球菌，咖啡豆?fàn)?，有莢膜和菌毛，無芽胞，無鞭毛

膿汁標(biāo)本中急性病人：細(xì)菌位于中性粒細(xì)胞內(nèi)慢性病人：細(xì)菌位于細(xì)胞外培養(yǎng)特性：與腦膜炎奈瑟菌相似，營養(yǎng)要求更高，只能在巧克力平板及專用培養(yǎng)基上生長，形成灰白色細(xì)小S型菌落生化反應(yīng)：氧化酶（+），只分解葡萄糖，不分解麥芽糖（腦膜炎奈瑟菌分解麥芽糖）等其它糖類抗原及分類：以外膜蛋白抗原分16個血清型抵抗力：極弱（與腦膜炎奈瑟菌相似）淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌鑒定依據(jù)：

1.涂片染色為革蘭陰性雙球菌；2.巧克力平板上為半透明、灰白色、凸起滴露狀菌落；3.氧化酶及觸酶均陽性；4.只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；5.血清學(xué)試驗陽性。防治原則預(yù)防淋病應(yīng)取締娼妓、防止不正當(dāng)?shù)膬尚躁P(guān)系新生兒1%硝酸銀滴眼，或紅霉素、四環(huán)素眼藥膏藥物首選青霉素，但多有耐藥性，應(yīng)用新型青霉素族抗生素腦膜炎奈瑟菌與淋病奈瑟菌比較

小結(jié)化膿性球菌革蘭陽性菌：葡萄球菌，鏈球菌，肺炎鏈球菌革蘭陰性菌：腦膜炎奈瑟菌，淋病奈瑟菌N.gonorrhoeaeN.meningitidisS.pneumoniaestaphylococcusStreptococcus膿汁或喉拭子

涂片、革蘭染色、鏡檢血瓊脂平板觀察菌落特征及溶血情況生化反應(yīng)、致病力試驗及藥敏試驗病原性球菌的鑒別由腦脊液標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)外有G-雙球菌，可初步診斷為腦膜炎球菌由泌尿、生殖系統(tǒng)來源的標(biāo)本中分離出的G-雙球菌，可初步診斷為淋球菌

37℃24h葡萄球菌鑒別

金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌

色素金黃色白色α-溶血素+-血漿凝固酶試驗+-耐熱DNA酶試驗+-甘露醇發(fā)酵試驗+-致病力強弱或無膿汁標(biāo)本找出兩種菌落Gram染色甘露醇發(fā)酵試驗菌落小、半透明、表面光滑、邊緣整齊G+、鏈狀完全溶血乙型鏈球菌不溶血丙型鏈球菌草綠色不完全溶血環(huán)甲型鏈球菌肺炎鏈球菌菊糖發(fā)酵試驗-（紫色）

+（黃色）膽汁溶菌試驗-（混濁）+（澄清）喉拭子標(biāo)本找出兩種菌落Gram染色痰培養(yǎng)肺炎鏈球菌檢驗全程報道姚軍微生物檢驗1.痰涂片（肺炎鏈球菌鏡下）:1.痰涂片（肺炎鏈球菌鏡下）:2.原始培養(yǎng)物18h后菌落（肺炎鏈球菌菌落）:2.原始培養(yǎng)物18h后菌落（肺炎鏈球菌菌落）:3.傳代后的純培養(yǎng)物:3.傳代后的純培養(yǎng)物:傳代后的菌落直徑較首代有些縮小了,菌落濕潤程度也有些降低,但仍然很濕潤.4.Optochin抑制試驗:抑菌環(huán)中也微弱的生長了些菌落,但經(jīng)過涂片發(fā)現(xiàn)是口腔球菌.可能是做該試驗的同事挑菌落的時候,沒把握好.把雜菌帶進去了.盡管如此,抑菌環(huán)還是非常明顯而寬大(22mm).5.生化反應(yīng):用的就是普通微量管,在接種前滴加小牛血清1滴.5%CO2,35℃培養(yǎng)18~24h后讀取并記錄結(jié)果.6.肺炎鏈球菌乳膠凝集試驗：左邊是測試，右邊是陰性對照：

7.藥敏試驗（K-B法）：

7.藥敏試驗（K-B法）：

思考題

一、填空題：

一、填空題：二、是非題：三、選擇題：三、選擇題：三、選擇題：三、選擇題：四、名詞解釋：1、血漿凝固酶2、葡萄球菌A蛋白問答題1、如何從膿汁